СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИАНАФИЛАКТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1995 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается производства антиаллергических и противовоспалительных средств из растительного лекарственного сырья.

Один из наиболее активных антиаллергических и противовоспалительных препаратов, полученных из корня солодки - глицирам. Глицирам представляет собой индивидуальное соединение - тритерпеновый гликозид, полученный из солодкового корня путем многостадийной и длительной очистки с помощью таких сложных и емких технологических операций, как переосаждение и перекристаллизация.

Технологическая схема сложна (около двадцати операций) [3].

Известен способ получения глицирама из корня солодки экстракцией 0,25% -ным водным раствором аммиака в батарее диффузоров с последующими осаждением извлечения концентрированной серной кислотой, центрифугированием и высушиванием осадка.

После получения осадка неочищенного глицирама его извлекают безводным ацетоном многократно, а ацетоновое извлечение переосаждают 25%-ным раствором аммиака (до рН 7,0-7,5), затем промывают осадок и проводят его многократную перекристаллизацию [1].

Однако фармакологический эффект не очень высок (см. табл. 2,3), технологическая схема производства препарата сложна и длительна, при реализации технологической схемы требуются органические растворители, концентрированные кислоты и аммиак, т.е. с точки зрения экологической схема несовершенна.

Глицерам представляет собой индивидуальное соединение. Поэтому в качестве наиболее близкого выбран способ получения экстракта, обладающего противоаллергическим действием путем экстракции лука 45%-ным этанолом. Данный экстракт угнетает аллергическую реакцию 1 типа у животных и у людей [2] . Способ характеризуется недостаточно высокой активностью полученного соединения.

Сущность изобретения в том, что трава солодки голой, являющаяся до сегодняшнего дня отходом при заготовке корня (степень измельченности 0,3 1,0 мм) экстрагируется дистиллированной (очищенной) водой методом бисмацерации при подогревании до 50-60^оС, после чего экстрагент отгоняется до консистенции густого экстракта. Выход целевого продукта 20-25%. Целевой продукт представляет собой густой водный экстракт травы солодки голой коричневого цвета, слегка цапарающего вкуса с очень приятным запахом.

Состав целевого продукта: тpитеpпеновые гликозиды, флавоноиды - в основном группы флаванолов, аминокислоты, водорастворимые витамины, полисахаридный комплекс.

Способ поясняется следующими примерами.

П р и м е р 1. 50,0 г травы солодки голой, измельченной до размера 0,3 мм (сито, изготовленное из шелковой ткани, ГОСТ 4403-77) экстрагировали дистиллированной водой, сначала 400,0 мл, подогревая извлечение до 50^оС. Время экстракции 2 ч. Затем настаивание продолжили в течение 24 ч при комнатной температуре, после чего извлечение фильтровали (через воронку Бюхнера), а сырье повторно экстрагировали 150,0 мл дистиллированной воды, подогревая также до 50^оС в течение 2 ч. Вытяжку отфильтровывали и присоединяли к первой порции. Объединенные сливы упаривали под вакуумом до консистенции густого экстракта (остаточная влажность целевого продукта 25%). Выход целевого продукта в этом случае составлял 11,5 г, т.е. 23%.

П р и м е р 2. 50,0 г травы солодки голой, измельченной до 0,5 мм (сито, изготовленное из тканой сетки с квадратными ячейками, ТУ 14-4-1063-80), заливали 400 мл дистиллированной воды, подогревая извлечение до 55^оС 2 ч. Затем настаивание продолжали еще 24 ч, но уже при комнатной температуре. Извлечение отфильтровывали 150,0 мл дистиллированной воды 2 ч также при 55^оС. Вытяжку фильтровали и присоединяли к первой порции. Объединенные сливы упаривали под вакуумом до консистенции густого экстракта (остаточная влажность целевого продукта составила 25%). Выход целевого продукта в этом случае составлял 12,5 г, т.е. 25%.

П р и м е р 3. 50,0 г травы солодки голой, измельченной до 1,0 мм (сито, изготовленное из решетного полотна, ГОСТ 214-83), заливали 400,0 мл дистиллированной воды, подогревая вытяжку 2 ч при 60^оС, затем настаивали в течение 24 ч уже при комнатной температуре, после чего вытяжку отфильтровывали, а сырье повторно экстрагировали 150,0 мл воды, также при подогреве в течение 2 ч при 60^оС. Затем отфильтровывали извлечение и присоединяли к первой порции. Объединенные сливы упаривали под вакуумом до консистенции густого экстракта (остаточная влажность целевого продукта 25%). Выход целевого продукта в этом случае 11,0 г, т.е. 22%.

Таким образом, на выход целевого продукта влияют степень измельченности сырья и температурный фактор при экстракции.

Полученные результаты с учетом запредельных значений параметра иллюстрируется табл.1.

Таким образом, оптимальными параметрами следует считать степень мелкости 0,3-1,0 мм и температуру 50-60^оС.

Пpоверку антиаллергического действия полученного целевого продукта и прототипа проводили на модели реакции пассивной кожей анафлаксии: сыворотку, содержащую специфические гомоцитотропные антитела, получали на 3-ей неделе после сенсибилизации мышей линии СВА овальбумином (0,5 мкг) с гидроокисью алюминия (2,5 мг/мышь) (4). Полученную сыворотку в разведении 1:200 вводили внутрикожно в количестве 50 мкл в 6 выстриженных участков кожи спины белых крыс-самцов линии Wistar (160-180 г). Через 24 ч крысам внутривенно вводили разрешающую дозу овальбумина (1 мг/кг) в 1 мл 0,5%-ного раствора красителя синего Эванса на физиологическом растворе. Спустя 30 мин крыс под эфирным наркозом декапитировали, кожу выворачивали, прокрашенные участки вырезали и экстрагировали краситель формамидом при 37^оС в течение 4 сут. Количество красителя в экстравазате определяли спектрофотометрически при 600 нм по калибровочному графику [8].

Исследуемое фитосредство вводили крысам перорально в дозе 50 мг/кг за 90 мин до разрешающей дозы антигена.

В качестве объекта сравнения использовали аналог по происхождению - глицирам, который вводили животным в той же дозе аналогичным способом. Контрольным крысам перорально вводили по 1 мл растворителя (дистиллиpованная вода). Процент ингибирования РПКА вычисляли по формуле
A = 100 - где А - процент ингибирования РПКА;
С - количество (в мкг) красителя синего Эванса в участках кожи крыс, получавших препарат;
В - количество (в мкг) красителя синего Эванса в участках кожи контрольных крыс.

Результаты опытов обработаны статистически с помощью непараметрических критериев статистики и t - критерия Стъюдента и представлены в табл.2 в виде средних значений ± средняя квадратическая ошибка среднего значения [4] .

Определение противовоспалительной активности целевого продукта и прототипа проводили с помощью методов, регистрирующих способность препарата изменять интенсивность и время возникновения отека [7].

Опыты проводили на беспородных белых крысах. Воспалительный отек вызывали субплантарным введением 10%-ного раствора каолина [6]. Время наблюдения выбирали, исходя из свойств флотогенного агента, который вводили в асептических условиях.

Сравнительное противовоспалительное действие целевого продукта (изменение объема лапки крысы по отношению к исходному ее объему в процентах) представлено в табл.3.

Из табл.3 видно, что эффект, вызываемый целевым продуктом, выше, чем у глицирама.

Определение острой токсичности и расчеты LD₅₀ осуществляли по методу Кербера. Белым мышам массой 18-20 г в желудок с помощью зонда вводили по 0,5 мл раствора фитосредства в различных дозах с определенными интервалами. На каждую дозу в опыте брали по 6 мышей. В ходе эксперимента наблюдали за изменением поведенческих, нервно-мышечных и вегетативных реакций. Острую токсичность оценивали по летальному исходу животных. Наблюдение за состоянием животных проводили в течение 2 недель. Все опыты проведены в соответствии с рекомендациями фармакологического комитета МЗ СССР по изучению общетоксического действия новых фармакологических средств. В результате установлено, что LD₅₀ фитосредства из травы солодки голой равна 4666 ±390,8 мг/кг, что согласно классификации токсичности позволяет отнести препарат к практически нетоксичным соединениям [5].

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить препарат, обладающий высокими антианафилактическим эффектом на уровне современных химиотерапевтических препаратов, а также противовоспалительным действием.

1. Авторское свидетельство СССР N 126762, кл. А 61 К 35/78, 1983.

2. Заявка ФРГ N 3305951, А 61 К 35/78, 1983.

3. Степанова Э.Ф. Биотехнологические исследования по безотходному использованию солодки. Дисссерт.докт.фарм.наук - Харьков, 1990, с.304.

4. Стрелков Р. Б. Экспресс метод статистической обработки экспериментальных и клинических данных. М./ 1969.

5. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ: Методические рекомендации. М/ 1985/ с. 20.

6. Тринус Ф.П./ Мохорт Н.А./ Клебанов В.М. Нестероидные противовоспалительные средства - Киев/ "Здоровье"/ 1975/ с. 240.

7. Чернух А.М./ Воспаление /очерки патологии и экспериментальной терапии// М.: Медицина/ 1979/ с. 448.

8. Lykke A.W., Cummings B., Brit J. Exp. Prth., 1969, x.50, p.309-318.

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения фитосредства, обладающего антианафилактическим действием. Сущность способа заключается в экстракции измельченной до 0,3 - 1,0 мм травы солодки голой водой путем настаивания в течение 28 ч с последующим сгущением до густого экстракта. Технический результат предложения заключается в получении препарата, обладающего специфической активностью на уровне современных противоаллергических химио-препаратов. 3 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИАНАФИЛАКТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, путем экстракции растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют надземную часть солодки голой (glycyrrhiza glabrae L. ), измельченную до 0,3-1,0 мм, а экстракцию осуществляют водой путем настаивания в течение 28 ч с последующим сгущением до консистенции густого экстракта.