СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИАНАФИЛАКТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1995 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицинской и фармацевтической промышленности и касается получения нового противоаллергического средства из плодов софоры японской.

Известен способ получения противоаллергического фитосредства путем экстракции лука репчатого 45%-ным этанолом. Данное средство угнетает анафилактические реакции у человека и животных.

Известно, что ряд флавоноидов, в том числе кверцетин, рутин, кемферол, софорикозид, генистеин и др. , обладает противоаллергическим свойствами, поэтому целесообразным является создание суммарного препарата с максимально возможным содержанием флавоноидных соединений.

Целью данного изобретения является разработка способа получения фитосредства из плодов софоры японской, содержащего максимально возможное количество извлеченных из сырья флавоноидов, обладающего выраженным противоанафилактическим действием.

Для этого плоды софоры японской подвергаются обработке в водном растворе этилового спирта импульсами напряжения косоугольной формы в экстракционной камере, изготовленной из полиэтилена объемом 500 мл, с регулируемой длительностью от 0,5 до 1,2 мкс и частотой следования γ = =2 имп/с.

На фиг.1 изображена экстракционная камера; на фиг.2 - схема генератора Аркадьева - Mаркса для получения импульса напряжения; на фиг.3 - типичная осциллограмма пробоя при экстракции.

На фиг. 1 показаны высоковольтный электрод 1, крышка 2, корпус 3 экстракционной камеры, заземленный электрод 4, экстрагент 5 и обрабатываемое сырье 6.

Энергия импульса напряжения рассчитывается по формуле и выбирается из соотношения 65 Дж ≅ W ≅ 80 Дж, где W = 0,4x x10¹⁰ U_n - L (1,55-0,7) ˙С (0,3) ˙ l (0,6), где U_n - пробивное напряжение; L - индуктивность контура; С - емкость генератора в ударе; l - межэлектродный промежуток. Для получения импульса напряжения использован генератор Аркадьева-Маркса от 10 до 50 кВ (фиг.2).

Полученный экстракт тотчас же освобождают от измельченных плодов, упаривают до 1/3 объема, охлаждают. Выпавший осадок перекристаллизовывают из 60% кислоты.

П р и м е р 1. 50,0 г воздушно-сухих плодов софоры японский, собранных в октябре месяце (когда в плодах в максимальном количестве содержатся гликозиды кверцетина, кемпферола и генистеина), замачивают на 10-15 мин, в 55-60% -ном этаноле при соотношении сырья и экстрагента 1:7, после чего подвергают обработке электроимпульсными разрядами, длительность которых составляет 52 мин, при пробивном напряжении 22,4 кВ. Выход экстрактивных веществ составляет 26%. Экстракт упаривают до 1/3 первоначального объема и охлаждают до (+1)-(+5)^oC 24 ч. Выпавший осадок отделяют и перекристаллизовывают из 55-60% уксусной кислоты. Выход суммы флавоноидов составляет 3-5% от массы взятых плодов.

П р и м е р 2. Экстракцию проводят аналогичным образом, соотношение сырья и экстрагента 1:5, при напряжении 2,0 кВ в течение 17 мин. Выход экстрактивных веществ составляет 20%, выход суммы флавоноидов - 2-3% от массы взятых плодов.

П р и м е р 3. Экстракцию проводят аналогичным образом, соотношение сырья и экстрагента 1:10, напряжение 24,5 кВ в течение 34 мин. Выход экстрактивных веществ составляет 20%, выход суммы флавоноидов - 3-4%.

Обоснование выбора параметров приведено в табл.1 и 2.

Увеличение времени обработки сырья приводит к увеличению выхода балластных веществ, от которых трудно освободиться при перекристаллизации. Наибольший выход экстрактивных веществ и, следовательно, флавоноидов наблюдается при величине пробивного напряжения 22,4-23 кВ и обработке сырья от 45 до 52 мин.

Наибольший выход экстрактивных веществ при использовании соотношения сырье: cпирт 1:7. Оптимальная концентрация спирта 55-60%, так как при этой концентрации наблюдается наилучшая растворимость суммы флавоноидов из плодов софоры японской, в частности софорикозида (4'-0-β-D-глюкопиранозида генистеина).

Полученный препарат светло-желтого цвета представляет собой сумму флавоноидов, основными компонентами которой являются генистеин, софорикозид, кемпферол-3-cофорикозид, рутин, кверцетин, кемпферол. В зависимости от места и времени сбора в препарате могут содержаться софорикозид (гликозид генистеина) и пеонин (гликозид кемпферола), что не оказывает существенного влияния на проявление противоаллергического действия.

Изучение противоаллергической активности предлагаемого препарата проводили на модели реакции пассивной кожной анафалаксии (РПКА) у крыс, опосредованной IgЕ-антителами. Данная экспериментальная модель наиболее часто используется для поиска и выявления соединений с антиаллергическими свойствами, так как объективно отражает последовательную цепь патологических изменений, происходящих в организме при реакциях гиперчувствительности немедленного типа.

Сыворотку, содержащую специфические гомоцитотропные антитела, получали на третьей неделе после сенсибилизации мышей линии СВА овальбумином (0,5 мкг) с гидроксидом алюминия (2,5 мг/мышь). Полученную сыворотку в разведении 1:200 вводили внутрикожно в количестве 50 мкл в 6 выстриженных участков кожи спины белых крыс-самцов линии Wistar (160-180 г). Через 24 ч крысам внутривенно вводили разрешаемую дозу овальбумина (1 мг/кг) в 1 мл 0,5%-го раствора красителя синего Эванса на физиологическом растворе. Спустя 30 мин, крыс под эфирным наркозом декапитировали, кожу выворачивали, прокрашенные участки вырезали и экстрагировали краситель формамидом при 37^oC в течение 4 сут. Количество красителя в экстравазате определяли спектрофотометрически при 600 нм по калибровочному графику.

Предлагаемый препарат вводили крысам в дозе 100 мг/кг по 1 мл зондов в желудок в виде суспензии, приготовленной на дистиллированной воде с добавлением 1 капли твина-80. Контрольным крысам тем же способом вводили растворитель (дистиллированную воду) с каплей твина-80. Процент ингибирования реакции вычисляли по формуле А = 100- где А - процент ингибирования РПКА; С - мкг синего Эванса в участках кожи крыс, получавших препарат; В - мкг синего Эванса в участках кожи контрольных крыс.

Результаты экспериментов обработаны статистически и представлены в табл.3.

Определение острой токсичности и расчеты LD₅₀ осуществляли по методу Кербера. Белым мышам массой 18-20 г в желудок с помощью зонда вводили по 0,5 мл суспензии препарата, приготовленной с 1 каплей твина-80. На каждую дозу в опыте брали по 6 мышей. В результате установлено, что LD₅₀ равна более 1500 мг/кг. Согласно классификации препарат относится к практически нетоксичным.

Таким образом, предлагаемый способ получения фитосредства из плодов софоры японской отличается от прототипа более высоким содержанием флавоноидных соединений в конечном продукте за счет использования электроимпульсной обработки сырья и экстрагента другой концентрации, что позволило получить препарат с выраженной противоаллергической активностью.

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения средства, обладающего антианафилактическим действием. Сущность изобретения: способ включает экстракцию плодов софоры японской 55 - 60%-ым этанолом при соотношении сырье: экстрагент, равном 1:7, с последующей обработкой экстракта электроимпульсными разрядами продолжительностью 50 - 52 мин и напряжением 22,4 - 23,0 кВ. Технический результат: повышение специфической активности до уровня современных химиотерапевтических препаратов, обладающих противоаллергическим действием. 3 ил., 3 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИАНАФИЛАКТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ путем экстракции растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют плоды софоры японской Sophora japonical, экстракцию проводят 55 - 60%-ным этанолом при соотношении сырье: экстрагент 1 : 7 с последующей обработкой экстракта электроимпульсными разрядами продолжительностью 50 - 52 мин и напряжением 22,4 - 23,0 кВ.