ШТАММ ВИРУСА ГРИППА B (СЕМИПАЛАТИНСК) 151/91 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 1995 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для получения диагностикума вируса гриппа.

Изменчивость вируса гриппа В происходит в естественных условиях постоянно. Вирус гриппа В претерпевает изменения в структуре основных поверхностных компонентов: гемагглютинина (ГА) и нейраминидазы (NA), которые носят характер антигенного дрейфа.

Эпидемии вируса гриппа В возникают периодически, с интервалом в 2-3 года, различаясь по масштабу, продолжительности и уровню заболеваемости.

В последние годы наблюдается значительная интенсификация эпидемической активности вируса гриппа В: отмечены более высокие показатели общего уровня заболеваемости среди населения и особенно среди деталей, возрос процент городов страны, увеличились продолжительность эпидемий и максимальная заболеваемость за неделю. Кроме того, регистрируется тенденция к более тяжелому клиническому течению гриппа В.

Предлагаемый штамм В/Семипалатинск/151/91 представляет собой дрейф-вариант вируса В/Ямагата/16/88.

Новый штамм выделен от больного гриппом человека на культуре клеток МДСК с дальнейшим пассированием на куриных эмбрионах в период эпидемии гриппа 1991 г. в г. Семипалатинске и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д.И.Ивановского (депозит ГКБ N:2294).

Целью изобретения является получение штамма вируса гриппа В/Семипалатинск/151/91, обладающего специфической иммуногенностью, позволяющего использовать его для приготовления диагностических препаратов с целью идентификации и изучения антигенной структуры гемагглютининов (ГА) вновь выделенных вирусов гриппа.

Анализ антигенного состава ГА эпидемического вируса В/Семипалатинск/151/91 проводили с набором безынгибиторных кроличьих сывороток к эталонным вирусам гриппа В 1940-1988 гг и с моноспецифическими антителами (МСА) к отдельным антигенным детерминантам вируса гриппа В, полученных методом специфической иммуноадсорбции. Результаты изучения антигенной структуры приведены в табл.1-3.

В табл.1 приведены результаты исследования в РТГА выделенного изолята. Как видно из таблицы, в РТГА с безынгибиторными кроличьими сыворотками к эталонным вирусам гриппа 1940-1988 г.г. казахстанский штамм активно реагировал с иммунной сывороткой к вирусу В/Ямагата/16/88, что свидетельствовало об их близком антигенном родстве.

Для определения антигенных сайтов были изучены популяции антител к иммунодоминантным участкам ГА вируса В/Семипалатинск/151/91.

В табл. 2 представлены результаты исследования антисыворотки к изучаемому штамму. Как видно из полученных результатов, сыворотка к вирусу гриппа В/Семипалатинск/151/91 в высокой степени реагировала со штаммом В/Ямагата/16/88 и в меньшей степени с вирусами В/Лион/1847/79 и В/Виктория/2/87. При адсорбции антисыворотки вирусами В/Лион/1847/79 и B/Виктория/2/87 сыворотка утратила свою гемагглютинирующую активность к вирусам, взятым для адсорбции, но активно реагировала со штаммом В/Ямагата/16/88, что свидетельствовало об общей антигенной детерминанте у этих вирусов. Адсорбция антисыворотки вирусом В/Ямагата/16/88 приводила к утрате антигемагглютининов ко всем использованным к реакции вирусам, кроме гомологичного. Таким образом, в антигенной структуре изучаемого изолята В/Семипалатинск/151/91 содержится оригинальный антигенный компонент, характеризующий его специфичность, условно обозначенный нами как Ш19.

Для получения наиболее полной информации об антигенных детерминантах на молекуле ГА вируса гриппа В/Семипалатинск/151/91, были использованы моноспецифические антитела (МСА) к отдельным сайтам ГА (табл.3).

На основании представленных результатов было установлено наличие в ГА исследованного изолята трех иммунологически значимых антигенных детерминант: антигенно стабильной, присущей всем изученным вариантам серотипа В (Т1)-типоспецифической, группоспецифической-характеризующей родство вариантов, изолированных на протяжении близких лет, штаммоспецифической - наиболее лабильной, определяющей штаммовую специфичность варианта.

Как видно из полученных результатов, вариант В/Семипалатинск/151/91 является дрейф-вариантом от эталонного штамма В/Ямагата/16/88, сохраняя с ним родство по двум сайтам, содержит качественно новую штаммоспецифическую детерминанту, не встречавшуюся ранее у вирусов гриппа В 1940-1988 г.г. и обозначенную нами как Ш19.

Адаптационные свойства.

Выделенный от человека вирус В/Семипалатинск/151/91 репродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной (35оС) температуре до инфекционного титра 6,5 lg ЭИД₅₀/0,2, титр гемагглютинации 1:320.

Свойства агглютинации.

Вирус обладает узким спектром агглютинации эритроцитов различных видов животных. Он широко агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах - морской свинки и свиньи, не взаимодействует с эритроцитами барана, мыши, кролика.

Терморезистентность.

Предлагаемый вирус обладает термостабильным гемагглютинином, разрушающимся после 4 ч при 56^оС.

Ингибиторочувствительность.

Исследуемый штамм проявляет чувствительность к ингибиторам нормальных нативных сывороток кролика (1:80), крупного рогатого скота (1:640), барана (1:80), мыши (1:40).

Адсорбционно-элюирующая активность.

Новый штамм обладает высокой адсорбционной способностью по отношению к эритроцитам кур (95-100% ) и более низкой (50%) элюирующей активностью с куриных эритроцитов.

К выделенному изоляту В/Семипалатинск/151/91 была получена кроличья иммунная сыворотка. Иммунизацию осуществляли в течение 4 недель: в первую неделю вводили 3 дня подряд внутривенно по 1 мл антигена; перерыв 4 дня; во вторую неделю: 1-й день недели внутрибрюшинно, 2-й и 3-й день внутривенно по 1 мл антигена; перерыв 4 дня; в третью и четвертую неделю - так же, как во вторую.

На 9-11-й день после последнего введения антигена у кролика брали кровь. Иммунную сыворотку освобождали от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы из нехолерного вибриона.

Титр иммунной сыворотки в РТГА с гомологичным антигеном составил 1: 2560-1: 10000 с гетерологичным антигеном вируса гриппа человека А реакция отрицательна.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа В, изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в вирусологической практике для идентификации вновь выделенных штаммов, изучения популяционного иммунитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа в природе и установления процесса дальнейшей изменчивости ГА - основного иммуногенного компонента вируса гриппа.

Штамм вируса грипп В / Семипалатинск / 151 / 91 представляет собой дрейф-вариант вируса В/Ямагата/16/88. Выделенный от человека вирус D / Семипалатинск / 151 / 91 репродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной (35°С) температуре до инфекционного титра титр гемагглютинации 1: 320. Штамм депонирован в государственной коллекции вирусов за номером N2294. Предлагаемый штамм обладает узким спектром агглютинации эритроцитов различных видов животных. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур и человека, в низких титрах - морской свинки и свиньи, не взаимодействует с эритроцитами барана, мыши, кролика. Штамм обладает термостабильным гемагглютинином, разрушающимся после 4 ч при 56°С . Наряду с наличием в гемагглютинине штамма вируса гриппа В/Семипалатинск/151/91 общих антигенных детерминант с эталонным вирусом В/Ямагата/16/88 - Т1 и Г5 был выявлен качественно новый оригинальный антигенный компонент, характеризующий специфичность штамма. Штамм вируса гриппа В/Семипалатинск/151/91 может быть использован для производства диагностических препаратов, предназначенных для идентификации вновь выделенных вирусов гриппа и обнаружения антител. 3 табл.

ШТАММ ВИРУСА ГРИППА B (СЕМИПАЛАТИНСК) 151/91 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ.

Штамм вируса гриппа В (Семипалатинск) 151/91 ГКВ 2294 для приготовления диагностических препаратов.