Штамм VIRUS INFLUecNZa А/Алма-Ата/215/88 для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к-вирусологии, в частности для получения диагностикума вируса гриппа.

Цель изобретения - штамм вируса гриппа A(H3N2), обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов для идентификации вновь выделяемых вирусов гриппа.

Пример 1. Антигенную структуру штамма изучают согласно рекомендациям ВОЗ и РТГА и РПН А с использованием набора поликлональных крысиных сывороток к эталонным штаммам (А (H3N2), к рекомбинатным вирусам гриппа СДС-18(Нед 1N2), Р-17 (Нед 1N2) и Е qlne -А(Бангкок) 1/79 (Нед 1N2). Кроме того, в иммунологическом анализе применяют моноспецифические антитела к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина. Дополнительно проводят тонкий иммунологический анализ штамма в РТГА с моноклональными антителами к вирусам А (Бангкок) 1/79 и А(Филлипины)2/82(НЗН2).

Результаты изучения антигенной структуры представлены в табл. 1-5.

Штамм А(Алма-Ата)215/88 обладает определенной широтой антигенного спектра, взаимодействует с сыворотками к зталонным вариантам А(Филиппины) 2/82, А(Миссисипи) 1 /85, А(Виктория) 7/87 иА(Сычуань} 2/87 дй 1/2 гомологичного титра.

Использование в иммунологическом анализе монорецепторных сывороток к отдельным детерминантам гемагглютинина. полученных методом специфической адсорбции, дало возможность получить объективную оценку антигенной новизны

выделенного варианта вируса Опыты показали, что в составе гемагглютинина предлагаемого штамма (8.10.14) имеются общие антигенные маркеры с вирусами А(Бангкок) 1/79 (7.8,10) и А(Миссисипи) 1/85 (7.10.14) в оригинальном, ранее не встречавшемся сочетании. Приведенные результаты подтверждены серологическим обследованием иммунной крысиной сыворотки анти-А-(Алма-Ата) 215/88, которая реагировала с вирусами А(Бангкок) 1/79. и А(Миссисипи) 1/85 до 1/8 гомологичного титра.

Применение в дальнейшем моноклональных антител к эталонам А(Бангкок) 1/79 и А(Филиппины) 2/82 подтвердило и детализировало своеобразие нового штамма. Штамм А (Алма-Ата) 215/68 взаимодействовал с 5 из 8 моноклональных антител к А(Бангкок) 1/79 и лишь с 1 из 12 к вирусу А(Филиппины)2/82, в то время как изолированный в эту же вспышку штамм А(АлмаАта) 186/88 реагировал со всеми указанными моноклональными препаратами.

Адаптационные свойства. Выделенный от человека вирус А(Алма-Ата) 215/88 репродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной (37°С) температуре до инфекционного титра 4-5 ig ЭИД5о/0,2 мл. Штамм обладает низкой гемагглютинирующей (1:32-1:128) и достаточно высокой иммуногенной активностью (Т-640),

Свойства агглютинации. Вирус обладает узким спектром агглютинации эритроцитов различных видоа животных. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах - морской свинки и свиньи и не взаимодействует с эритроцитами барана и мыши.

Терморезистентность (Тбб-прмзнак). Предлагаемый вирус обладает термочувствительнцм гемагглютинином, гемагглютииирующая активность штамма А(Алма-Ата) 215/88 резко снижается в результате прогревания при 5б°С в течение 1ч.

Ин™биторочувствительность. Исследуемый штамм проявляет чувствительность к термолабильным -ингибиторам сыворотки крови свинец, овец, человека, мышей, кролика, кур и морских свинок. Резистентен по отношению к сывороточным термостаб лльным у -игибиторам крупного рогатого скота, овец, мышей и морской свинки.

Адсорбционно-элюирующая активносгь. Штамм А(Алма-Ата) 215/88 (H3N2) обладает высокой адсорбирующей активностью (до 100%) по отношению к эритроцитам кур и в незначительной степени (до 1/16 исходного титра) элюирует с них после прогревания при 37°С в течение 1-4 ч.

Патогенные свойства. Штамм А(АлмаАта) 215/88 проявляет слабопатогенные свойства для белых мышей.

Штамм, выделенный от человека, предназначен для производства гриппозного антигена, который может быть использован при серологической диагностике. С этой целью штамм размножают путем заражения 9-10-дневных куриных эмбрионов и в аллантоисную полость.

П р и м е р 2. Лабораторные животные -. белые крысы. Схема иммунизации. Иммун- ные сыворотки получают в результате 4кратной внутрибрюшинной иммунизации

0 белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом. Животных обескровливают через 10 дней после последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифиче5 ских ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы из нехолерного вибриона.

Титр иммуной сыворотки данного препарата в РТГА с гомологичным антигеном

0 составляет. 1:640, с гетерологйчным антигеном вируса гриппа человека А (H1N1) реакция отрицательна.

Исследование антигенной структуры гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Ал5 ма-Ата) 215/88 в РТГА приведено в табл. 1. Анализ в РТГА иммунной сыворотки к штамму вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 приведен в табл.2.

Изучение антигенных взаимосвязей

0 штамма вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 с моноклональными антителами приведено в табл.3.

Исследование антигенной структуры иейраминидазы штамма вируса гриппа

5 А(Алма-Ата) 215/88 в РПНА приведено в табл.4.

Исследование состава антигенных детерминант гемагглютинмна штамма вируса гриппа А(Алма-Ата) 215/88 методом специфической иммуиоадсорбции приведено в табл.5.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа A(E3N2), изолированный от 5 человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в вирусологической практике для идентификации вновь выделенных штаммов и изучения популяционного иммунитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа в природе, за процессом изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.

Формула изобретен и я Штамм Virus Influenza А(Алма-Ата) 215/88 ГКВ IVfe 2190 для приготовления диагностических препаратов.

Таблица 1

Изобретение относится к вирусологии, в частности к получению диагностикума вируса гриппа. Целью изобретения является штамм вируса гриппа А (H3N2). обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов для идентификации вновь выделяемых вирусов гриппа. Указанная цель достигается использованием штамма А(Алма-Ата) 215/88, обладающего широким антигенным сИектром и взаимодействующего с сыворотками и эталонным штаммом А (Филиппины) 2/82, А(Миссисипи) 1 /85, А(Виктория)7/87 и А(Сы- чуань)2/87. Штамм пригоден для получения соответствующих гипериммунных сывороток, 5 табл.

)8/34 Л(СССР) 090/77 А(Синг5пур) 57 А(Го(КОнг) 1/68 .А(Порт-Ча/:мерс) 1/73 1А(8ик7Ория} 3/7Е 1А(Тзх8с) 1/77 |.ч(5э:ггко«) 1/79 ;А{Фи;1г/1Ппмны)2/82 i А{Кеи) 1 /34 А(СССР)2/85 А(Ми;сисипи) 1/85 А(ЛеьингрйА) 360/36 А{Вик10р;1я) 7/87 ,А.{Сычуань)2/87. i EtiL MlE2/,Ii Здесь и в последующ Примечание обратных сел чинах

Таблица 2

Иммунные сыворотки к виоусам-рекомбмнзнтам

рГТо

Р-7

СДС-18

Р-17

Equine -А(Бан| ШЕ1-1 1,.

Таблица 3

Таблица 4