СРЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНУЮ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ МИКСОВИРУСА Российский патент 1995 года по МПК C12N7/04 

Изобретение относится к вирусологии, а именно к средствам инактивации вирусов, например миксовирусов, и может быть использовано для лечения вирусной инфекции и подавления размножения вируса в месте его внедрения, что открывает возможности применения средства как в медицине, так и в ветеринарии.

В настоящее время проводятся интенсивные исследования по разработке химиопрепаратов для профилактики и лечения вирусных инфекций. Однако пока арсенал эффективных противовирусных средств крайне мал.

Мало изучены также источники природной смеси веществ, обладающих противовирусной активностью, а именно водные экстракты, получаемые из ряда растений (багульник болотный, пустырник обыкновенный, чистотел большой, черная смородина, брусника, черника обыкновенная, зверобой продырявленный, календула лекарственная, пижма обыкновенная, ромашка аптечная, тысячелистник обыкновенный, девясил высокий).

Такие экстракты обладают в той или иной степени вирулицидной активностью, характеризующейся падением титра от 2,0 до 6,5 lg от исходной активности вируса.

Известно средство [1] проявляющее противовирусную активность в отношении гриппа А₂, представляющее липид из наперстянки красной и реснитчатой, обладающий значительным вирулицидным действием в опытах in vitro и обеспечивающий 100% -ную выживаемость мышей при заражении их вирусом гриппа в дозе 1,10 и 100 ЛД₅₀.

Вируснейтрализующее действие препаратов было изучено на модели куриных эмбрионов в отношении вируса гриппа штамм А (Англия) в дозах 2 мг/эмбрион, 0,125 мг/эмбрион и 0,0075 мг/эмбрион.

Известен ингибитор вирусов [2] представляющий собой сок каланхое, который вносят в воду (на 1 л воды 1 мл сока). Определение вирусов в воде до и после обработки ее соком каланхое проводят в культурах клеток количественным методом по бляшкообразованию.

Целью изобретения является расширение ассортимента средств, проявляющих противовирусную активность в отношении вируса гриппа А.

С этой целью применяют эраконд экстракт растительный конденсированный.

Экстракт растительный конденсированный (эраконд) представляет собой препарат, полученный из люцерны (сена люцерны), обработанный экстрагентом, содержащим в своем составе растворимые соли металлов, мг на 1 кг растительной массы, например, в следующем соотношении: Mo 8,0; Ba 10,0; Pb 20,0; Co 1,05; V 1,0; Cz 0,5; Zn 200,0; Fe 300,0; Sn 40,0 (способ получения и состав препарата защищены патентом СССР заявка N 4736234/30-15, по которой получено положительное решение).

Беспородным белым мышам, составляющим опытную группу в количестве 13 голов, интраназально вводили по 0,02 мл 15%-ного раствора эраконда.

Вируссодержащую суспензию готовили путем заражения 11-дневных куриных эмбрионов вирусом гриппа А (PR8) 1/34 (HON1), адаптированным к мышам, и использовали для интраназального заражения мышей в дозе 10 тыс. ЭИД₅₀/0,2 мл.

На второй день после заражения и ежедневно в течение шести дней мышам вводили интраназально эраконд. Контрольных мышей в количестве 13 голов заражали аллантоисной вируссодержащей жидкостью в той же дозе, что и опытных мышей.

Результаты учитывали по дням с момента заражения вирусом. В опытной группе на 5 сут пало 3 головы, на 6 сут голов. Остальные 5 голов (38,4%) выжили.

В контрольной группе на 2 сут пало 2 головы, на 5 сут пали остальные.

3% -ный раствор эраконда в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно мышам опытной группы (13 голов), зараженным вирусом гриппа А (PR8) 1/34. Эраконд вводили двукратно на 2 и 4 сут после заражения их вирусом в дозе 10 тыс. ЭИД₅₀/0,2 мл. Инфицированным животным контрольной группы (13 голов) на 2 и 4 сут. вводили внутрибрюшинно физиологический раствор по 0,5 мл.

В опытной группе на 5 сут. пало 3 головы, на 6 сут. 3 головы, остальные 7 голов (53,8%) выжили.

В контрольной группе на 5 сут. пало 2 головы, на 6 сут. пали остальные животные.

При интраназальном и внутрибрюшинном введении эраконда подавлялась репродукция вируса гриппа в легких инфицированных мышей.

В первом случае на 2,4 и 6 сут. после заражения содержание вируса гриппа равнялось соответственно 5,0, 3,5 и 3,0, а во втором 3,5, 1,5 и 1,5 lg ЭИД₅₀.

В легких мышей контрольных групп инфекционный титр вируса гриппа равнялся 6,0 6,5 lg ЭИД₅₀.

Вирулицидную эффективность раствора эраконда изучали на модели вируса гриппа.

Материалы и методы: вирус гриппа А (Сычуань) 2/87 (H3N2) с инфекционным титром 10^8,0 lg ЭИД₅₀/0,2; десятидневные куриные эмбрионы; тест индикации вируса гриппа РГА с 1%-ными куриными эритроцитами; растворы эраконда 1-, 3-, 5- и 10% -ный. Время контакта вируса гриппа (аллантоисная вируссодержащая жидкость) с растворами эраконда in vitro 60 мин.

Результаты: в конечной концентрации 5 и 10%-ный раствор эраконда полностью анактивировал 100 млн. эмбриональных инфекционных доз (ЭИД₅₀) вируса гриппа.

Таким образом, можно сделать следующее заключение: раствор эраконда в концентрации 5% и 10% полностью инактивировал in virto в течение 60 мин вирус гриппа (штамм А Сычуань) (H3N2) с инфекционным титром 10^8,0 lg ЭИД₅₀/0,2.

Концентрации эраконда 1-3% не полностью анактивируют вирус гриппа.

Интраназальная аппликация раствора эраконда животным, зараженным вирусом гриппа в летальной дозе, способствовала выживаемости их в 1,6 раза выше, чем в контроле. При внутрибрюшинном введении эраконда животным, зараженным вирусом гриппа в летальной дозе, выживаемость была выше в 2,1 раза, чем в контроле.

Использование: вирусология, а именно средства инактивации вирусов. Сущность изобретения: для этого применяют эраконд - экстракт растительный конденсированный. Раствор эраконда в концентрации 5% и 10% полностью инактивировал in vitro в течение 60 мин вирус гриппа /штаммА/ Сычуань/ - НЗn2/ с инфекционным титром 10^8,0lg ЭИД_50/0,2. Концентрация эраконда 1-3% не полностью инактивируют вирус гриппа. Интраназальная аппликация раствора эраконда животным, зараженным вирусом гриппа в летальной дозе, способствовала их выживаемости в 1,6 раза выше, чем в контроле. При внутрибрюшинном введении эраконда животным, зараженным вирусом гриппа в летальной дозе, выживаемость была выше в 2,1 раза, чем в контроле.

Применение экстракта эраконда в качестве средства, проявляющего противовирусную активность в отношении миксовируса.