СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА Российский патент 1995 года по МПК A61K39/10 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам изготовления вакцины и ее применения для профилактики бруцеллеза.

Известна бруцеллезная живая вакцина из штамма В.аbortus 19. Способ ее изготовления включает культивирование бруцелл в S-форме штамма В.abortus 19, не обнаруживающих признаков диссоциации. Выращенную в течение 48 ч при 37^оС культуру смывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия, готовят суспензию, добавляют стабилизатор, разливают в ампулы, лиофильно высушивают под вакуумом или в присутствии инертного газа [1]
Однако эта вакцина обладает сенсибилизирующими свойствами, реактогенна, экологически небезопасная, так как используются живые бруцеллы, длительный антигенный ответ у привитых животных (2-3 и более лент). Вакцина не стандартна как при изготовлении, так и при применении, хранится не более 12 месяцев.

Известна также вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма В.abortus 45/20, с использованием инактивированных нагреванием при 80^оС в течение 1 ч клеток бруцелл, разрушенных затем ультразвуком, осадок отделяют центрифугированием, осаждают антигенную субстанцию 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты, лиофильно высушивают. Готовая вакцина в дозе 0,1 мл водно-маслянистой эмульсии, содержит 300 мкг антигенного вещества и 150 мкг адъюванта РЗ, представляющего собой моно- и диэфир трегалозы, этерифицирующая часть которой является накардиомиколовой кислотой природного происхождения с содержанием от 30 до 90 атомов углерода, при этом соотношение в вакцине иммуногенного компонента и адъюванта составляет между 1:1 и 20:1 [2]
Однако данная вакцина также обладает сенсибилизирующими свойствами, высоко реактогенна, стандартизуется по весовому количеству содержащихся в ней антигена и адъюванта с широким диапазоном, требует двукратного введения с интервалом 1 месяц.

Наиболее близким к предлагаемому способу профилактики бруцеллеза является способ профилактики антигеном на основе белково-полисахаридного комплекса (БПК), выделенного химическим путем [3]
Однако указанный белково-полисахаридный комплекс испытывался на экспериментальных лабораторных животных (морские свинки, белые мыши, кролики) и предназначался для профилактики бруцеллеза у людей.

Установлено, что БПК бруцелл можно использовать в дозе 5-35 мг в объеме 5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

Сущностью изобретения является разработка способа профилактики бруцеллеза преимущественного крупного рогатого скота путем однократного введения белково-полисахаридного комплекса бруцелл телятам в возрасте 3-5 мес, в дозе 5-45 мг в 5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия.

П р и м е р. Профилактическую эффективность БПК изучали на молодняке крупного рогатого скота, сформировав (в экспериментальном хозяйстве ВНИИБТЖ) 5 групп телят в возрасте 3-5 мес. по 5 голов в каждой группе. БПК растворяли в стерильном 0,9%-ном растворе хлорида натрия рН 7,2-0,2 из расчета 5 мг, 15 мг, 45 мг и 60 мг БПК в объеме 5 мл. Для иммунизации животных готовили 4 раствора БПК, содержащих разные дозировки из расчета 5, 15, 45 и 60 мг антигена в объеме 5 мл (1 доза). Растворы, содержащие разные дозы БПК, вводили однократно внутримышечно (1-4 группы), а контрольным животным вводили 0,9% -ный раствор хлорида натрия (5-группа). Спустя 28-30 сут. после прививки всех телят заражали вирулентной культурой бруцелл В.аbortus (5 ИД). Через 28-30 сут. после заражения иммунизированных и контрольных телят забивали и после вскрытия проводили бактериологические исследования путем высевов из органов и тканей на питательные среды. Через 5-7 сут. выдерживания посевов при температуре 37^оС проводили учет роста бруцелл. Считали заразившимся животное (отсутствие специфического иммунитета), если выделяли бруцеллы хотя бы из одного из исследованных органов и тканей.

Установлено, что введение БПК не вызывает у животных местных и общих реакций на прививку, а также поствакцинальных осложнений. Патогистологическими исследованиями у привитых БПК телят выявлены доброкачественные изменения в легких, селезенке, печени, лимфоузлах и других органах. Результаты проверки иммуногенности вакцины на основе БПК в разных дозах показывают, что в группе телят, получивших пониженную дозу БПК 5 мг, не заразились 2 из 5 телят, с индексом инфицированности 6,6% В группе телят, иммунизированных дозой 15 мг, процент иммунных составляет 60% с индексом инфицированности 6,1% значительное повышение дозы БПК (45-50 мг) не повышает защитного эффекта, а напротив, вызывает иммуннодепрессивное действие 20% иммунных, с индексом инфицированности 7,3% при дозе 45 мг и отсутствие защиты, при индексе инфицированности 12,3% в группе привитых дозой 60 мг. В контрольной группе у всех невакцинированных и зараженных вирулентной культурой В.abоrtus (5 ИД) животных выявлена генерализованная инфекция с индексом инфицированности более высоким 19,4% чем у заразившихся телят в группах, привитых дозами 5,15 и даже 45 мг (6,1-7,3% ). У животных этих групп выделяют меньшее количество бруцелл, отмечают отсутствие генерализации инфекционного процесса с более низким индексом инфицированности по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, введение БПК в дозе 5-35 мг в объеме 5 мл телятам в возрасте 3-5 мес. создает после однократного введения иммунитет достаточной напряженности против заражения бруцеллезной инфекцией.

Использование: ветеринария, химическая вакцина для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. Сущность изобретения: для профилактики бруцеллеза телятам в возрасте 3-5 мес. однократно вводят белково-полисахаридный комплекс бруцелл в дозе 5-35 мг в 5 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Однократное введение вакцины создает напряженный иммунитет у привитого крупного рогатого скота против экспериментального заражения вирулентной культурой бруцелл.

СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА преимущественно крупного рогатого скота путем введения белково-полисахаридного комплекса, отличающийся тем, что белково-полисахаридный комплекс вводят телятам в возрасте 3 5 мес. однократно в дозе 5 35 мг в 5 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия.