ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1995 года по МПК A61K39/10 C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцине против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Бруцеллез крупного рогатого скота - хроническое зооантропонозное заболевание. Для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота применяют живые противобруцеллезные вакцины.

Известна вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма Br. abortus 82 и сахарозожелатиновый стабилизатор.

Недостатком данной вакцины является ее низкая иммуногенность.

Известна также вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, содержащая антиген из штамма Br. abortus 19 и сахарозожелатиновый стабилизатор.

Недостатком данной вакцины является ее агглютиногенность. После иммунизации крупного рогатого скота антитела в сыворотке крови отдельных животных сохраняются до двух и более лет, что препятствует выявлению больных бруцеллезом животных.

Целью изобретения является повышение иммуногенности и снижение агглютиногенности вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит бактериальную массу из штамма Br. melitensis "Невский-13" при следующем содержании компонентов, мас. /об.%: Бактериальная мас- са из штамма Br. melitensis "Невский-13" 2,0-2,5˙10¹¹ микр.кл./см³ Сахароза 9,5-10,5 Желатин пи- щевой 1,5-2,0 Дистиллирован- ная вода Остальное
Штамм Br. melitensis "Невский-13", используемый для изготовления вакцины, получен путем целенаправленной селекции по иммуногенной активности и антигенности.

Штамм Br. melitensis "Невский-13" депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные поодиночке или парами, без спор и капсул. Размер 0,0-1,0 мкм, ширина 0,3-0,5 мкм.

Культуральные свойства. Штамм в мясопептонном печеночном глюкозоглицериновом бульоне при 37-38^оС через 48-72 ч образует легкую опалесценцию и тонкое голубоватое прозрачное пристеночное кольцо. На мясо-пептонном печеночном глюкозоглицериновом агаре (4-5-е сутки) растет в виде выпуклых, круглых, прозрачных с голубовато-зеленым оттенком (в проходящем свете) колоний диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 колонии не полностью покрыты краской (имеются желтые просветы в виде трещин). Растет на МППГГА с добавлением фуксина 1/50 тыс., тионина 1/50 тыс. , натриевой соли бензилпенициллина 10 ЕД/мг, эритритола 0,1%, не растет на МППГГА с добавлением стрептомицина сульфата 5 мкг/мл. Не выделяет при культивировании сероводород, не лизируется фагом "Тб".

Антигенная структура. Штамм не обладает типоспецифической антигенностью, культура не агглютинируется А и М моноспецифическими сыворотками, агглютинируется в РА на стекле R-антибруцеллезной сывороткой, разведенной 1/10 на , S-антибруцеллезной сывороткой, разведенной до 80 МЕ/мл на ++.

Вирулентные свойства: штамм не вызывает патологических изменений, характерных для бруцеллеза у крупного рогатого скота при введении 2х10¹¹и у морских свинок 1˙10⁹ микробных клеток. Не вызывает абортов у стельных коров при иммунизации в дозе 1-2 ˙ 10¹¹ микробных клеток.

П р и м е р 1. Штамм Brucella melitensis "Невский-13" культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде. К 25 мл бактериальной массы добавляют 75 мл сахарозо-желатинового стабилизатора, содержащего в дистиллированной воде 9,5-10,5 г сахарозы и 1,5-2 г желатина, устанавливают концентрацию бакмассы, равную 2,0-2,5˙10¹¹ м.к. /см³, расфасовывают в ампулы (или флаконы) и лиофильно высушивают.

Готовая вакцина представляет собой сухую пористую мелкокристаллическую массу светло-коричневого или светло-желтого цвета, хорошо растворяющуюся в дистиллированной воде.

Полученная вакцина имеет следующий компонентный состав (табл.1)
П р и м е р 2. Полученную вакцину серий 1-3 ресуспендируют разбавителем для противобруцеллезных вакцин и вводят телкам в возрасте 4-5 месяцев подкожно в дозе 100 млрд м.к. в объеме 5 см³ и повторно в той же дозе через 10 мес. вводят под кожу в область задней трети шеи (Телок, не привитых в возрасте 4-5 мес, иммунизируют однократно за 2-3 месяца до осеменения).

Коров и первотелок вакцинируют через 1-2 мес после отела. Ревакцинацию коров проводят не ранее чем через 2 года после вакцинации.

Испытание эффективности вакцины проводят в трех хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота. Вакциной иммунизируют животных всех возрастных групп. Всего вакцинируют 3656 голов. Результаты испытания показали, что животные, привитые вакциной из штамма "Невский-13", к 60 дню после вакцинации освобождались от агглютинирующих комплементсвязывающих антител. За время наблюдения в течение 4 лет ни одно из вакцинированных животных не заболело бруцеллезом в условиях контакта с больными животными, что указывает на высокую эпизоотическую эффективность препарата.

П р и м е р 3. Испытания иммуногенных свойств вакцины серии 2 проводят на телках 8-10-месячного возраста. Телок иммунизируют подкожно в заднюю треть шеи в дозах 50-400˙10⁹ м.к. в объеме 5 см³. Через 10 мес иммунизированных и контрольных (невакцинированных) телок заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Бр. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15-20 ИД₅₀. Через 42-45 дней после заражения животных убивают и проводят бактериологическое исследование внутренних органов и лимфатических узлов (30-35 объектов). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и органах, рассчитывают процент защиты и индекс инфицированности (процент инфицированных органов и лимфоузлов). Результаты испытания представлены в табл.2.

Из таблицы видно, что наивысший процент защиты животных обеспечивает иммунизирующая доза предлагаемой вакцины, равная 100 млрд. м.к.

П р и м е р 4. Испытывают 2 серию вакцины на иммуногенную и антигенную активность в сравнении с вакциной из штамма Бр. абортус 19 (прототип).

Телок иммунизируют вакциной из штамма Бр. мелитензис "Невский-13" в дозе 100 млрд м.к. и вакциной из штамма Бр. абортус 19 в дозе 80 млрд м.к. Через 15, 30, 60, 90, 120, 150 и 180 дней после вакцинации у телок берут кровь для исследования в РА, РСК, РБП. Результаты представлены в табл.3.

Через 10 мес. после иммунизации вакцинированных и контрольных (невакцинированных) животных заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Бр. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15-20 ИД₅₀, а спустя 42-45 дней убивают и проводят бактериологическое исследование (как описано в примере 3). Результаты испытаний представлены в табл.4.

Результаты исследований показали, что телки, иммунизированные вакциной из штамма Бр. мелитензис "Невский-13", освобождаются от агглютининов и комплементсвязывающих антител уже через 60 дней после вакцинации, а у привитых вакциной из штамма 19 антитела сохраняются до 150 дней, что дает возможность раньше на 120 дней выявить больных животных.

Данные таблицы показывают, что предложенная вакцина превосходит по иммуногенной эффективности вакцину из штамма Бр. абортус 19 и имеет существенное преимущество перед ней, а именно возможность серологических исследований через 2 мес. после вакцинации, что позволяет значительно раньше выявить больных животных и тем самым повысить эффективность проводимых противобруцеллезных мероприятий.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволит расширить ассортимент высокоэффективных биопрепаратов против бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Использование: ветеринарная биотехнология, специфическая профилактика, бруцеллез сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения: вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных содержит суспензию штамма Br. melitensis "Невский-13" ВГНКИ N 31 и сахарозожелатиновый стабилизатор в эффективном количестве. Использование новой вакцины в ветеринарной практике позволяет в 1,5-2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий. 4 табл.

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая антиген бруцелл и сахарозо-желатиновый стабилизатор, отличающаяся тем, что она в качестве антигена содержит бактериальную массу штамма Brucella melitensis "Невский-13" ВГНКИ N 31 при следующем содержаний компонентов:
Сахароза, г/100 мл - 9,5 - 10,5
Пищевой желатин, г/100 мл - 1,5 - 2,0
Дистиллированная вода, мл - До 100 мл
Бактериальная масса штамма Brucella melitensis "Невский-13" ВГНКИ N 31, ·10¹¹ м.к./см³ - 2,0 - 2,5