ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1995 года по МПК C12N1/20 A61K39/10 

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Бруцеллез сельскохозяйственных животных - хроническое зооантропонозное заболевание, наносящее большой экономический ущерб животноводству. В системе мер борьбы с бруцеллезом ведущее место принадлежит средствам специфической профилактики заболевания.

Известна вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, содержащая антиген из штамма Brabortus 19 и сахарозо-желатиновый стабилизатор [1].

Недостатком данной вакцины является ее высокая агглютиногенность, препятствующая выявлению больных бруцеллезом животных и недостаточная, как и у всех живых вакцин, экологическая чистота.

Известна также вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген из штамма Br.abortus 45/20, масляный адъювант и физиологический раствор [2].

Недостатком данной вакцины является невысокая иммуногенность.

Целью настоящего изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит бактериальную массу из штамма Br.melitensis "Невский-13", в качестве масляного адъюванта - неполный адъювант Фрейнда и дополнительно формалин, при следующем соотношении компонентов мас./об.%:
Бактериальная масса
из штамма Br.meliten- sis "Невский-13" 1,45-1,55х
x 10¹¹ микр x
x к/см³
Неполный адъювант Фрейнда 45-50 Формалин 0,3-0,5
Физиологический раствор Остальное
Для изготовления вакцины используют штамм Br.melitensis "Невский-13".

Штамм Br.melitensis "Невский-13" получен путем целенаправленной селекции по иммуногенной активности и антигенности.

Штамм Br.melitensis "Невский-13" депонирован в коллекции Всероссийского государственного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные поодиночке или парами, без спор и капсул. Размер 0,6-1,0 мкм, ширина 0,3-0,5 мкм.

Культуральные свойства. Штамм в мясо-пептонном печеночном глюкозо-глицериновом бульоне при 37-38^оС через 48-72 ч образует легкую опалесценцию и тонкое голубоватое прозрачное пристеночное кольцо. На мясо-пептонном печеночном глюкозо-глицериновом агаре (4-5 сутки) растет в виде выпуклых, круглых, прозрачных с голубовато-зеленым оттенком (в проходящем свете) колоний с диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 колонии не полностью покрыты краской (имеются желтые просветы в виде трещин).

На МППГГА с добавлением фуксина 1/50 тыс., тионина 1/50 тыс., натриевой соли бензилпенициллина 10 ЕД/мг, эритритола 0,1% растет. Не растет на МППГГА с добавлением стрептомицина сульфата (5 мкг/мл). Не выделяет при культивировании сероводород, не лизируется фагом "Тб".

Антигенные свойства. Штамм не обладает типоспецифической антигенностью, культура не агглютинируется А и М моноспецифическими сыворотками, агглютинируется в РА на стекле R-антибруцеллезной сывороткой, разведенной 1/10 на ++, S-антибруцеллезной сывороткой, разведенной до 80 МЕ/мл на ++.

Вирулентные свойства: штамм не вызывает патологических изменений, характерных для бруцеллеза у крупного рогатого скота при введении 2х10¹¹ и у морских свинок - 1х10⁹ микробных клеток. Не вызывает абортов у стельных коров при иммунизации в дозе 1-2х10¹¹ микробных клеток.

П р и м е р 1. Штамм Brucella melitensis "Невский-13" культивируют на мясо-пептоном печеночном глюкозо-глицериновом агаре (печеночно-мартеновском агаре с переваром Хоттингера, картофельном агаре с переваром Хоттингера) или в ферментере на жидкой питательной среде.

Бактериальную массу суспендируют физиологическим раствором до концентрации 2,9х10¹¹ - 3,1х10¹¹ микр.к./см³.

В качестве неполного адъюванта Фрейнда используют следующие составы, %:
1. Болгарское легкое минеральное масло 84 Ланолин 16
2. Синтетическое минеральное масло 84 Ланолин 16
3. Полиэтиленси- локсановая жидкость 84 Ланолин 16
4. Полиэтилсилокса- новая жидкость 84 Т-3 16
К 45-50 мл адъюванта добавляют 0,3-0,5 мл формалина и до 100 мл взвеси бактериальной массы в физиологическом растворе. Полученную смесь перемешивают. Вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке, флаконы закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.

Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.

Готовая вакцина представляет собой белую или слегка желтовато-сероватого цвета однородную эмульсию с незначительным отслоением минерального масла над нерасслаивающейся однородной эмульсией. При встряхивании вакцина приобретает вид однородной гомогенной эмульсии.

Получают 3 серии вакцины следующего состава (см. табл.1)
П р и м е р 2. Полученную вакцину серий 1-3 вводят крупному рогатому скоту, нереагирующему на бруцеллез в серологических реакциях (РБП или РА и РСК или РДСК).

Телок иммунизируют в возрасте 4-5 мес. Вакцину вводят подкожно в область подгрудка в дозе 3 см³. Через месяц после вакцинации вакцину вводят повторно в той же дозе.

Телок, не иммунизированных в 4-5-месячном возрасте, прививают за 2-3 мес до осеменения. Вакцину вводят дважды с интервалом один месяц в дозе 3 см³ подкожно в область подгрудка.

Испытание эффективности вакцины проводят в двух хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота. Вакциной иммунизируют животных всех возрастных групп. Всего 1856 голов. Результаты испытания показали, что животные, привитые вакциной из штамма "Невский-13" к 90-120 дню после вакцинации, освобождались от агглютинирующих и комплементсвязывающих антител. За время наблюдения в течение двух лет ни одно из вакцинированных животных не заболело бруцеллезом в условиях контакта с больными животными, что указывает на высокую эпизоотическую эффективность препарата.

П р и м е р 3. Иммуногенную активность экспериментальных серий вакцины с использованием различных адъювантов по примеру 1 сравнивают с вакциной из штамма Бр. абортус 45/20 (прототип) и живой вакциной из штамма Бр. абортус 19. Опыт проводят на морских свинках массой 350-400 г. Животных иммунизируют подкожно в область паха вакцинами в дозе 0,2 см³, а живой вакциной - в дозе 1х10⁹ микр.к./см³. Через 85-90 дней после иммунизации всех привитых и контрольных (невакцинированных) животных заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Бр. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15-20 ИД₅₀. Спустя 30-35 дней после заражения морских свинок убивают и проводят бактериологическое исследование лимфатических узлов и внутренних органов (по 10 объектов от каждого животного). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в организме животных. Рассчитывают процент защиты (количество незаразившихся животных в процентах от общего количества свинок в группе) и индекс инфицированности органов (процент выделенных культур от общего количества исследованных органов и лимфатических узлов). Результаты испытания представлены в табл.2.

Из табл. 2 видно, что предложенная вакцина, содержащая антиген из бруцелл штамма Бр. мелитензис "Невский-13" с неполным адъювантом Фрейнда обеспечивает защиту 70-85% иммунизированных животных и по этому показателю значительно превосходит аналогичную вакцину из штамма Бр.абортус 45/20 (прототип).

Предложенная вакцина не уступает по иммуногенности живой вакцине из штамма Бр.абортус 19.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволит расширить ассортимент высокоэффективных биопрепаратов против бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Использование: ветеринарная биотехнология, специфическая профилактика, бруцеллез сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения: вакцина против бруцеллеза сельскозхозяйственных животных содержит суспензию штамма Br. melitensis "Невский-13", ВГИКИ N 31, масляный адьювант типа неполного адъюванта Фрейнда и формалин в эффективных соотношениях. Использование новой вакцины в ветеринарной практике позволяет в 1,5 - 2 раза повысить эффективность специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных. 2 табл.

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая антиген бруцелл, масляный адъювант и физиологический раствор, отличающаяся тем, что она в качестве антигена бруцелл содержит бактериальную массу штамма Brucella melitenSiS "Невский-13" ВГНКИ N 31, в качестве масляного адъюванта - неполный адъювант Фрейнда и дополнительно формалин при следующем соотношении компонентов:
Неполный адъювант Фрейнда, г/100 мл - 45 - 50
Формалин, г/100 мл - 0,3 - 0,5
Физиологический раствор, мл - До 100
Бактериальная масса штамма Brucella melitenSiS "Невский-13" ВГНКИ N 31, · 10¹¹ м.к./см³ - 1,45 - 1,55