ПЕПТИДНЫЙ ПРЕПАРАТ С АНАЛЬГЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК A61K38/00 

Изобретение относится к фармакологии, а именно к лекарственным средствам, и может найти применение в медицине.

Известен ряд фармакологических препаратов, снижающих чувствительность у человека и животных: морфин, промедол (см. М.Д. Машковский. Лекарственные средства, Москва, Медицина, 1988 г. часть 2).

Основным недостатком известных препаратов является наличие побочного наркотического эффекта.

На решение задачи получения препарата пептидной природы обладающего анальгезирующим действием направлено предполагаемое изобретение.

Задача решается путем применения в качестве препарата, обладающего анальгетической активностью, пептида со следующей аминокислотной последовательностью H-Tyr-D-Ala-Phe-D-Ala-Tyr-Pro-Ser-NH-Me структурного аналога опиоидного пептида дерморфина. Готовый препарат представляет собой аморфный белый порошок, легко растворимый в воде, физиологическом растворе.

Изучение анальгетического действия заявляемого препарата проводили на животных, используя комплекс тестов.

Болевая реакция, возникающая при нанесении раздражения на лапы (тест "горячей пластины" hot plate) проявляется у животного в виде отдергивания лап, их вылизывания, вокализации, прыжкообразных движений, вращения. Двигательные реакции такой сложности обеспечиваются на всех уровнях центральной нервной системы: от спинного мозга до коры больших полушарий. Тест tail flick болевой раздражитель вода с температурой 56^оС или сфокусированный световой луч наносится на кожу хвоста, отдергивание которого обеспечивается преимущественно на уровне спинного мозга.

Опыты проводились на самцах белых крыс массой 120-170 г.

Заявляемый пептид, а также препарат сравнения, вводили в водном растворе или в растворе Рингера. Контрольным животным вводили соответствующий растворитель. Анальгетическая активность препаратов определялась в тестах:
hot plate в камере DS-37. Животное помещали в округлую пластиковую камеру, расположенную над поверхностью горячей пластины Т 56+1^оС.

Латентный период избавления животного от болевого сигнала рассчитывали по началу лизания задних лапок:
tail flick (водный). Животное помещали в индивидуальную пластиковую камеру, хвост погружали на 5 см в воду с температурой 56+1^оС.

Исходную болевую чувствительность определяли непосредственно после введения препарата через каждые 10 мин. Для определения длительности действия препарата его вводили на 3,6 или 24 часа до начала измерений. Анальгетическую активность (А) рассчитывали по формуле:
A (t_o t_k)/(30 t_к) х 100% где t_o время избавления от болевого стимула животных опытной группы;
t_к то же, для животных контрольной группы;
30 максимальное время (с) предъявления болевого стимула.

Для определения средней величины анальгезии усредняли значения А с 20-ой по 60-ую минуту после введения препарата;
tail flick (световой). При использовании анальгезиметра type 812 животных также помещали в индивидуальные пластиковые камеры и на верхнюю треть хвоста наносили болевое раздражение сфокусированным лучом света. Интенсивность раздражения составляла одну условную единицу по шкале прибора. Максимальное время нанесения раздражителя 20 сек.

П р и м е р 1. Крысам осуществляли внутрибрюшинное введение заявляемого пептида в объеме 5 мг/кг.

Данные, представленные в табл. 1 показывают, что доза заявляемого пептида в дозе 5 мг/кг в тесте tail flick (водный) оказывает анальгетическое действие в течение 4 ч, причем величина анальгезии достигает 50% (см. табл. 1).

При использовании теста tail flick type 812 антиноцицептивный эффект был менее выражен: длительность около 3 ч, анальгезия до 40% Данные приведены в табл. 2.

Вместе с тем, в тесте hot plate при введении 5 мг/кг заявляемого препарата значительная анальгезия регистрировалась при температуре пластины 53^оС (табл. 3). Анальгезия развивалась через 1,5 ч после введения и была невелика по амплитуде. При температуре горячей пластины 56^оС достоверных изменений болевой чувствительности не наблюдалось (табл. 4).

Для сравнения с заявляемым пептидом использовали анальгетическое средство промедол, являющееся аналогом части молекулы морфина. Промедол вводили внутрибрюшинно в количествах 0,5; 1,0 и 5,0 мг/кг. В тесте tail flick (водный) промедол вызывает анальгезию во всех применяемых дозах. При этом введение 0,5 мг/кг приводит к эффекту, по выраженности сходному с эффектом заявляемого пептида (5 мг/кг внутрибрюшинно) анальгезия около 50% однако, длительность действия промедола меньше и составляет около 1,5 ч. Дозы промедола 1 и 5 мг/кг вызывали анальгезию более сильную, чем заявляемый пептид, однако ее длительность не превышала длительности действия заявляемого пептида.

П р и м е р 2. Крысам осуществляли интраназальное введение препарата при помощи мягкого пластикового катетера, присоединенного к микрошприцу. Каплю объемом 5 мкл подносили ко внешнему крылу ноздри на вдохе животного.

Введение заявляемого пептида этим способом приводило в тесте tail flick (водный) к длительной анальгезии до 60% (рис. 5). Эффект наблюдался в течение 7 ч после введения, хотя выраженность его снижалась на 5-6 ч.

Сравнение этих данных с результатами анализа активности промедола показало, что последний при введении интраназально вызывает длительную анальгезию только при использовании дозы 5 мг/кг; меньшие дозы малоэффективны. Следовательно при данном способе введения заявляемый пептид эффективнее промедола приблизительно в 1000 раз.

П р и м е р 3. Крысам производили внутримозговое введение в III желудочек мозга через хронически вживленные стальные канюли. Вводимый объем 10 мкл на животное. Вживление осуществляли по координатам 1,0; 1,5 и 3,5 мм по атласу Е. Фифковой и Д. Маршала.

Внутримозговое введение заявляемого пептида приводило к анальгезии до 100% регистрируемой в тесте tail fick при использовании доз порядка 2,5 мкг/кг; при введении в желудочки 1,0 мкг/кг эффекты были менее выражены. Однако, помимо анальгезии у животных регистрировалась полная неподвижность, сохранение невязанной позы.

Анальгетический эффект заявляемого пептида был проверен и в модифицированном тесте hot plate на мышах. В опыте использованы нелинейные мыши, самки весом 18 (+- 10%) г. Достоверность результатов оценивали по критерию Уилкоксона-Манна-Уитни.

П р и м е р 4. Животных помещали по одной в цилиндр (диаметр 9 см, высота 15 см), погруженный на высоту животного (12 см) в воду с Т 55^оС. При тестировании отмечали время в сек первого прыжка животного. Заявляемый пептид и препарат сравнения (продолжительный контроль) морфин вводили внутрибрюшинно за 15 мин до определения времени реакции.

Для проведения теста были выбраны различные дозы заявляемого пептида и морфина от минимально эффективной до максимально переносимой.

Усредненные результаты опытов на анальгетический эффект в модифицированном тесте hot plate представлены в табл. 5.

В этой серии экспериментов заявляемый пептид обладает отчетливым анальгезирующим действием по отношению к тепловому раздражителю. Анальгетическая активность его существенно превышала активность морфина, взятого для сравнения. При дозе заявляемого пептида в 132 мкг/кг анальгезирующий эффект был соизмерим с эффектом морфина, взятого в дозе 4 мг/кг. В этом случае эффективность анальгезирующего действия заявляемого пептида превышала таковую морфина в 30,3 раза.

Таким образом, исходя из полученных результатов, заявляемый пептид может использоваться в качестве лекарственного препарата с анальгезирующим действием, активность которого зависит от дозы и способа введения в организм.

Изобретение относится к фармакологии, а именно к лекарственным препаратам, и может найти применение в медицине. Изобретение направлено на получение препарата пептидной природы, обладающего анальгезирующим действием. В качестве такого препарата используется пептид со следующей аминокислотной последовательностью H-Tyr-D-Ala-Phe-D-Ala-Tyr-Pro-Ser-NH-Me структурный аналог опиоидного пептида дерморфина. Готовый препарат представляет собой аморфный порошок, легко растворимый в воде, физиологическом растворе. 5 табл.

Применение пептида H -Tyr D D Ala Phe D Ala Tyr Pro Ser NM Me в качестве препарата с анальгетической активностью.