СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ПАНТОВ ОЛЕНЯ Российский патент 1995 года по МПК A61K35/32 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способов получения средств из пантов марала, изюбра или пятнистого оленя.

Известен способ получения "Пантокрина" жидкого путем измельчения до величины частиц 0,5 2 мм и экстракции пантов после удаления кожных покровов марала, изюбра или оленя пятнистого 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой и настаивания в течение 6 сут (В.И. Иванов, М.П. Сошнякина. "Панты и пантокрин". Чита, 1991 г.).

Однако данный способ позволяет получать "Пантокрин" недостаточной биологической активности, не позволяет рационально использовать сырье, трудоемок. Удаление кожного покрова путем обработки горячей водой приводит к денатурации белкового комплекса, к частичному вымыванию водорастворимых веществ пантов, а также к потере активности при длительной досушке. К тому же длительное (6 суток) извлечение действующих веществ 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой также приводит к снижению активности.

Целью изобретения является повышение биологической активности, рациональное использование сырья, снижение трудоемкости, длительности.

Поставленная цель достигается тем, что панты марала, изюбра или пятнистого оленя измельчают и обрабатывают 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой, причем измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Отличие предлагаемого изобретения от известного заключается в том, что измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Сравнение заявляемого решения с известным показывает, что впервые предложено измельчение сухих пантов с кожным покровом до частиц не более 0,1 мм и обработка фильтрационным методом в течение 2 3 ч, что позволяет повысить биологическую активность, рационально использовать сырье, снизить трудоемкость и длительность способа. С учетом изложенного следует считать заявляемое решение соответствующим критерию "существенные отличия".

Сущность способа заключается в следующем. Механически удаляют шерстяной покров с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, затем производят вальцевое измельчение пантов до частиц 5 10 мм и доизмельчение до частиц не более 0,1 мм. Затем обрабатывают их 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой фильтрационным методом в течение 2 3 ч.

Заявляемый способ позволяет получить "Пантокрин", содержащий экстрактивных веществ не менее 0,8% по сравнению с официальным препаратом, содержащим их 0,4 0,7%
Было исследовано влияние предлагаемого пантокрина в сравнении с официальным пантокрином на течение иммобилизационного стресса. Препараты исследовали в дозах 0,45 и 1,8 мл/кг. Первая доза была взята как минимальная доза, обладающая в наших экспериментах активностью, а вторая как оптимальная терапевтическая доза для официального пантокрина. Эксперименты были выполнены на 72 мышах самцах линии СВА массой тела 19 21 г, которые были разбиты на 6 групп по 12 мышей. Две группы получали предлагаемый пантокрин, две официальный, и две группы служили контролем (стрессовым и интактным) и получали воду. Препарат вводили в течение 4 дней, предшествующих стрессу и 5-й раз за 1 ч до стрессирования. Иммобилизационный стресс вызывали подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч. По истечению указанного времени мышей снимали и через 15 мин у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в открытом поле, эмоциональную реакцию по Броди (1953) подсчитывали количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли вес надпочечников, селезенки и тимуса и рассчитывали весовые коэффициенты органов на 20 гр.массы тела, учитывали количество язв в желудке и по методу Добрякова (1976) подсчитывали выраженность стресса в баллах.

Экспериментальная установка "открытое поле" представляла из себя камеру размером 40 х 40 х 20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Пол камеры разделенный на 16 квадратов, в каждом квадрате имел круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещалась электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола камеры. Мышь помещалась в один из углов камеры и в течение 2-х мин регистрировали количество пересеченных горизонтальных квадратов, количество заглядываний в отверстия, количество вставаний на задние лапки, количество умываний (груминг) количество дефекаций по количеству фекальных шариков. Рассчитывался коэффициент Г/О, который представлял из себя отношение горизонтальной активности к норковому рефлексу (заглядыванию в отверстия). Эмоциональная реакция оценивалась по методу Броди (1953), при котором полуколичественным способом оценивалась реакция на 4 вида воздействий захват в клетке, где животное постоянно живет, захват в руку после помещения животного на плоскую поверхность, реакция на приближение пинцета, реакция на толчок пинцетом, при этом дополнительно регистрировались дефекация с мочеиспусканием, писк и мышечное напряжение (всего 7 реакций). Каждая реакция оценивалась по 4-х балльной системе, после чего все баллы суммировались, давая общую оценку эмоциональной реакции. О достоверности различий судили проверкой вероятности нулевой гипотезы по методу Стьюдента-Фишера. Результаты исследования приведены в табл. 1 и 2.

Как следует из приведенных данных предлагаемый пантокрин оказывает более выраженное антистрессовое действие на внутренние органы по сравнению с официальным препаратом. Что же касается поведения в открытом поле у животных, перенесших иммобилизационный стресс, то оба препарата оказали умеренное действие на показатели поведения, однако обращает на себя внимание, что заявляемый препарат оказал более выраженное нормализующее действие на эмоциональную реакцию и на коэффициент Г/О, являющийся отношением горизонтальной активности к норковому рефлексу.

Было исследовано влияние заявляемого пантокрина и официального препарата на формирование и воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания, выработанного на фоне действия скополамина в дозе 2,5 мг/кг подкожно, за 15 мин до выработки рефлекса. Как известно, введение скополамина в дозе 1 5 мг/кг приводит к амнезии навыков, выработанных в ближайшее время после его введения. Препараты исследовали в дозе 1,8 мг/кг, как оптимальной терапевтической дозе. Эксперименты были выполнены на 70 мышах самцах линии СВА массой тела 19 21 г, которые были разбиты на 4 группы. Одна группа получала предлагаемый пантокрин, одна официальный, и две группы служили контролем (скополаминовым и интактным) и получали воду. Препараты вводили в течение 4 дней, предшествовавших стрессу, и 5-й раз за 1 ч до обучения.

За 15 мин до выработки условного рефлекса всем мышам кроме интактного контроля вводился скополамин в дозе 2,5 мг/кг подкожно. Методика условного рефлекса пассивного избегания (Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон. "Методика и основные эксперименты по изучению мозга и поведения". М. "Высшая школа", 1991 г. с. 183) основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов. Экспериментальная установка представляла из себя камеру, состоящую из двух отсеков большого светлого и малого темного. Животное помещалось в светлый отсек и через некоторое время в силу врожденного рефлекса переходило в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывалось дверкой и на пол темного отсека, представляющий собой решетку из параллельных чередующихся электродов подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 Мс, частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА, через 10 с дверку открывали и животное могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животного вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства.

Выработку рефлекса проверяли через 24 ч. Для этого животное помещали в светлый отсек в угол камеры, противоположный от входа, и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода ЛТ), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Хорошо выработанным рефлекс считался в том случае, если в течение всех 3 мин наблюдения животное не совершало перехода от светлого отсека в темный. Если латентное время захода превышало 150 с, это считалось признаком наличия рефлекса. Животные, которые после помещения в светлый отсек сохраняли неподвижность и не приближались к входу в темную часть камеры, при подсчете результатов не учитывались. Об эффекте препарата судили по разнице в долях животных с выработанным рефлексом между отдельными группами мышей. О достоверности различий судили по методу Фишера для сравнения долей (Г.Н. Зайцев. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. М. "Наука", 1984, с. 258).

Результаты исследования представлены в табл. 3.

Как явствует из табл. 3, заявляемый препарат значительно превосходит официальный по положительному влиянию на процессы обучения и памяти при их нарушении в результате действия скополамина.

Представленные данные на примере двух экспериментов показывают, что заявляемый пантокрин по своей биологической активности превосходит существующий препарат.

Цель изобретения: повышение биологической активности, рациональное использование сырья, снижение трудоемкости и длительности. Сущность способа: механически удаляют шерстяной покров с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, затем производят дважды вальцевое измельчение пантов до частиц не более 0,1 мм, затем обрабатывают их 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой фильтрационным методом в течение 2-3 ч. Новым в способе является то, что измельчают вальцеванием сухие панты с кожным покровом до частиц 5-10 мм, затем повторно измельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм и обрабатывают фильтрационным методом в течение 2-3 ч. 3 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ПАНТОВ ОЛЕНЯ, включающий удаление шерстяного покрова с пантов марала, изюбра или пятнистого оленя, измельчение, обработку раствором 50%-ного этилового спирта и 0,5%-ной уксусной кислоты, фильтрацию, отличающийся тем, что измельчают панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем измельчают до частиц не более 0,1 мм, а фильтруют целевой продукт в течение 2 3 м ч.