СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПАНТОВОЙ МУКИ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕЕ ОСНОВЕ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/32 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается тонизирующих и стимулирующих фармацевтических композиций при умственном и физическом переутомлении, астенических состояниях, неврастении, неврозах, артериальной гипотонии.

Известно лекарственное средство "Пантокрин", представляющий собой жидкий 50% -ный спиртовой экстракт из неокостенелых рогов (пантов) марала, изюбра или пятнистого оленя (М. Д. Машковский, Лекарственные средства, М.Медицина, 1985, ч. 1, с. 142). Однако, данный препарат обладает недостаточной биологической активностью.

Целью изобретения является повышение биологической активности.

Поставленная цель достигается тем, что фармацевтическая композиция содержит пантовую муку, сахарную пудру и ванилин при следующем соотношении компонентов, мас.

Пантовая мука 45 55
Сахарная пудра 49,94 49,95
Ванилин 0,04 0,06.

Сравнение заявляемого решения с известными показывает, что впервые обнаружено соотношение компонентов, позволяющее повысить биологическую активность. С учетом изложенного следует считать заявляемое решение соответствующим критерию "существенные отличия".

Известен способ получения пантокрина путем измельчения (до величины частиц 0,5 2 мм) и экстракции пантов после удаления кожных покровов марала, изюбра или оленя пятнистого 50%-ным этиловым спиртом и 0,5%-ной уксусной кислотой и настаивания в течение 6 сут (В. Н. Иванов, М. П. Сошнянина,Панты и пантокрин, Чита, 1991).

Однако данный способ не позволяет рационально использовать сырье, трудоемок, т. к. удаление кожного покрова производится вручную, причем при этом теряется часть биологически активных веществ. Процесс экстракции длится 6 сут, при котором теряется до 50% действующих веществ (ФС 42 2323 85).

Целью изобретения является повышение биологической активности, рациональное использование сырья и снижение трудоемкости.

Поставленная цель достигается тем, что панты марала, изюбра или пятнистого оленя измельчают, причем измельчают сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем дополнительно измельчают до частиц не более 0,1 мм.

Отличие предлагаемого изобретения от известного заключается в том, что измельчают сухие панты с кожным покровом до частиц 5 10 мм, затем дополнительно измельчают до частиц 0,1 мм.

Субстанцию (пантовую муку) получают следующим образом. Механически удаляют шерстяной покров. Сухие панты с кожным покровом марала, изюбра или пятнистого оленя дробят на костедробилках до частиц 5 10 мм, затем повторно доизмельчают вальцеванием до частиц не более 0,1 мм.

Фармацевтическую композицию получают следующим образом. Полученную субстанцию (пантовую муку) в количестве 50 г смешивают с 49,95 г сахарной пудры, добавляют 0,05 г ванилина, увлажняют 70%-ным этиловым спиртом, в количестве 0,5 0,7 ч. от общей массы смеси, тщательно перемешивают и гранулируют через решетку с отверстиями 2 мм. Гранулы высушивают до влажности не более 10% и отсеивают фракции, величина частиц которых 0,5 3 мм, препарат расфасовывают в банки по 50 г или в ламинированную бумагу по 0,2 0,4 г.

Было исследовано влияние предлагаемого препарата в сравнении с официальным препаратом пантокрином на течение иммобилизационного стресса. Препарат исследовался в дозах 100 и 400 мг/кг, а пантокрин в дозах 0,45 и 1,8 мл/кг. Две дозы каждого препарата строго эквиваленты друг другу по количеству исходного сырья (пантов марала), из которого они были получены. Первая доза была взята как минимальная доза, обладавшая в наших экспериментах биологической активностью, а вторая как оптимальная терапевтическая доза для обычного пантокрина. Эксперименты были выполнены на 72 мышах самцах линии США массой тела 19 21 г, которые были разбиты на 6 групп по 12 мышей. Две группы получали вещество, две пантокрин и две группы служили контролем (стрессовым и интактным) и получали воду. Препарат вводили в течение 4 дней, предшествовавших стрессу и 5-й раз за 1 ч до стрессирования. Иммобилизационный стресс вызывали подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч. По истечении указанного времени мышей снимали и через 15 мин у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в открытом поле, эмоциональную реакцию по Броди (1953), подсчитывали количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли вес надпочечников, селезенки и тимуса и рассчитывали весовые коэффициенты органов на 20 г массы тела, учитывали количество язв в желудке и по методу Добрякова (1976) подсчитывали выраженность стресса в баллах.

Экспериментальная установка "открытое поле" представляла из себя камеру размером 40х40х20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Пол камеры разделен на 16 квадратов, в каждом квадрате имелось круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещалась электрической лампой накаливания мощностью 100 Bт, расположенной на высоте 1 м от пола камеры. Мышь помещалась в один из углов камеры и в течение 2 мин регистрировали количество пересеченных горизонтальных квадратов, количество заглядываний в отверстия, количество вставаний на задние лапки, количество умываний (груминг), количество дефtкаций по количеству фекальных шариков. Рассчитывали коэффициент г/о, который представлял из себя отношение горизонтальной активности и заглядыванию в отверстия. Эмоциональная реакция оценивалась по методу Броди (1953), при котором полуколичественным способом оценивалась реакция на 4 вида воздействий захват в клетке, где животное постоянно живет, захват в руку после помещения животного на плоскую поверхность, реакция на приближение пинцета, реакция на толчок пинцетом, при этом дополнительно регистрировались дефекация с мочеиспусканием, писк и мышечное напряжение (всего 7 реакций). Каждая реакция оценивалась по 4-балльной системе, после чего все баллы суммировались, давая общую оценку эмоциональной реакции. О достоверности различий судили проверкой вероятности нулевой гипотезы по методу Стьюдента-Фишера.

Результаты исследования приведены в табл.1 и 2.

Как следует из приведенных данных, заявляемый препарат превосходит официальный препарат пантокрин по антистрессорному действию, более активно нормализуя как поведенческие, так и соматические показатели стрессированных животных.

Для сравнения активности с официальным препаратом пантокрином было выполнено определение средних эффективных доз препаратов (ЕД) (50) по тесту принудительного плавания (физическая работоспособность) и по антиамнестическому действию на модели скополаминовой амнезии. В обоих тестах препараты исследовались в дозах 0,09, 0,27, 0,81, 2,43 и 7,3 мл/кг массы тела животного для пантокрина и 20, 60, 180, 540 и 1620 мг/кг для пантокрина.

Эти дозы соответствуют в приведенной последовательности 10, 30, 90, 270 и 810 мг/кг пантов марала, из которого препараты были получены. Сравнение препаратов проводилось в пересчете на панты марала. Исследование было выполнено на 276 мышах самцах линии СВА массой тела 19 23 г. Все животные были разбиты на 23 группы по 12 мышей в каждой. При исследовании физической работоспособности по методу плавательной пробы были использованы 10 групп мышей, получивших препарат согласно приведенным дозам,и одна группа контрольная. Препараты вводили в течение 4-х дней, предшествовавших исследованию,и 5-й раз за 1 ч до первого плавания. Мыши плавали в бассейне с водой температурой 28^oС с утяжелением, равным 10% от веса тела,до полного утомления. После первого плавания животных извлекали, давали отдохнуть строго 1 ч и затем повторно помещали в воду. Показателем физической работоспособности служили продолжительность плавания в секундах. Из результатов двух плаваний находили среднюю величину и затем среднюю в группе в целом. На основании полученных средний величин для каждой группы строили кривую зависимости доза-эффект для каждого препарата в отдельности и на этой кривой находили дозу, которая вызывала увеличение работоспособности на 50% Достоверность различий рассчитывали по методу Литчфилда Вилкоксона.

При исследовании влияния препаратов на амнезию навыка условного рефлекса пассивного избегания две группы служили контролем:одна интактным, а другая скополаминовым (они получали воду) и 10 групп получали препараты. Препараты вводили точно так же, как и в предыдущем эксперименте.

За 15 мин до выработки условного рефлекса всем мышам, кроме интактного контроля, вводили скополамин в дозе 2,5 мг/кг подкожно. Методика условного рефлекса пассивного избегания (Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон.Методики и основные эксперименты по излучению мозга и поведения. М.Высшая школа, 1991, с. 183) основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов. Экспериментальная установка представляла из себя камеру, состоящую из двух отсеков большего светлого и малого темного. Животное помещалось в светлый отсек и через некоторое время в силу врожденного рефлекса переходило в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывалось дверкой и на пол темного отсека, представляющий собой решетку из параллельных чередующихся электродов,подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 Мс, частотой 5 Гц и амплитудой 50 МА, через 10 с, дверку открывали и животное могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животного вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства. Выработку рефлекса проверяли через 24 ч. Для этого животное помещали в светлый отсек в угол камеры, противоположный от входа,и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода ЛТ), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Хорошо выработанным рефлекс считался в том случае, если в течение всех трех минут наблюдения животное не совершило перехода из светлого отсека в темный. Если латентное время захода превышало 150 с, это считалось признаком наличия рефлекса. Животные, которые после помещения в светлый отсек сохраняли неподвижность и не приближались ко входу в темный отсек,при подсчете результатов не учитывались. На основании полученных данных определяли процент животных с наличием рефлекса для каждой группы отдельно, строили график зависимости, дозу, эффект и определяли дозу, обеспечивающую сохранность рефлекса у 50% животных. Достоверность отличий рассчитывали по методу Литчфилда-Вилкоксона.

Результаты исследования приведены в табл.3.

Представленные данные показывают, что эффективность препарата по тесту принудительного плавания в 6,55 раза выше официального пантокрина, а по сохранению условного рефлекса пассивного избегания в 5,3 раза.

Было исследовано влияние препаратов пантокрина и предположенного на генеративную функцию по гонадотропному эффекту. Сравнение гонадотропного эффекта двух препаратов было проведено на основании определения фруктозы в сменных пузырьках. Уровень фруктозы в сменных пузырьках является показателем внутрисекретной функции яичек. Выделение фруктозы как питательного субстрата для сперматозоидов стимулируется и регулируется половым гормоном тестостероном (Прудолинский И. М. Бесплодие у мужчин Л. Медгиз, 1964). Таким образом, определение фруктозы в эякуляте или непосредственно в семенных пузырьках позволяет поставить диагноз гормональной недостаточности и судить о терапевтических эффектах исследуемых препаратов.

Эксперименты были выполнены на 72 мышах самцах линии СВА массой тела 22
25 г. Все мыши были поделены на 6 групп по 12 животных в каждой. Снижение половой функции достигалось введением цитостатического препарата- циклофосфана в максимально переносимой дозе 125 мг/кг внутрибрюшинно однократно. Одна группа являлась интактным контролем и не получала цитостатик. Другая группа служила циклофосфановым контролем и 4 группы получали сравниваемые препараты 2 группы пантокрин в дозах 0,45 и 1,8 мл/кг массы тела и 2 группы
предложенное вещество в дозах 100 и 400 мг/кг, что в пересчете на исходное сырье составит 50 и 200 мг/кг пантов. Контрольные животные получали воду. Препараты вводили в желудок зондом 1 раз в день в течение 5 дней, начиная в 3-х сут после введения циклофосфана. Через 1 сут после последнего введения мышей забивали, выделяли семененные пузырьки в них резорциновым методом (Справочник по лабораторным и клиническим методам исследования.Под ред. Е. А. Кост. -М. Медицина, 1975, с. 338 в модификации М. А. Кунина Клиническое значение определения фруктозы в эякуляте Урология, 1963, N 4, с. 807 808) определяли содержание фруктозы. Об эффекте препаратов судили по разнице в содержании фруктозы в группах, получавших препарат и в циклофосфановом контроле. О достоверности различий судили по методу Стьюдента Фишера.

Результаты исследования приведены в табл.4.

Из представленных данных видно, что препарат обладает существенными преимуществами перед официальным препаратом пантокрином.

Таким образом, предлагаемый препарат обладает более высокой биологической активностью по сравнению с официальным препаратом-пантокрином.

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности,и касается способа получения пантовой муки и композиции на ее основе. Сущность заключается в измельчении сухих пантов марала или изюбра, или пятнистого оленя вместе с кожным покровом сначала до частиц 5 - 10 мм, а затем дополнительно до частиц не более 0,1 мм. Эту пантовую муку вводят в композицию вместе с сахарной пудрой и ванилином, взятых в определенных соотношения. Предложенное вещество обладает адаптогенной активностью. 2 с. п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ получения пантовой муки, включающий измельчение пантов марала, или изюбра, или пятнистого оленя, отличающийся тем, что используют сухие панты с кожным покровом, а измельчение проводят сначала до частиц 5 10 мм, а затем дополнительно до частиц не более 0,1 мм. 2. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически активное вещество из пантов марала, или изюбра, или пятнистого оленя, отличающаяся тем, что в качестве источника биологически активного вещества, она содержит пантовую муку и дополнительно сахарную пудру и ванилин при следующих соотношениях компонентов, мас.

Пантовая мука 45 55
Сахарная пудра 49,9 49,96
Ванилин 0,04 0,06