СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИКАЦИНА В ВИДЕ АДДИТИВНЫХ СОЛЕЙ С СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ Российский патент 1995 года по МПК C07H15/22 

Предметом изобретения является способ получения аддитивных солей 1-N-[L-(-)- γ-амино-α-оксибутирил] канамицина А, т. е. амикацина, используя комплексы с двухвалентными металлами канамицина А и его замещенные, особенно 3,6'-дизамещенные производные, а также их силилирования.

В описании к польскому патенту N 89006 представлен способ получения 1-[L-(-)-γ-амино-α-гидроксибутирил]канамицина А (амикацина) и его производных, в том числе солей с серной кислотой. Способ состоит в N-бензилоксикарбонилировании камикацина А с получением в результате его 6'-N-производного, ацилировании на позиции 1-N указанного производного при помощи активного сложного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-гидроксимасляной кис- лоты в водно-органичеcкой среде с последующим удалением защиты аминогрупп типовым способом, например, путем гидрогенолиза. Затем согласно этому описанию получали моносульфат или дисульфат амикацина в результате проведения реакции карбоната амикацина с серной кислотой с последующим изолированием целевой соли в системах, соответственно: вода-этанол или вода-метанол. Способом согласно этому патенту дисульфат амикацина получали осаждением в результате прибавления водного раствора дисульфата амикацина к метанолу, получая гигроскопический моногидрат упомянутой соли при выходе реакции превышающим 10%
Представленный в описании к польскому патенту N 102734 способ получения амикацина и его солей с серной кислотой состоит в последовательном проведении следующих реакций: N-бензилоксикарбонилирования камикацина А с получением в результате его 6'-N-производного, подвержения этого производного временной блокировке его аминогрупп в реакции с альдегидом с последующей конденсацией полученного основания Шиффа со сложным N-гидрокси-5-норборнено-2,3-дикарбокси- имидным эфиром L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-гидроксимасляной кислоты. После удаления предохранительных групп получают карбонат амикацина, который затем переводят в моно или дисульфат амикацина в аморфном и гигроскопическом видах.

Описанный способ требует многократного разделения реакционных смесей на хроматографических колонках, из-за чего, среди других причин, дает в результате низкий выход процесса в целом, составляющщий около 10% Кроме того, способ получения сложного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-гидроксимасляной кислоты характеризуется относительно высокой сложностью.

Дисульфат амикацина, полученный описанными методами, не только плохо фильтруется, но как показали опыты несмотря на жесткие условия во время сушки, практичеки содержит остаток метанола выше 1%
По патентному описанию США N 4 424 343, где как целевой продукт синтеза амикацина щелочи, использовали многидрат 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А, причем реакцию проводили с определенным количеством силилирующего средства, часть которого в этих условиях разлагалась водой, процесс силилирования продолжался 16 ч, а следующее после него ацилирование 19 ч. Продолжительное время реакции, а также присутствие воды в процессе силилирования действовали отрицательно на качество сырого продукта, в котором находились разные загрязнения, например, целевой канамицин А, его диациловое производное, а также неидентифицированные продукты, возможно стереаизомеры амикацина. Из-за большего количества побочных продуктов, при хроматографическом очищении растворов амикацина, в элюции использовали градиент концентраций, пользуясь 5 разными алюентами.

Согласно изобретению способ получения амикацина в виде аддитивных солей с серной кислотой заключается в том, что безводный комплекс 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентным металлом или реакционную смесь, содержащую этот комплекс, или полученный из комплекса с двухвалентным металлом безводный 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицин А подвергают реакции полисилирования по однофазной схеме в безводном органическом растворителе, таком как диметилформамид, диметилсульфоксид, пиридин или гексаметилдисилазан, причем последний используют в избыточном количестве, предпочтительно в диметилформамиде и пиридине, или же с добавкой производного пиридина, такого как дипиколиновая кислота или 3-гидроксипиридин, полученное полисилиловое производное 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонил- канамицина А подвергают реакции частичного гидролиза или алкоголиза путем прибавления воды или спирта в количестве 3,3 10% по объему по отношению к количеству применяемого безводного органического растворителя, после чего ацилируют раствором или образующимся в реакционной среде сложным N-гидроксисукцинимидным эфиром L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин- α-гидроксимасляной кислоты, затем реакционную смесь подкисляют до рН 1,0 1,6 и подвергают реакции гидрогенолиза в воде, возможно с добавкой метанола, поддерживая рН в диапазоне 1 3, предпочтительно 1,5 2, и после непосредственной очистки на ионитах и удалении части растворителя оставшийся раствор при помощи серной кислоты подкисляют до рН 1 5, предпочтительно 1 2, получая раствор соли амикацина с серной кислотой с концентрацией 25 100 мг антибиотика в 1 см³ раствора, к которому затем добавляют спирт, предпочтительно метанол, сначала в количестве 20 50% предпочтительно 25 40% от объема водной фазы, перемешивают до момента начала процесса выпадения кристаллической соли амикацина с серной кислотой.

Способом по изобретению также комплекс 6'-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентным металлом, образованный как побочный продукт синтеза комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонил- канамицина А с металлом, можно подвергать аналогично реакциям, добавляя аддитивную соль, например, дисульфат амикацина.

Процесс получения амикацина в виде его аддитивных солей из комплексов 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентными металлами, или только 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А, осуществляют на этапе полисилилирования в среде ацетонитрила.

Как известно, ацетонитрил это растворитель с большой токсичностью, требующий специальных предосторожностей, а кроме этого оба целевых продукта относительно трудно растворимые. Как оказалось, процесс можно вести в растворителях, таких как, ДМСО, ДМФ, гексаметилотриамид фосфорной кислоты (ГМФТ), пиридин и ГМДС, причем ГМФТ биологически отрицательно влияет на человеческий организм. Надо подчеркнуть, что в среде ДМФ и ДМСО, как 3,6'-ди-N-карбоксикарбонилканамицин А, так и его комплекс с металлом растворяются хорошо и сначала процесс полисилилирования проходит как реакция монофазная.

Независимо от того в каком растворителе ведется реакция полисилилирования, дальнейшая преработка похожа, но физическое свойство ДМФ здесь особенно предпочтительны. ДМФ обладает прево- сходством над гигроскопическим ДМСО, потому что он более летучий и лучше растворяет силилирующий агент. Он также более удобен из-за технологических причин, потому что в отношении синтеза комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентным металлом, проведенного в ДМФ, позволяет продолжать процесс без изменения растворителя. Применение указанных растворителей позволяет также провести процесс даже без использования катализатора силилирования и по времени не больше 5 ч.

3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканами- цин А, который не прореагировал в процессе силилирования и ацилирования с активным сложным эфиром L-(-)- γ-бензил- оксикарбониламин-α-гидроксимасляной кислоты или образовавшийся из него на этапе гидрогенолиза канамицин А, а также 6-N-бензилоксикарбонилканамицин А, обра- зовавшийся как побочный продукт в процессе синтеза 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицин А, можно и повторно подвергать всем стадиям реакций. Удаляя предохранительные группы из защищенного амикацина путем гидрогенолиза отметили, что в кислой среде процесс этот можно проводить в воде вместо ее смеси с органическим растворителем. Применение воды позволяет, после отделения катализатора гидрогенолиза, подавать раствор непосредственно на хроматографическую колонку без предвари- тельного повышения его концентрации. Выгодой, связанной с понижением значения рН до гидрогенолиза или регулированием во время ее поведения, является предотвращение адсорбции амикацина на поверхности катализатора гидрогенолиза. Отметили, что при проведении гидрогенолиза в известных условиях, некоторое количество антибиотика оставалось на катализаторе.

Проводя процесс по изобретению, получают высокую чистоту карбоната амикацина или только амикацин в растворе после гидрогенолиза. Это позволяет применять для элюции антибиотика из хроматографической колонки одного только вида элюента водного раствора гидроокиси аммония определенной концентрации. Не требуется также изолирование карбоната амикацина или только амикацина в процессе получения аддитивных солей амикацина, например, его дисульфата.

Особенно положительным вариантом способа изолирования дисульфата амикацина есть изолирование вместе с кристаллизацией. Полученный кристаллический продукт благодаря своему виду, очень хорошо фильтруется, а во время сушки легко "отдает" остатки растворителя. Этот кристаллический вид соответствует требованиям относительно веществ, применяемых в виде инъекционных растворов. Полученный продукт в готовом кристаллическом виде характеризуется высокой чистотой, что подтверждает метод жидкостной хроматографии под высоким давлением (HPIC). Продукт избавлен не только выходного амикацина, но прежде всего примесей стереоизомеров, в том числе 3-N-[L-(-)-γ-амино- α-оксибутирил]канамицина А (ВВ-К29), продукта ацилирования путем введения остатка 1-(-)-γ-амино-α-оксимасляной кислоты в аминовую группу для С-3, характеризующегося отрицательными биологическими свойствами. По основной схеме реакции по изобретению невозможно образование вредного побочного продукта при проведении реакции полисилилирования безводного продукта дизамещенной производной, так как при ацилировании активным сложным эфиром аминовая группа при С-3 защищается бензилоксикарбониловым остатком.

Предлагаемый метод охватывает несколько модификаций синтеза аддитивных солей 1-N-[L-(-)-γ-амино-α-оксибутирил]-канамицина А, т.е. амикацина. Выходы процесса, проведенного методом по изобретению, значительно выше, чем получаемые до сих пор. Кроме этого, применение метода значительно упрощает технологию образования желательного соединения, ведет к получению продукта высокой чистоты при сохранении экономичности производства вместе с улучшением условий безопасности труда.

П р и м е р 1. Получение дисульфата амикацина из комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с цинком путем полисилилирования в пиридине.

В безводный ратсвор 13,5 г комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с цинком в 120 см³ пиридина добавили 20 см³ ГМДС с 10 см³ ТМХС (однофазная схема), после чего все перемешивали при температуре 80^оС в течение 3 ч. После охлаждения профильтровали осадок, а фильтрат выпарили при пониженном давлении почти досуха. Маслянистый осадок растворили в 140 см³ ацетона, после чего в полученный раствор добавили 7,0 см³ воды и перемешивали в течение 30 мин. Затем дозами добавили 5,0 г сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-оксимасляной кислоты и перемешивали еще 1,5 ч. После этого при перемешивании добавли 120 см³ воды, довели рН смеси до 1,5 (с помощью 1н. раствора HCl) и перемешивали 30 мин. затем отделили силановую фазу, которая была избытком, а из водно-ацетонового раствора при пониженном давлении дистилировали ацетон. Остаток суспендировали в 500 см³ воды, добавили 1,5 г катализатора 5% Pd/С и перемешивали, подводя водород, при комнатной температуре в течении 4 ч. После отделения катализатора фильтрат подавали на заполненную ионитом CG-50 (NH⁴⁺) колонку. После промывания слоя водой вели элюацию с помощью 0,5 н. раствора NH₄OH. Фракции, содержащие продукт (оценка фракций с помощью, например, тонкослойной хроматографии) соединяли и при пониженном давлении увеличивали концентрацию до объема 50 см³. В водный концентрат продукта в течение 1-го часа закапывали 6н. раствор H₂SO₄ до получения значения рН 1,5, а в полученный раствор дисульфата амикацина концентрацией около 90 мг антибиотика на 1 см³ (микробиологическая оценка) закапывали в течение около 10 мин при комнатной температуре 17 см³ метанола, причем все перемешивали в течение 3 ч (по ходу перемешивания начинается кристаллизация продукта). Затем добавили 200 см³ метанола и перемешивали еще 1 ч. Профильтровали кристаллический осадок, промыли метанолом и высушили при пониженном давлении и при температуре 50^оС. По этому методу получили 7,0 г (выход 52% в/в) гидрата дисульфата амикацина, который дает в HPIC один пик, соответствующий амикацину с t_к ≈ 6,1. Биологическая активность полученного конечного продукта составила 723 цг/мг в пересчете на сухое вещество.

П р и м е р 2. Получение дисульфата амикацина из комплекса 3,6'-и-N-бензилоксикарбонилканамицина А с цинком путем полисилилирования в пиридине с добавкой дипоколиновой кислоты.

В безводный раствор 4,0 г комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с цинком в 50 см³ пиридина добавили 1,2 г дипиколиновой кислоты и перемешивали в течение 1 ч при температуре 80^оС. Затем добавили 12 см³ ГМДС (однофазная схема) и все перемешивали при тех же условиях еще 3 ч, а после медленного остывания изолировали осадок, промывая его 10 см³ безводного пиридина. Фильтрат вместе с промывками выпарили досуха при пониженном давлении, а сухой остаток растворили в 40 см³ ацетона, добавили 2 см³ воды и при комнатной температуре перемешивали в течение 30 мин. Затем закапали ацетоновый раствор сложного оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-оксимасляной кислоты из 1,2 г этой кислоты (по примеру 9) и перемешивали при комнатной температуре еще 1,5 ч. После этого профильтровали создавшийся осадок, добавили к фильтрату 40 см³ воды и при помощи 1N соляной кислоты рН раствора довели до 1,5, после чего в этих условиях перемешивали еще 30 мин. Отделили силановый слой, при пониженном давлении дистиллировали ацетон, а к полученному остатку добавили 100 см³ воды и 0,8 г катализатора 5% Pd/C, после чего перерабатывали аналогично примеру 1, получая 2,2 г (55% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 717 μr/мг в пересчете на сухое вещество при чистоте продукта, как в примере 1.

П р и м е р 3. Получение дисульфата амикацина из комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с кадмием путем полисилилирования в ДМФ.

В безводный раствор 3,5 г комплекса 3,6'-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с кадмием в 30 см³ ДМФ добавили 10,5 см³ ГМДС (однофазная схема), после чего все перемешивали при температуре 70 80^оС в течение 3 ч. После охлаждения профильтровали осадок, а фильтрат выпарили при пониженном давлении до консистенции густого масла. Остаток растворили в 30 см³ ацетона, после чего в полученный раствор добавили 1,5 см³ воды и перемешивали в течение 30 минут. Затем при перемешивании закапали во весь объем ацетоновый раствор сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-оксимасляной кислоты непосредственно после его получения из 1,0 г этой кислоты (по примеру 9) и перемешивали еще 1,5 ч. После этого добавили 30 см³ воды, с помощью 1н. раствора HCl довели рН смеси до 1,6 и перемешивали в течение следующих 30 мин, а затем после отгонки при пониженном давлении газообразных растворителей получили остаток, который перерабатывали аналогично примеру 1, получая 1,7 г (выход 49% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 711 μг/мг в пересчете на сухое вещество при чистоте продукта, как в примере 1.

П р и м е р 4. Получение дисульфата амикацина из канамицина А путем полисилилирования в ДМФ.

В раствор 9,5 г дигидрата ацетата цинка в 120 см³ ДМФ добавили 6 г канамицина А щелочи и перемешивали при температуре 50^оС в течение 5 ч, наблюдая медленное растворение осадка. Затем в раствор добавили 7,2 г N-бензилоксикарбонилоксисукцинимида и после растворения продолжали перемешивание, подогревая еще в течение 1 ч. Продистиллировали при пониженном давлении 30 см³ дистиллата, а в остаток добавли 30 см³ ГДМС (однофазная сдема) и перемешивали, защищая от влаги, при температуре 80^оС в течение 3 ч. Когда остыл, профильтровали образовавшийся осадок, промывая до 15 см³ безводным ДМФ. Фильтрат вместе с промывками выпарили досуха, получая концентрированную маслянистую жидкость, из которой после добавления 80 см³ ацетона медленно отделялся белый осадок. Этот осадок профильтровали, промывая 10 см³ ацетона и добавляя к фильтрату промывки. В раствор добавили 5 см³ воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем в течение 15 мин закапывали ацетоновый раствор сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламин-α-гидроксимасляной кислоты непосредственно после его получения на 3,4 г этой кислоты (по примеру 9). Ацилирование вели 1,5 ч, перемешивая при комнатной температуре, после чего добавили 100 см³ воды, с помощью соляной кислоты рН смеси довели до 1,5 и перемешивали в этих условиях еще 30 мин. Силановый слой, являющийся избытком, отделили, при пониженном давлении отогнали ацетон, в избыток добавили 300 см³ воды и 2 г 5% Pd/C, после чего перерабатывали аналогично примеру 1, получая 4,3 г (выход 72% в/в) дисульфата амиакацина с биологической активностью 709 μr/мг в пересчете на сухое вещество при чистоте продукта, как в примере 1.

П р и м е р 5. Получение дисульфата амикацина из канамицина А путем полисилилирования в ДМФ с добавкой 3-оксипиридина.

9,5 г дигидрата ацетата цинка растворили в 100 см³ метанола, после чего добавли 6 г канамицина А щелочи и после быстрого растворения перемешивали еще 1 ч при температуре 50^оС. Затем в раствор добавили 7,2 г N-бензилоксикарбонилоксисукцинимида и продолжали перемешивать в тех же условиях еще 1 ч. Полученный послереакционный раствор выпаривали досуха при пониженном давлении, а остаток растворили в 120 см³ ДМФ и продистиллировали при пониженном давлении 20 см³ дистиллата. Затем добавили 7,3 г 3-оксипиридина и перемешивали при температуре 80^оС в течение 1 ч, после чего добавили 35 см³ ГМДС (однофазная схема) и перемешивали в тех же условиях еще 3 ч. Послереакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении, а в остаток добавили 130 см³ ацетона, перемешивали 30 мин при комнатной температуре, после чего профильтровали не растворившийся осадок, промывая его 20 см³ ацетона и добавляя промывки в фильтрат. В раствор добавили 5 см³ воды и перемешивали в тех же условиях еще 30 минут. Затем дозировали 4,5 г сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты. Ацилирование проводили 1,5 часа, перемешивая при комнатной температуре, затем добавили 100 см³ воды, закапали 1N соляной кислотой, доводя рН смеси до 1,5 и перемешивали еще 30 мин. Отделили силановый слой, отогнали при пониженном давлении ацетон, в остаток добавили 300 см³ воды и 2 г катализатора 5% Pd/C, после чего перерабатывали аналогично примеру 1, получая 4,0 г (выход 67% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 702 ur/мг в пересчете на сухое вещество. Чистота, как в примере 1.

П р и м е р 6. Получение дисульфата амикацина из 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А путем поликсилилрования в ДМФ.

В безводный раствов 8,8 г 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А (получненый из 8,4 г канамицина А 13,4 г дигидрата ацетата цинка и 10,1 г N-бензилоксикарбонилоксисукцинимида и типично профильтрован) в 100 см³ ДМФ добавли 180 см³ ГМДС (однофазная схема), после чего все подогрели до температуры 70^оС и перемешивали в тех же условиях 1,5 ч. Затем при пониженном давлении отогнали растворитель, а полученный маслянистый остаток растворили в 60 см³ ацетона, добавили 5,0 см³ воды и перемешивали 30 мин при комнатной температуре. Затем в полученный раствор закапали в течение 15 мин ацетоновый растовр сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбо- ниламино-α-оксимасляной кислоты непосредственно после чгео получения из 3,4 г L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-окси- масляной кислоты (по примеру 9).

Ацилирование проводили 1,5 ч при комнатной температуре, после чего добавили 90 см³ воды, подкислили 1 н. соляной кислотой до рН 1,5 и перемешивали еще 30 мин. Затем отделили силановую фракцию, а от водно-ацетонового раствора отогнали при пониженном давлении ацетон. Остаток суспендировали в 600 см³ воды, добавли 2,0 г катализатора 5% Pd/С и перемешивали, подводя водород при комнатной температуре в течение 4 ч. После отделения катализатора фильтрат переработали аналогично примеру 1, получая 7,7 г (выход 87% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 715 ur/мг в пересчете на сухое вещество. Чистота, как в примере 1.

П р и м е р 7. Получение дисульфата амикацина из 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А путем полицилилирования в ГМДС.

В суспензию 4,4 г безводного 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А в 40 см³ ГМДС добавли 0,2 г сульфата аммония, после чего все перемешивали в течение 5 ч при 80 90^оС. Затем отделили неорганический осадок, а оставшийся раствор выпарили при пониженном давлении почти досуха. Полученный остаток растворили в 30 см³ ацетона, а в полученный раствор добавли раствор 2,0 г L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты и 0,91 г N-оксисукцинимида в 20 см³ ацетона. Затем добавили 1,63 г размельченного NN-дициклогексилоккарбодиимида и перемешивали 30 мин, после чего добавили 5 см³ воды и перемешивали еще 1 час. Изолировавшийся осадок отделили, а в фильтрат добавили 40 см³ воды и подкислили с помощью 1н. HCl до рН 1,5. Все перемешивали 30 мин, затем из полученной смеси отогнали при пониженном давлении газообразные растворители. Остальное растворили в 300 см³ воды, добавили 1,0 г катализатора 5% Pd/C и перерабатывали дальше, как в примере 1, получая 3,6 г (выход 82% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 718 μr/мг в пересчете на сухое вещество. Чистота, как в примере 1.

П р и м е р 8. Получение дисульфата амикацина из 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А путем поликсилилирования в ДМСО.

В безводный раствор 4,4 г 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А в 50 см³ ДМСО добавили 9 см³ ГМДС (однофазная схема) и все перемешивали при температуре 70 80^оС в течение 2 ч. Затем отделили неорганический осадок, а от остального раствора отогнали при пониженном давлении газообразные производные силана. В полученный раствор добавили 5 см³ метанола и перемешивали 45 мин при комнатной температуре, затем закапывали ацетоновый раствор сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты непосредственно после его получения из 1,7 г этой кислоты (по примеру 9). Все перемешивали еще 1 час, затем в реакционную смесь добавли 40 см³ метанола и 40 см³ воды и подкислили с помощью 1 н. HCl до рН 1,3 и еще перемешивали 1 ч. Затем от реакционной среды отгоняли при пониженном давлении газообразные растворители, а остальное растворили с помощью 250 см³ воды. Образовался осадок, который профильтровали, а затем растворили в 300 см³ воды и 75 см³ метанола. Добавли 0,75 г катализатора 10% Pd/C и при рН в пределах 2 3 проводили гидрогенолиз.

После окончания реакции профильтровали катализатор, а фильтрат подавали в колонку, заполненную ионитом СG-50 (NH₄⁺). С этого слоя элюировали антибиотик с помощью 0,5 н. раствора NH₂OH. Фракции, содержащие продукт, соединили и увеличили концентрацию при уменьшенном давлении до объема 40 см³. В водный концентрат продукта закапывали концентрированный H₂SO₄ до получения рН 1,9, затем перемешивали еще 1 ч при комнатной температуре. В полученный таким же методом водный раствор дисульфата амикацина концентрацией около 60 мг антибиотика на 1 см³ (микробиологичекая оценка) закапали в течение 5 мин при комнатной температуре 15 см³ метанола и перемешивали 3 ч (по ходу перемешивания начинается кристаллизация подукта). Затем добавли 150 см³ метанола и перемешивали еще 1 ч. Профильтровали кристаллический осадок, промыли его метанолом и высушиливали при пониженном давлении при температуре 50^оС, получая 3,3 г (выход 75% в/в) дисульфата амикацина с биологической активностью 730 μr/мг в пересчете на сухое вещество. Чистота, как в примере 1.

П р и м е р 9. Получение сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты в виде ацетонового раствора.

В раствор 25,3 г L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты и 11,5 г N-оксисукцинимида в 250 см³ ацетона добавли 20,6 г NN-дициклогексилкарбодиимида и перемешивали при комнатной температуре 3 ч. Выделившийся осадок профильтровали, промыли с помощью 50 см³ ацетона и соединили промывки с фильтратом. Полученный ацетоновый раствор, содержащий 33 г сложного N-оксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты, и является целевым полупродуктом для ацилирования.

П р и м е р 10. Получение моносульфата амикацина из 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А путем полисилилирования в ДМФ.

К безводному раствору 4,4 г 3,6'-ди-бензилоксикарбонилканамицина А в 50 см³ ДФ прибавляют 9 см³ ГМДС (однофазная схема), после чего реакционную смесь подогревают до температуры 80^оС и перемешивают при этих условиях в течение 1,5 ч. Затем при пониженном давлении отгоняют растворитель, а полученный масловидный остаток растворяют в 30 см³ ацетона, добавляют 2,5 см³ воды и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. К таким образом полученному раствору по каплям добавляют ацетоновый раствор сложного N-гидроксисукцинимидного эфира L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты непосредственно после его получения из 1,7 г L-(-)-γ-бензилоксикарбониламино-α-оксимасляной кислоты (согласно примеру 9). Ацилирование продолжают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, а затем добавляют 50 см³ воды, подкисляют 1н. соляной кислотой до рН равного 1, 2 и продолжают перемешивать в течение 30 мин. После этого силановый слой отделяют, а из водно-ацетонового раствора при пониженном давлении отгоняют ацетон. Полученный остаток разбавляют 100 см³ воды, добавляют 0,5 г катализатора 5% Pd/C и при перемешивании и комнатной температуре в течение 5 часов пропускают водород, поддерживая рН в диапазоне 2 3. Затем отфильтровывают катализатор, а фильтрат после нейтрализации при помощи концентрированного водного раствора NH₄OH направляют в колонку, наполненную ионитом СG-50 (NH₄⁺). Из этого слоя при помощи 0,5 н. раствора NH₄OH элюируют антибиотик. Фракции элюата, содержащие продукт, соединяют и сгущают при пониженном давлении до объема ок. 35 см³. Затем к водному концентрату продукта по каплям вводят эквимолярное (1: 1) количество 2р. раствора H₂SO₄ и полученный раствор перемешивают в течение 1 ч. К полученному таким образом водному раствору моносульфата амикацина концентрацией около 75 мг антибиотика на 1 см³ (по микробиологической оценке) при перемешивании по каплям вводят 16 см³ метанола, а в момет начала процесса кристаллизации добавляют еще 25 см³ метанола и продолжают перемешивать в течение 1 ч. Затем отфильтровывают выпавший осадок, промывают его метанолом и подвергают сушке. В результате выполнения вышеописанных действий получают 3,2 г (выход 73% в весовом отношении) моносульфата амикацина, при ЖХВД характеризующейся наличием одного пика, соответствующего амикацину с t_к ≈ 6,1 мин; биологическая активность целевого продукта равна 844 μr/мг.

Сущность изобретения: продукт амикации сульфаты. Реагент 1 безводный комплекс 3,6-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентным металлом, возможно "in situ". Реагент 2: серная кислота. Условия реакции: реагент 1 полисилилируют в безводном ДМФА, ДМSO, пиридине или гексаметилдисилазане, возможно с добавкой дипиколиновой кислоты или 3-гидроксипиридина. Полученное полисилиловое производное подвергают реакции а) частичного гидролиза с помощью воды или спирта в количестве 3,3 10% по отношению к растворителю, после чего ацилируют сложным N-гидроксисукцинимидным эфиром L-/-/-Альфа-бензилоксикарбониламин-Альфа-гидроксимасляной кислоты. б) гидрогенолиза в воде с добавкой метанола при pH 1 3 предпочтительно 1,5 2. После очистки на ионитах и удалении растворителя добавляют последовательно серную кислоту до pH 1 5, предпочтительно 1 2 и спирт, предпочтительно метанол, в количестве 20 50% предпочтительно 25 40% от объема водной фазы. Целевой продукт высокой степени чистоты и соответствует требованиям, предъявляемым к веществам, применяемых в виде инъекционных растворов. Выход 49 82% Биологическая активность 723 мг/мг в пересчете на сухое вещество.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИКАЦИНА В ВИДЕ АДДИТИВНЫХ СОЛЕЙ С СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ, отличающийся тем, что безводный комплекс 3,6-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А с двухвалентным металлом или реакционную смесь, содержащую этот комплекс, или полученный из комплекса с двухвалентным металлом безводный 3,6-ди-N-бензилоксикарбонилканамицин А подвергают реакции полисилилирования в безводном органическом растворителе, таком, как диметилформамид, диметилсульфоксид, пиридин или гексаметилдисилазан, причем последний используют в избыточном количестве предпочтительно в диметилформамиде и пиридине или же с добавкой производного пиридина, такого, как дипиколиновая кислота или 3-гидроксипиридин, полученное полисилиловое производное 3,6-ди-N-бензилоксикарбонилканамицина А подвергают реакции частичного гидролиза или алкоголиза путем прибавления воды или спирта в количестве 3,3-10 об. по отношению к количеству применяемого безводного органического растворителя, после чего ацилируют раствором или образующимся в реакционной среде сложным N-гидроксисисукцинимидным эфиром L(-)-γ -бензилоксикарбониламин- -α- -гидроксимасляной кислоты, затем реакционную смесь подкисляют до рН 1,0 - 1,6 и подвергают реакции гидрогенолиза в воде, возможно с добавкой метанола, поддерживая рН в диапазоне 1 3, предпочтительно 1,5 2,0, и после непосредственной очистки на ионитах и удаления части растворителя оставшийся раствор при помощи серной кислоты подкисляют до рН 1 5, предпочтительно 1 - 2, получая раствор соли амикацина с серной кислотой с концентрацией 25 100 мг антибиотика в 1 см³ раствора, к которому затем добавляют спирт, предпочтительно метанол, сначала в количестве 20 50% предпочтительно 25 - 40% от объема водной фазы и перемешивают до момента начала процесса выпадения кристаллической соли амикацина с серной кислотой.