Способ получения амино- -оксибутирил/-канамицина Советский патент 1979 года по МПК C07H15/234 A61K31/702 

3 нованнй 111иффа осуществляют Г,0-1,3молярным количеством Н-оКсиСукцинимидного эфира L-(-)- у -бензилоксикарбониламино-е --оксимасляной кислоты в среде диметилформамида (ДМФА). При мер 1. Получение L-(-)- J -бенэилоксикарбониламино- о --оксимасляной кислоты. 7,4 г (0,062 моль) L-(-)-у-амино -оС- рксимасляной кислогы прибавляют раствору 5,2 г (0,13 моль) гидрата окиси натрия в 50 мл воды, при перемешивании и 0-5°С за 0,5 ч п Уйк1Ш- вают 11,7 г (0,068 моль) карбобензоксихлорида и перемешивают 1 ч при той же температуре. Реакционную смесь промывают 50 мл эфира, подкисляют до рН 2 разбавленной соляной кйслотой иэкстрагируют 4 X 80 мл эфира. Экстракты объединяют, промывают небольшим объемом,насыщёйноге раство ра хлорида натрия,сушат над безводны сульфатом натрия и фильтрует. Фильтрат выпаривают в вакууме, остаток кристаллизуют из бензолаи получают 11,6 г (74%) бесцветных пластинчатых кристаллов , т.пл. 78,5-79,. Вычислено,%: С 56,91; Н 5,97; N 5,53. С,2 Н,5 N05 Найдено,%: С 56,66; Н 5,97; N 5,47. м е р 2. Получение сложно го эфира М-оксисукцинимида L-(-)- -бензилоксикарбониламино-. -оксимас аяной.кислоты. Раствор 10,6 г (0,042 моль) соед нения полученного в примере 1 и 4,8 г (0,042 моль) Ы-оксисук1|ннимид в 200 мл этилацетата охласждают до , прибавляют 8,6 г (0,042 моль) дициклогексилкарбодиимида, выдерясивгцот в течение ночи в холодильнике у дициклогексилмочевину отфильтровыйа вают, фильтрат упаривают до объема мл в вакууме, бесцветные кристал лы отфильтровывают и получают 6,4 г продукта, Т.Ш1. 121-122,. Фильтрат выпариваютдосуха в вакууме, остаток пробивают 20 мл смеси бензол-н-гексан и выделяют дополнительное количество целевого со единерия,Общий выход 13,4 г (92%); оС J- 1,5 (, хлороформ), а ВачнсЛено,%8 С 54,85; Н 5,18; N 8,00. Найдено,%: С 54,79; 54,70; Н 5,2 5,20; N 8,14; 8,12. П р .и мер 3. Получение N-(бен зил ок си к арбонилок си) су кци ними да. 23 г (0,2 моль) N-оксисукцинимид растворяют.в picTBOpe 9 г (0,22 мол гидрата окиси натрия в 200 мл воды, при перемесоиванйи и охлаждении водо прикапывают 34 г (0,2 моль) карбр667142бензоксихлорида и перемешив.ают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают врдой и сушат на воздухе. Выход 41 г (82%) . После перекристаллизации смеси из бензол-н-гексан (10:1) получают бесцветные призмы, т.пл. , Пример 4. Получение 6-карбобензоксиканамицина А. Раствор 42,5 г (90 ммоль) канамицина А (в форме свободного основания) в 450 мл воды и 500 мл ДМФА охлаждают до температуры ниже 0°С и энергично перемещййают, в течение ч прикапывают раствор 2,4 г (90 ммоль) N- (бензилоксикарбонилокси)-сукцинимида в 500 мл ДМФА, перемешивают при (-10) в течение ночи и при комнатной температуре в течение дня и выпаривают в вакууме при температуре ниже 5ос. Маслянистый остаток растворяют в смеси 500 мл воды и 500 мл бутанола, фильтруют, бутанольный и водный слой обрабат;ывамт водой, насыщенной бутанолом (2 X 500 мл), и бутанолом, насыщенным водой (2 X 500 мл), соответственно, с применением метода, сходного с противоточной экстракцией. (Три водных слоя объединяют и выпаривают досуха в вакууме.К маслянистому, остатку, часть которого Кристаллизуется при выдерживании при комнатной температуре/ приба1вляют 1рО мл метанола, который растворяет масло и отделяет егр таким образом от кристаллов. После прибавления v3ОО мл этанола смеси выдерживают при комнатной температуре в течение ночи и кристаллическую массу отфильтровывают. Продукт (44 г) содержит небольшое количест1во канамицина А по данным тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе н-пропанол-пиридин-уксусная КйСЛЬта - врда (15:10:3:12) при проявлении нингидрином. Сырой продукт растворяютв300 мл води и хроматографируют на колонке (диаметр 30 мм) со смолой CG-50 в NHt-форме (500 мл) элюируя 0,1 н. раствором гидрата окиси аммонияи собирая фракции по 10 мл. Фракции 10-110 объединяют и выпаривают досуха в вакууме, прлучая 24,6 г (45%) бесцветного б-м арбобензоксиканамицина А, который начинает ШаййТббЯ и опрашиваться при 204с и разлагается при 212°С с выделением газа, tl06(, вода) . При тех на силикагеле F 254 и проявлений нингидрином в системе н-пропанрл-пирйдин-уксусная кислота вода (10:10:3:12); ацетон-уксусная кислота - вода (20:6:74); хлороформ-метанол-концентрированный раствор идрата окиси аммония .- вода (1:4:2 :1) и метилацетат-н-пропанол-кОйёнт1 йрованный раствор гидрата окиси ёилмонйя (45 :105 ; 60) для 6-кар1

5 бооензоксиканамицина A и канамицина А величина R| составляет 0,42 (главная), 0,33 (незначительная) и 0,04; 0,24 и 0,1,4; 0,76 и 0,50 и 0,22 (об наружение по реакции с антроном-сер ной кислотой) и 0,04 (обнаружение по реакции с антроном-серной кислотой) соответственно / Конечный продукт содержит небольшие количества двух примесей (по дан ных тех в одной из указанных систем растворителей). Пример 5. Получение L-(-)- -амино-с --оксймасляной кислоты. 5,0 г амбутирозина А кипятят 1ч с обратным холодильником с 160 мл/ 0,5 н.раствора гидрата окиси натрИя. Гидролизат нейтрализуют 6 и.соляной кислотой и хроматографируют на колонке со CG-50 в NH.-форме% Целевую кислоту элюируют водой и сушат в1амораживаниём. Получают кристаллический продукт, .т.пл. 212,5-214,, Пример 6. Получение L-(-)-j4 -амино-oL-оксимасляной кислоты. К paCTBiopy 25 г (0,1 моль) 2-окси / -- ФтаЛимидомаСляной кислоты в 200 мл этанола прибавляют раствор 29 г (0,1 кюль) дегидроабиетиламина в 130 мл этанола, энергично BfiTpSxff вают 1 мин и выдерживают 5 ч при ком натной температуре. Тонкие игольчатые кристаллы 6тфильтровывайт, промывают 50 мл эта ;нола и сушаг на воздухе. Получают 30,1 г (56%) диастерёомё ра соли дегидроабиетиламина, т.гш. 93-94 С; 15 (,5, мета;нод). .. После перекристаллизации ,из 300 м этанола получают 23,2 г (43%) чистого 1,-сС-окси- -фталимидобутирата дегидроабиетиламмония, т. пл. 94-9 +10,8 (,5, метанол) . Дальнейшая кристаллизация не приводит К изменению температуры плавления и о{.д . Вычислено,%: С 69,64; Н 8,02; N 5,07. C32H42N205-H20 Найдено,%: С 69,58; Н 8,08; N 5,07. :к раствору 1,5 г (0,014 моль) карбоната натрия .в 40 мл воды прибав ляют 5,3 г (0,01 моль) L-oC-окси-у -фталимидобутирата дегидроабиетил аммония и 60-МЛ эфира., энергично перемешивают до полного растворения. Эфирный слой отделяют. Водный слой промываю 2 х 20 мл эфира и выпаривают до объема 15 мл в вакууме, прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты и кипятят с об эатным холодильником в теченй1ё 10 ч. После охлаждения фталевую кислоту отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме, остаток растворяют в 10 мл воды и выпаривают досуха. Эту опера6цию повторяют два раза для удаления избытка соляной кислоты. Остсоощийся сироп растворяют в 10 мл воды и фильтруют для удаления небольшого количества фталевой кислоты. Фильтрат пропускают через колонку со смолой IR-120 в Н -форме (1 см х X 35 см). Колонку промывают 300 мл воды и элюируют 1 н.раствором гидрата окиси аммония, собирая фракции по 15 мл. Фракции, дающие положительную ре.акцию на нингидрйн (10-16), объединяют и выпаривают в вакууме, получая сироп, который постепенно кристаллиэуется. Кристаллы растирают с этанолом, отфильтровывают и сушат в вакуум-эксикаторе. Получают 0,78 г (66%) целевого продукта, т.пл. 206-20700; (оС -29 « (,5, вода) . ИК-спектр продукта идентичен .ИКспектру образца, полученного из ам,бутирЬзиНа,1 Пример 7. Получение 6-карбобензокси-1,3,3-три-п-нитробензальканамицина А. . 9,0 г (14,5 ммоль) 6-карбобензоксиканамицйна А суспендируют в 500 мл ;абсЬлютного э Шолапри и прибавляют 8,7945 г (58,2 ммоль) п-нитробензальдегида, нагревают до температуры кипения с обратнь1м холодильником, наблюдая-образование прозрачного желтого раствора с последующим быстрым выделением белого твердого вещества. -, Смесь кипятят 3 ч с обратным холодильником, охлаждают, продукт отфильтровывают и промывают небольшим объёмом абсолютного этанола. Выход белого кристаллического вещества 14,0 г (94,5%), т.пл. 233234°С. Вычислено,%: С 55,46; Н 5,05; N 9,63. . С4-/К51ЩО э Найдено,%: С 55,39; Н 5,08; N9., 60. Пример 8. Получение (-)-З -амино-еС-Оксибутирил -канамицина А. 5,0 г (. ммоль) 6-карбобензокси-1,3,3-три-п-нитробензальканамицина А растворяпот в 50 мл ДМФА при . 2,064 г (5,895 ммоль) сложного эфира N-оксисукцйнимида L-(-)- -бензилоксикарбониламино- oit--оксимасляной кислоты растворяют в 20 мл ДМФА при и медленно прибавляют при энергичном перемешивании к приготовленному pacTlBOpy оснований Шиффа в течение 75 мин, перемешиваютв течение ночи при 24°С. В вакууме, создаваемом паровым эжектором, раствор мгновенно испарят при , затем мгновенно

испаряют ,при прибавлении 100 мл метанола.

Пблученное вязкое масло растворяют в 10Q МПсмеси дирксан-вода (Isl), прибавляют 10 мл ледяной уксусной кислоты, помещают в склянку Парра объемом 500 мл, вводят 2,5 г 5%-ного палладия на угле (по Энгельгардту) и гидрируют 4 ч при давлении водорода 3105 Н/м и температуре . Общее падение давления в течёние этого периода времени (при закрытой склянке) составляет 6003 Н/м2, включая периодическое повышение давления.

Смесь фильтруют через слой диатомитовой земли, промывают ее 3 х 50 мл 50%-нога водного диоксана.

Объединенные фильтраты мгновенно испаряют для перевода продукта в твердое состояние и подвергают азертропноА отгонке с 100 мл н-бутаНола, после чего мгновенно испаряют с метанолом, получая вязкое масло, которое растворя1от в 30 мл метанола и медлен;но выпивают в 1000 мл ходсдного () эфира при энергичном перемешива иий...--.

Перемешивгиот образовавшуюся суспензию 0,5 ч в ледяной байе, осадок отфильтровывают и сразу же сушат в вак ум-зксикаторе над пятирйИсьЮ фосфора.

Получают 4,9620 г продукта, кото-, рый по данным тех состоит в осиовном из цёлейогр соединения, канамицина А, 4-аминЬ-2-оксимасляной кислоты и дов ди- и тризамещенного канамицина А.

В стеклянную коло11ку 100 i с амберлитом 1RC-40 в NHf -форме {тип 1, размер частиц 100/200 меш, высота слоя смолы 960 мм) загружают 4,600 г продукта, растворенного в 15 мл воды, элюирукзт градиентным способом сначала водой, затем 2 н, раствором гидрата окиси . Собирают 295 фракций, промывают колонку 1,5 л 3 н.раствора гидрата окиси аммония. Фракции, однородные по величине с р, объединяют и лиофилизируют.

Т.пл. (разл.) {€Л.е +85 (, вЪда).

Вычислено,%: С 40,62; Н 6,68f N 9,87.

С2гН4з%о з2НгСО

Найдено,%1 С 40,21 39,79; Н 6,96; 6, 9,37; 9,49.

Пример 9. Получение моносульфата 1- L- (-) - -акмио-оС-оксибутирил -канаМицина А.

1 моль (-)-f -амино- сс-оксибутирил -канамицина А растворяют в 1-3 л воды, фильтруют, охлаждают при переме11швании добавляют 1 моль серной кислоты,.растворенной в 500 мл воды, перемешивают 30 мин, прибавляют холодный этанол До начала осаждения кристаллов, которые отфильт ровывгиот..

Пример 10. Получение дисульфата (-)- -амико-оС-оксибутирил)-канамицина А.

35 г (-) --j--амино-оС-оксибутирил)-канамицина А (в форме тригидрата монобикарбоната) растворяют

в 125 мл деионизированной воды (рН «9,0) . Доводят рН до 7-7,5 путем прибавления 50%-ной (объем/объем) серной кислоты.

Добавляют 8,5 г активированного

древесного угля и перемешивают 0,5 ч при , уголь отфильтровывают и промывают 40 мл воды. Промывные воды прибавляют к фильтрату, подкисляют до рН 2-2,6 при помощи 50%-ной (объем/объем) серной кислоты, наблюдая выделение большого количества двуокиси углерода.Раствор обезгаживают в вакууме при переманивании в течение 20 мин, прибавляют 8,5 г древес- ного угля, перемешивают 0,5 ч при , уголь отфильтровывают и промывают 35 мл деионизированной воды. Промывные вода прибавляют к фильтрату, подкисляют до рН 1-1,3 при помопш 50%-ной (объем/объем) серной кислоты, прибавляют при быстром перемешивании за 10 мин к 600-800 мл метанола (3-4 объема метанола), перемешивают 5 мин при рН 1-1,3, пропускают сквозь сито (100 меш), перемешивают 2 мин и твердому веществу дают осесть в Течение 5 мин. Большую часть верхнего слоя жидкости декантируют. Оставшийся шлам отфильтровывают, прокЕлвгиот 200 мл метанола и

5 сушат в вакууме при и течение 24 ч. Выход г1морфногр дисульфата 32-34 г для моногидрата ot J2j) +74,75. Продукт разлагается при 22р-223« С.

Q Элементный анализ приведен для сухого вещества.

Найдено,%: С 32,7; ;33,52 32,3; N 8,78; 8,7; 8,2; 8,8; S 8,75; 8,9; 7,8; 8,85,

Вычислено,; С 33,5; N8,97;

S 8,2.

Формула изобретения

1. Способ получения (-)- -амино-Л-оксибутирил) -канамицина А формулы

СН -СНз-ЯНз отличаю щи йс я тем, что Ы бенэнлоксикарбонилканамицин А под вергают взаимодействию, по меньшей мере, с 3-кратным молярным избытком альдегида общей формулы R-CНО, где R - фенил, п-нитрофенил, о-оксифе нил, п-метоксифенил или трет-бутил, в среде низшего спирта при температуре от до температуры кипения растворителя, обра.зующееся основани Миффа общей формулы Н, «HjUHdOOCKj leHs HO-v tojOtt но fl :; имеет: значетгя, указанные выше ацилируют Ы-окси :укцинимидным эфиром 210 L-(-)- -бензилоксикарбониламино-ot-оксимасляной кислоты с последующим гидрированием реакционной смеси. 2.Способ по п.1, отличающийся тем, что N-бензилоксикарбонилканамицин А подвергаю взаимодействию с 3,5-4,5-молярнь:м количеством п-нитробензальдегида, салицилового альдегида или бензальдегида в абсолютном метаноле, этаноле, н-пропаноле или изопропаноле при температуре кипения реакционной смеси 3.Способ по , отличающийся тем,что ациЛирование основания Шиффа осуществляют 1,0-1,3-молярным количеством N-оксисукцинимидного эфира L-(-) -f-бензилоксикарбониламино-oL- оксимасляной кислоты э сред диметилформамида. Источники информации, принятые во. внимание при экспертизе 1. Мак-Оми Дж. С. Защитные группы, сб. Успехи органической химии , М., мир, т. 3, с. 203, 1966.