СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ ОРГАНИЗМОВ ОТ СУБСТРАТА Российский патент 1995 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, ветеринарии, биологии и может быть использовано в клинической и ветеринарной практике, а также во всех видах исследований, требующих выделение и подсчет паразитических плоских червей (цестод, трематод, моногеней), прикрепленных к тканям инвазированных животных. Кроме того, необходимость борьбы с гельминтозами человека и животных, вызываемыми паразитическими плоскими червями, возникновение резистентности паразитов к имеющимся противопаразитарным средствам требует поиска высокоэффективных, малотоксичных способов воздействия на паразитов, среди которых воздействие на их прикрепительный аппарат, вызывающее потерю способности паразита фиксироваться на ткани инвазированного организма.

Известен способ отделения паразитических простейших трипаносом от форменных элементов крови инвазированных животных заключающий в том, что с целью повышения выхода паразитарной массы кровь гепаринизируют, смешивают с забуференным физиологическим раствором при рН 7,0-7,2, наслаивают на растворы сахарозы молярностью 1,75 и 1,46, центрифугируют при 1000-1200 об/мин 5-10 мин, отделяют трипаносомы и промывают от сахарозы забуференным физиологическим раствором с центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5-10 мин. Недостатком указанного способа сложность и трудоемкость приемов, применяемых для его осуществления.

Целью изобретения является изыскание простого способа открепления паразитических плоских червей от субстрата.

Модельные эксперименты были выполнены на цестодах тетратиридиях мезоцестоидес корти (Mesocestoides corti) и моногенеях полистома интегерримум (Polystoma integerrimum).

Способ осуществляют следующим образом.

Моногеней извлекают из лягушки вместе с тканью мочевого пузыря, где они паразитируют и остаются прочно прикреплен- ными с помощью фиксаторных органов к ткани в течение нескольких дней в условиях in vitro. Гельминтов вместе с тканью мочевого пузыря помещают в раствор резерпина в концентрации 2,5 ˙ 10^-4 г/мл при комнатной температуре. Через 17 ч происходит открепление гельминтов от ткани. Число открепленных паразитов составляет 90% от общего числа исследованных паразитов при данных условиях. Полученные результаты представлены в таблице.

Из таблицы видно, что из 42 экз. исследованных полистом 38 экз. (90%) через 17 ч, оказались отделенными от ткани. При более низкой температуре (5^оС) число открепленных паразитов за указанное время несколько снижено и составляет 80% от общего числа исследованных паразитов (см. таблицу). Меньшие концентрации резерпина за отмеченное время имели либо слабый эффект, либо были не эффективны. При помещении гельминтов в чистый физиологический раствор их способность прикрепляться восстанавливается.

Контролем являются гельминты, которые содержатся в физиологическом растворе и остаются прикрепленным к субстрату в течение всего времени наблюдения (3-4 дня).

При использовании в качестве экспериментальной модели цестод (тетратиридии M. corti) гельминтов выделяют из экспериментально зараженных белых мышей и помещают в физиологический раствор при температуре 37^оС, где паразиты с помощью присосок прикрепляются друг к другу, образуя скопление, состоящие из различного числа паразитов.

На чертеже показано влияние резерпина на открепление цистод (тетратиридии M. corti) от субстрата: А контроль, Б эффект резерпина (2,5 ˙ 10^-4 г/мл).

При добавлении к прикрепленным друг к другу гельминтам раствора резерпина (2,5 ˙ 10^-4 г/мл) через 15-20 мин происходит открепление червей (см. чертеж). Эффект составляет 100% Паразиты, предварительно помещенные в раствор резерпина, теряют способность прикрепляться друг к другу. При помещении гельминтов в чистый физиологический раствор способность прикрепляться у них восстанавливается.

Таким образом, использование предлагаемого способа вызывает потерю способности паразитических плоских червей фиксироваться на субстрате и тем самым позволяет эффективно воздействовать на паразитов, прикрепленных к тканям инвазированного организма, что может быть использовано при терапии гельминтозов, являющихся большой проблемой в медицине и ветеринарии, нанося вред здоровью человека и являясь причиной больших экономических потерь в животноводстве.

Использование: экспериментальная медицина, биология, ветеринария. Сущность изобретения: берут паразитических плоских червей, прикрепленных к субстрату (цестоды, моногенеи), помещают в физиологический раствор, температура которого соответствует температуре среды обитания паразитов, при этом физиологический раствор добавляют резерпин в конечной концентрации 2,5·10^-4 г/мл с последующим визуальным наблюдением. Эффективность составляет 90 100% 1 табл. 1 ил.

СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ ОРГАНИЗМОВ ОТ СУБСТРАТА, включающий воздействие на паразитов, прикрепленных к субстрату веществ, отличающийся тем, что в качестве представителей паразитических организмов используют паразитических плоских червей цестод и моногеней, при этом червей помещают в физиологический раствор, температура которого соответствует температуре среды их обитания, содержащий резерпин в конечной концентрации 2,5 · 10^-4 г/мл, с последующим визуальным наблюдением.