Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инвазированных животных для изготовления биологических препаратов.

Цель изобретения - повышение выхода паразитарной массы.

П р и м е р. В опыте были использованы 3 группы белых мышей, по 10 в каждой. Мышей заражали лабораторным штаммом возбудителя случной болезни лошадей и на пике паразитемии (200-300 пэраз ов в 1 поле зрения микроскопа) брали от них кровь.

Отделение трипаносом от форменных элементов крови мышей I группы проводили по общипринятому методу, включающему фильтрацию и многократное центрифугирование крови при 2000-3000 об/мин в течение 15-20 мин. Выход паразитарной массы составил 50%, причем оказалось невозможным полностью отделить трипаносомы от форменных элементов крови

Отделение трипаносом из крови мышей 2 группы проводили по методу-прототипу. Метод позволяет получить концентрат трипаносом почти в плотном виде, но для этого необходимо многократное центрифугирование при 6000-8000 об/мин во флотационной жидкости. Выход паразитов составил также 50% с примесью форменных элементов крови.

Отделение трипаносом от форменных элементов крови мышей 3 группы проводили по предлагаемому нами способу следующим образом. 10 мл гепаринизированной .крови белых мышей, содержащей 1-2 105 паразитов, смешивали с равным объемом забуференного физиологичесокго раствора (ЗФР) рН 7,2. В центрифужную пробирку объемом 10 мл вносили 2 мл 1,75 М раствора сахарозы,сверху наслаивали такое же колиО

IW

СО

чество 1,46 М раствора сахарозы, На градиент осторожно наносим 4 мл разбавленной крови, пробирки помещали в центрифугу с вертикальным ротором и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин.

Трипаносомы концентрировались между слоем эритроцитов и плазмы, образуя белое кольцо. Паразитарную массу осторожно отсасывали и отмывали от раствора сахарозы ЗФР при 3000 об/мин в течение 5-10 мин. Выход паразитов составил 80- 90%, без примесей форменных элементов крови.

Проведенные испытания данного способа показали его высокую эффективность.

Были проведены сравнительные испытания известных и предложенного способов в лабораторных условиях.

Результаты исследований показали, что при использовании известных способов выход паразитарной массы составил 50-60%, полностью отделить трипаносомы от форменных элементов крови не удалось. При

использовании предлагаемого способа выход паразитарной массы составил 80-90% сравнительно чистой паразитарной массы. Результаты приведены в таблице.

Применение предлагаемого способа в

ветеринарной паразитологии позволит получить эффект выхода 90%-ной паразитарной массы для получения антигена. Формула изобретения

Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови, включающий центрифугирование крови, отличающий- с я тем, что, с целью повышения выхода паразитарной массы, кровь предварительно гепаринизируют, смешивают с равным объемом забуференного физиологического раствора рН 7,0-7,2, наслаивают на растворы сахарозы с молярностью 1,75 и 1,46, центрифугирование проводят при 1000-1200

об/мин в течение 5-10 мин, затем трипаносомы отмывают от сахарозы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5-10 мин.

Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инвазированных животных для приготовления биологических препаратов. Целью изобретения является повышение выхода паразитарной массы. Кровь гепаринизиру- ют, смешивают с забуференным физиологическим раствором, при рН 7,0-7,2, наслаивают на расл воры сахарозы молярно- стью 1,75 и 1,46. центрифугируют при 1000- 1200 об/мин 5-10 мин, отделяют трипаносомы и промывают от сахарозы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5-10 мин.

Сравнительная оценка эффективности способов