СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АДЕНОМИОЗА Российский патент 1996 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии.

В настоящее время отмечается значительное возрастание частоты аденомиоза, который занимает одно из первых мест среди гинекологических заболеваний. Аденомиоз диагностируется у 25-90% женщин, которым была произведена гистерэктомия, а также в 53,7% при исследовании аутопсийного материала. Все это свидетельствует о медицинской и социальной значимости данного заболевания.

Известен ультразвуковой способ диагностики аденомиоза (Демидов В.Н. Зыкин Б. Н. Ультразвуковая диагностика в гинекологии. -М. Медицина, 1990, с. 224). Однако способ является недостаточно точным, поскольку нет патогноминичных УЗИ критериев этого заболевания. Кроме того, имеются определенные сложности в интерпретации сканограмм, связанные с разрешающей способностью способа за счет частого появления ложных эхосигналов. Все это приводит к тому, что способ не позволяет достоверно диагностировать степень поражения аденомиозом. Информативность способа пропорциональна степени поражения заболеванием, однако при I-й степени она составляет всего около 20% что существенно затрудняет назначение больным адекватного лечения и нередко приводит к прогрессированию заболевания.

Известен также способ диагностики аденомиоза путем гистероскопического исследования (Эндоскопия в гинекологии. Под ред. Г.М.Савельевой. М. Медицина, 1983, с. 200).

Основными недостатками способа являются его инвазивность, субъективная оценка наблюдаемых картин, невозможность достоверной диагностики степени поражения заболеванием и невысокая информативность при начальной степени поражения. Все это существенно затрудняет точность диагностики аденомиоза и ограничивает возможность способа в разработке лечебной тактики.

Одним из наиболее достоверных способов диагностики аденомиоза является морфологический, информативность которого составляет от 70 до 85% [1] Основным недостатком способа является то, что он позволяет диагностировать аденомиоз только после хирургического удаления матки и ее гистологического исследования.

Таким образом, существующие клинические и инструментальные способы диагностики не позволяют достоверно и своевременно диагностировать это заболевание, особенно при 1-й степени поражения. Это затрудняет разработку рациональной лечебной тактики и нередко приводит к необоснованному хирургическому лечению. Кроме того, в последние годы возросло число больных с запущенными злокачественными заболеваниями, у которых был ошибочно диагностирован аденомиоз и не было упоминания об онкологической патологии.

Задачей изобретения является создание более точного способа диагностики аденомиоза, позволяющего выявлять его на ранней стадии.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе диагностики аденомиоза методом проточной горизонтальной хроматографии в цельной крови больной определяют уровень содержания фосфатидилинозита-3-фосфатов (ФИФ¹) и при значении этого показателя 0,06-0,10 нмоль на мг белка диагностируют аденомиоз.

Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат.

Способ обладает высокой точностью и объективностью. Он позволяет определять ФИФ¹ при малейших изменениях его концентрации. Точность способа составляет 93,5% чувствительность 0,1 мкг, ошибка 1,0 ± 0,2%
Способ является неинвазивным, благодаря чему значительно уменьшается опасность инфицирования и хирургического риска. Высокая информативность позволяет своевременно диагностировать аденомиоз даже при начальной степени поражения и разрабатывать рациональную лечебную тактику. Своевременная диагностика и адекватная терапия позволяет предупреждать программирование процесса и значительно снижают частоту хирургических вмешательства у данного контингента женщин. Кроме того, способ может быть использован как скрининговый при профосмотрах, учитывая его неинвазивность, высокую специфичность и объективность, а также для более точной постановки диагноза при клиническом обследовании.

Способ осуществляется следующим образом. Из 5 мл цельной крови экстрагируют липиды смесью хлороформ-метанол (1:1), фильтруют, осадок на фильтре 3-кратно промывают смесью хлороформ-метанол (2:1), содержащий 1% НСl (по объему). К фильтру добавляют 0,4 мл 0,012% СаСl₂, затем в течение 4-5 мин перемешивают. После четного расслоения верхнюю фазу отсасывают и экстракт отмывают от нелипидных примесей смесью хлороформ-метанол 0,012% СаСl₂ (3:48: 47). Отмытую хлороформную фазу упаривают в токе азота, предварительно внеся в нее 2-5 мкл антиоксиданта ионола, затем растворяют в 50 мкл хлороформ-метанол (2:1). Исследуемый образец наносят на хроматографическую пластинку в виде сплошной узкой полосы. Силикагель марки L 5/40 ("Chemapol", ЧСФР) наносят на пластинку путем осаждения из разбавленных водных суспензий, содержащих 5% К₂СО₃. Выделение фосфолипидов проводят методом проточной горизонтальной хроматографии в системе хлороформ-метанол 7 н. аммиак (13:7:1). При этом фронт растворителя достигает края пластинки через 60 мин, после чего хроматографию продолжают в условиях протока (15 мин). Идентификацию фосфолипидов осуществляют с помощью свидетелей фосфолипидов ("Sigma", США) и цветных тестов. Установлено, что фосфолипидные фракции на хроматограммах располагаются в порядке возрастания Rf следующим образом: сфингомиелины (Rf0,19), фосфатидилхолины (Rf 0,36), фосфоинозитиды (Rf 0,47), фосфатидилсерины (Rf 0,58), фосфатидилэтаноламины (Rf0,63). Затем участок сорбента с фракцией фосфоинозитидов обводят препаровальной иглой и собирают в пробирку с 10 мл смеси метанол-соляная кислота (1:1). Собранный силикагель встряхивают 10-12 мин с указанной смесью растворителей и отстаивают в течение 60 мин. Затем фильтруют, а гель на фильтре промывают в 5 мл смеси метанол-соляная кислота. Объединенный элюат упаривают в токе азота, предварительно внеся в него 5 мкл ионола и наносят на хроматографическую пластинку в виде точек. Силикагель марки L 5/40 ("Chemapol", ЧСФР) наносят на пластинку путем осаждения из разбавленных водных суспензий, содержащих 15% К₂СО₃. Фракционирование фосфоинозитидов проводят в системе хлороформ-метанол 7 н. аммиак (11:4,5:1) в течение 90 мин, из них 20 мин составляет проток. Идентификацию ФИФ¹, имеющую Rf 0,34, проводят с помощью сведений фирмы "Sigma" (США), после проявления хроматограммы серной кислотой и рассчитывают в нмолях фосфора ФИФ¹ на 1 мг белка. Концентрацию белка определяют биуретовым способом.

При этом при значении содержания фосфатидилинозита-3-фосфатов (ФИФ¹) 0,06-0,10 нмоль на мг белка диагностируют аденомиоз.

П р и м е р 1. Больная О. 37 лет, N истории болезни 26092, поступила в больницу им. С.П.Боткина с диагнозом "дисфункциональное маточное кровотечение". При клиническом обследовании было проведено УЗИ: заключение гиперплазия эндометрия. Также была произведена гистероскопия: заключение Железисто-кистозная гиперплазия. Подозрение на аденомиоз матки.

Больной было проведено определение содержания ФИФ¹ в цельной крови, при котором липиды из 5 мл крови экстрагировали смесью хлороформ-метанол (1:1), фильтровали, осадок на фильтре трехкратно промывали смесью хлороформ-метанол (2:1), содержащей 1% НСl (по объему). К фильтрату добавляли 0,4 мл 0,02% CaCl₂, а затем в течение 5 мин перемешивали. После четкого расслоения верхнюю фазу отсасывали и экстракт отмывали от нелипидных примесей смесью хлороформ-метанол 0,020 СаСl₂ (3:48:47). Отмытую хлороформную фазу упаривали в токе азота, предварительно внеся в нее 4 мкл ионола, затем растворяли в 50 мкл хлороформ-метанол (2:1). Исследуемый образец наносили на хроматографическую пластинку в виде сплошной полосы. Силикагель марки L 5/40 ("Chemapol", ЧСФР) наносили на пластинку путем осаждения из разбавленных водных суспензий, содержащий 5% К₂СО₃. Выделение фосфолипидов проводили методом проточной горизонтальной хроматографии в системе хлороформ-метанол 7 н. аммиак (13: 7:1). При этом фронт растворителя достигал края пластинки через 60 мин, после чего хроматография продолжалась в условиях протока (15 мин). Выделяли участок сорбента с фракцией фосфоинозитидов (Rf0,47), обводили его препаровальной иглой и собирали в пробирку с 10 мл смеси метанол НСl (1:1). Собранный силикагель встряхивали 10 мин с указанной смесью растворителей 60 мин. Затем фильтровали, а гель на фильтре промывали в 5 мл смеси метанол НСl. Объединенный элюат упаривался в токе азота, предварительно внеся в него 5 мкл ионола и наносили на хроматографическую пластинку. Силикагель марки L 5/40 наносили на пластинку путем осаждения из разбавленных водных суспензий, содержащих 15% К₂СО₃. Фракционирование фосфоинозитидов проводили в системе хлороформ-метанол 7 н. аммиак (11:4,5:1) в течение 90 мин, из них 20 мин составлял проток. При определении количественного содержания ФИФ¹ оно составило 0,08 нмоль фосфора ФИФ¹ на мг белка. Был установлен диагноз аденомиоз матки. Больная была прооперирована произведена низкая ампутация матки без придатков. Окончательный диагноз подтвержден гистологическим исследованием удаленного препарата матки (N гистологии 46951-53), при котором установлен аденомиоз матки.

П р и м е р 2. Больная К. 35 лет (история болезни N 26210). Поступила в гинекологическое отделение больницы им. С.П. Боткина с диагнозом аденомиоз матки в сочетании с миомой. При комплексном клиническом обследовании, включающем в себя применение инструментальных методов, поставлен диагноз аденомиоз матки. Одновременно произведено определение количественного содержания ФИФ¹, которое составляло 0,17 нмоль фосфора ФИФ¹ на мг белка. Больной было произведено хирургическое лечение ампутация матки без придатков. При гистологическом исследовании матки (N 47721-24) аденомиоз был не установлен. Окончательный диагноз миома матки.

Использование: медицина, гинекология. Сущность изобретения: у пациента берут пробу цельной крови, выделяют липидную фракцию, затем в липидной фракции определяют методом проточной горизонтальной хроматографии уровень фосфатидилинозита - 3-фосфатов и при значении этого показателя 0,06-0,10 н • моль на 1 мг белка диагностируют аденомиоз. Использование изобретения позволяет диагностировать аденомиоз на ранних стадиях заболевания

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АДЕНОМИОЗА, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что из цельной крови пациента выделяют липидную фракцию, в которой определяют методом проточной горизонтальной хроматографии уровень фосфатидилинозита-3-фосфатов и при значении этого показателя 0,06 - 0,10 нмоль на 1 мг белка диагностируют аденомиоз.