СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА И ОПУХОЛЕЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/68 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для дифференцирования рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы.

Исследования последних лет позволяют говорить о рассеянном склерозе как об иммунопатологическом и нейроиммунологическом заболевании (Гусев Е. И., Демина Т. Л. , Бойко А. Н. Рассеянный склероз. М., 1997, с. 129, 174.), с вовлечением в процесс пирамидного пути, нарушением координации, черепных нервов, чувствительности, функций тазовых органов, зрительного нерва, изменением интеллекта (шкала FS, John Kurtzke) с характерным ремиттирующим течением, прогрессирующим типом течения. Однако у 10% больных рассеянным склерозом встречаются редкие клинические проявления болезни и варианты течения рассеянного склероза. Это относится к рассеянному склерозу с симптоматикой по типу опухоли головного мозга, к спинальным формам заболевания. В этих случаях возникают значительные трудности при проведении дифференциальной диагностики. Неправильно или несвоевременно поставленный диагноз может привести к летальному исходу или значительному ухудшению состояния больного.

Известен способ диагностики рассеянного склероза путем исследования активности протеиназ в ликворе и крови калориметрическим методом ("Leucocyte Proteinase Activity and Acute Multipl Sclerosis Nevrol Sel" 1975, 26, N 1, p. 107-111. ). Но у 10-15% больных с опухолями центральной нервной системы активность ферментов изменялась как при рассеянном склерозе.

Известен способ дифференциальной диагностики рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы путем определения в ликворе малонового диальдегида (А. С. N 786990, Хохлов А. П., Роговина Н. И.). Последний наиболее близок к изобретению. Дифференциальная диагностика указанным способом осуществляется на основании того, что при отсутствии малонового диальдегида в ликворе ставится диагноз рассеянного склероза, а при его наличии - опухолевого процесса.

Недостатком способа является недостаточная точность, а также тот факт, что определяется один из конечных продуктов перекисного окисления липидов - малоновый диальдегид, количество которого в ликворе незначительно. Необходимо отметить, что у 17% больных рассеянным склерозом в ликворе выявляется малоновый диальдегид, что должно было бы указывать на наличие опухолевого процесса, а у 12% больных с опухолями центральной нервной системы малонового диальдегида в ликворе не обнаруживается, что должно было бы свидетельствовать в пользу постановки диагноза "рассеянный склероз".

Авторами предложен следующий способ дифференциальной диагностики рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе дифференциальной диагностики рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы путем исследования лимфоцитов крови отличительной особенностью является то, что методом проточной горизонтальной хроматографии определяют уровень содержания фосфатидилинозитов и при их значениях от 40 до 42 нМоль фосфора фосфатидилинозитов на 1 мг белка судят о норме, при их значении от 46,8 до 48,8 диагностируют рассеянный склероз, а от 34,9 и ниже - опухоль центральной нервной системы.

Способ осуществляется следующим образом. У больного берут 10 мл крови из вены и выделяют лимфоциты на градиенте плотности фиколла-верографина. Полученные взвеси лимфоцитов отмывают четырехкратно в 150 мМ растворе хлорида натрия и помещают в пробирки, содержащие 3,75 мл смеси хлороформ-метанола (1: 2 по объему). Полученные липидные экстракты фильтруют, трижды промывая осадок на фильтре смесью хлороформ-метанол 2:1 с добавлением 0,5% соляной кислоты по объему. Фильтрат отмывают 0,02%-ным раствором хлорида кальция, а затем трижды смесью хлороформ: метанол:0,02% кальция хлорида (3:48:47), затем упаривают и растворяют в 10 мкл смеси хлороформ: метанол 2:1, после чего исследуемый образец наносят на старт хроматографической пластинки, на которой предварительно осажден силикагель из разбавленных водных суспензий, содержащих 5% K₂CO₃, присутствие которого обеспечивает выделение фракции фосфатидилинозитов в системе хлороформ:метанол:7н аммиак (13:7:1). Идентификацию фосфатидилинозитов проводят по Rf= 0,47, количественное содержание фосфатидилинозитов определяют по фосфору после проявления хроматограммы серной кислотой и рассчитывают в нМолях фосфора фосфатидилинозита на 1 мг белка. Содержание белка определяют биуретовым методом.

Данные по исследованию содержания фосфатидилинозитов в лимфоцитах у доноров, больных рассеянным склерозом, доброкачественными и злокачественными опухолями центральной нервной системы представлены в таблице.

Приведенные в таблице 1 данные свидетельствуют о том, что содержание фосфатидилинозитов в лимфоцитах у больных рассеянным склерозом и с опухолями центральной нервной системы достоверно отличаются от их уровня у доноров. Одновременно отмечено, что уровень содержания фосфатидилинозитов у больных рассеянным склерозом значительно выше их количества у больных как с доброкачественными, так и злокачественными новообразованиями центральной нервной системы. Изучение содержания фосфатидилинозитов в лимфоцитах у 105 больных позволило правильно поставить диагноз у 98 человек, что составило 93,3%. И лишь у 7 (6,7%) из 105 больных не удалось правильно провести дифференциальную диагностику между этими заболеваниями. Точность способа составила 93,3%.

Пример 1. Больная Т., 28 лет, поступила в нервное отделение Областной клинической больницы г. Твери с подозрением на рассеянный склероз. У больной наблюдалось сочетание очаговой и общемозговой симптоматики. При исследовании лимфоцитов крови содержание фосфатидилинозитов составило 48,2, что характерно для рассеянного склероза. Диагноз рассеянного склероза был подтвержден в процессе динамического наблюдения и дополнительными методами обследования (магнитно-резонансная томография).

Пример 2. Больной М., 42 лет, поступил в нервное отделение Отдельной медико-санитарной части N 1 г. Твери 20.01.97 г. с подозрением на рассеянный склероз. В неврологическом статусе отмечалось преобладание очаговой симптоматики над общемозговой. Периоды некоторого улучшения сменялись нарастанием неврологического дефицита. При исследовании лимфоцитов крови уровень фосфатидилинозитов составил 32,4, на основании чего был выставлен диагноз - доброкачественная опухоль мозга, что в дальнейшем подтверждено исследованием с помощью магнитно-резонансной томографии и гистологическим исследованием препарата после нейрохирургической операции.

Пример 3. Больной Н. , 36 лет, поступил в нервное отделение Областной клинической больницы г. Твери 16.12.96 г. с подозрением на рассеянный склероз. В неврологическом статусе отмечалось преобладание очаговой симптоматики над общемозговой. Периоды некоторого улучшения сменялись нарастанием неврологического дефицита. При исследовании лимфоцитов крови уровень фосфатидилинозитов составил 19.4, на основании чего был выставлен диагноз - злокачественная опухоль мозга, что в дальнейшем подтверждено исследованием с помощью магнитно-резонансной томографии и гистологическим исследованием препарата после нейрохирургической операции.

Использование изобретения позволяет получить следующие результаты. Способ обладает высокой точностью и объективностью. Он позволяет определять фосфатидилинозиты при малейших изменениях их концентрации. Точность способа 93,3%, чувствительность 0,1 мкг. Способ является неинвазивным, благодаря чему значительно уменьшается опасность хирургического и анестезиологического риска, инфицированности, травматичности.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для дифференцирования рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы, особенно в случаях атипичного течения рассеянного склероза и на начальных этапах проявления патологического процесса. Способ обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики. В лимфоцитах крови методом проточной горизонтальной хроматографии определяют уровень содержания фосфатидилинозитов. Если этот уровень превышает их количество у здоровых людей, то диагностируют рассеянный склероз, а при снижении количества фосфатидилинозитов относительно их уровня у здоровых людей - опухоль центральной нервной системы. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики рассеянного склероза и опухолей центральной нервной системы, включающий исследование лимфоцитов крови больного, отличающийся тем, что с помощью метода проточной горизонтальной хроматографии определяется уровень фосфатидилинозитов и при их значениях 40 - 42 нмоль фосфора фосфатидилинозитов на 1 мг белка судят о норме, при значениях 46,8 - 48,8 диагностируется рассеянный склероз, а от 34,9 и ниже - опухоль центральной нервной системы.