ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS AMYLOVORUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИКА ЛАКТОАМИЛОВОРИНА Российский патент 1996 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/225 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и производству пробиотиков в частности.

В литературе сообщалось о выделении нового вида крахмалгидролизующих лактобацилл Lactobacillus amylovorus, однако никаких сведений о возможности его использования в промышленности не представлено.

Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего широким спектром антагонистической активности против условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, вызывающих заболевания у сельскохозяйственных животных и человека, и устойчивого к экстремальным условиям среды пищеварительного тракта и антибиотикам.

Новый штамм Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 выделен с использованием традиционных микробиологических приемов из химуса слепой кишки здорового поросенка. Штамм депонирован во ВКПМ под N B-6253 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки штамма представлены средней длины с закругленными концами палочками, располагающимися в мазках единично, попарно и в коротких цепочках. Неподвижны, спор не образуют. По Граму окрашиваются положительно.

Колонии на МПА с глюкозой и триптозном агаре (39^оС, 72 ч) мелкие, округлые, выпуклые, гладкие, прозрачные.

На плотной среде с бактофоком и молочной сывороткой образуются округлые, выпуклые, белые, непрозрачные колонии диаметром 0,5-1 мм.

В жидкой модифицированной среде Рогозы с капустным отваром образуются взвешенные в бульоне и фиксированные на стенках пробирки, но легко отпадающие хлопья и серо-белый осадок, легко взмучивающийся при встряхивании.

На глюкозном МПБ легкое помутнение, мелкие хлопья, фиксированные на стенке пробирки, серо-белый осадок.

Физиолого-биохимические признаки.

Факультативный анаэроб.

Оптимум температуры 37-39^оС. Растет при 45^оС, но не при 15^оС. Остается жизнеспособным после полуторачасового прогревания при 60^оС и 65^оС.

Хорошо растет в интервале рН 5-7.

Газа из глюкозы не образует.

Каталазоотрицателен.

Нитраты не редуцирует.

Молоко свертывает.

Метиленовую синь (0,01 и 0,1%) восстанавливает.

Растет в средах с 2, 4 и 6% хлористого натрия; 20 и 40% желчи; 2, 4 и 6% этанола; 0,2 и 0,4% фенола.

Обладает амилолитической активностью.

Кислоту продуцирует из глюкозы, целлобиозы, галактозы, лактозы, мальтозы, маннозы, салицина, трегалозы, эскулина, туранозы и крахмала. Арабиноза, глюконат, маннит, мелецитоза, мелибиоза, раффиноза, рамноза, рибоза, сорбит, сахароза, ксилоза, инулин, сорбоза, нутроза и пектин не ферментируются.

Конечными продуктами сбраживания глюкозы являются молочная и уксусная кислоты, а также этанол.

Штамм продуцирует антибиотические вещества широкого спектра действия, ингибирующие бактерии родов Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus, Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Salmonella и некоторых видов Lactobacillus.

Штамм проявляет устойчивость к хлорамфениколу, тетрациклину, стрептомицину, канамицину, рифампицину и полимиксину.

Штамм непатогенен, токсичных и токсигенных свойств не проявляет.

П р и м е р. Для приготовления пробиотика готовят молочную среду. С этой целью к водопроводной воде добавляют 10% сухого обезжиренного молока и после его растворения среду разливают в бутыли из термостойкого стекла или закачивают в ферментер и стерилизуют при 1 атм (120 ± 1^оС) в течение 30 мин. Готовую среду охлаждают до 35-38^оС и инокулируют суточной культурой штамма L. amylovorus БТ-24/88 в молочной среде из расчета 5-10% к объему среды. Посевы инкубируют при 38 ± 1^оС в течение 24 ч и полученный продукт используют для приготовления жидкого, пастообразного или сухого препарата лактоамиловорина.

Жидкий препарат, напоминающий по внешнему виду, цвету, консистенции, запаху и вкусу ряженку, выпускают в герметически укупоренных стеклянных флаконах по 200-500 мл.

Пасту лактоамиловорина готовят путем сепарирования жидкого препарата при 3000 x g в течение 15 мин и фасуют по 1 кг в полиэтиленовые пакеты, запаивают и упаковывают в бумажные крафтмешки.

Сухой препарат получают путем лиофилизации молочной культуры или пасты совместно с защитной средой, стабилизаторами и наполнителями.

При скармливании поросятам штамм L. amylovorus БТ-24/88 колонизирует слизистую оболочку кишечника, ингибирует гемолитические бактерии и стимулирует микроорганизмы, гидролизующие сложные полисахариды, повышает ферментативную активность в тонком кишечнике, неспецифическую резистентность животных, их сохранность, прирост живой массы и качество мяса. Штамм оказывает профилактическое и лечебное действие при диарейных заболеваниях.

Использование: микробиологическая промышленность, производство пробиотиков. Сущность изобретения: из слепой кишки здорового поросенка выделен новый штамм Lactobacillus amylovorus БТ - 24/88, обладающий широким спектром антагонистической активности против условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, устойчивый к экстремальным условиям среды пищеварительного тракта и антибиотикам. Штамм непатогенен, токсичных и токсигенных свойств не проявляет. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под N В-6253. Штамм используют для приготовления нового пробиотика лактоамиловорина в жидкой, пастообразной и сухой форме. При скармливании поросятам штамм ингибирует в пищеварительном тракте гемолитические бактерии и стимулирует микроорганизмы, гидролизующие сложные полисахариды, повышает ферментативную активность в тонком кишечнике, неспецифическую резистентность животных, увеличивает сохранность и прирост живой массы поросят, улучшает качество мяса. Штамм оказывает профилактическое и лечебное действие при диарейных заболеваниях.

Штамм бактерий Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 ВКПМ N В-6253, используемый для производства пробиотика лактоамиловорина.