СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОЯЩУРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1996 года по МПК A61K31/00 A61K31/13 

Наиболее ощутимые результаты были получены при изучении лечебно-профилактического действия при ящурной инфекции антибиотика 514/8, продуцированного штаммом (авт. свил. СССР N 1284233, кл. А61К 31/71, заявл. 29.05.84 г.). Этот препарат как наиболее близкий заявляемому по достигаемому результату был взят заявителем в качестве прототипа.

Основной недостаток прототипа состоит в том, что при высокой противовирусной активности в опытах in vitro, он недостаточно активен in vivo.

Сущность изобретения.

В задачу создания настоящего изобретения входил поиск химического препарата, проявляющего более высокую по сравнению с прототипом противоящурную активность.

Поставленная задача решена тем, что в качестве средства, обладающего противоящурной активностью, используют 1-хлорметилгерматран формулы

Предлагаемый препарат впервые синтезирован в Государственном научно-исследовательском институте химии и технологии элементоорганических соединений. Технология его получения приведена в примере 1 настоящего описания.

По сравнению с прототипом предлагаемое средство отличается более высокой противоящурной активностью. Указанное отличие является существенным, т.к. оно является достаточным во всех случаях для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.

Признак, отличающий предлагаемое средство от прототипа, не выявлен в других известных решениях при изучении данной и смежной областей знаний.

Благодаря использованию свойства, проявляемого предлагаемым средством, достигается технический результат, указанный в задаче создания изобретения, что подтверждено результатами многочисленных исследований, сведения о которых представлены ниже.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

Пример 1. 1-Хлорметилгерматран получают следующим образом. К раствору 38,2 г ClCH₂Ge(OC₃H₇-U₃₀)₂ в 50 мл бензола при перемешивании добавляют 19,0 г триэтаноламина, наблюдают слабый разогрев. Через 0,5 часа выпадают кристаллы, их отфильтровывают, промывают холодным хлороформом, пентодом и высушивают, получают описываемое соединение формулы

Выход 29,6 г. Вещество представляет собой бесцветный порошок или кристаллы с температурой плавления 218^oС, растворимое в хлороформе и воде (1-5%) ПМР (10% в хлф-d₃; (σ,мд): 2,90 (6Н,Т), 3,84 (6Нт), 2,64 (2Hм).

Найдено, С 31,50; Н 5,47, Gе 27,76.

₇H₁₄NO₃ClGe.

Вычислено, С 31,34; Н 5,22; Gе 27,06.

Структура 1-хлорметилгерматрана подтверждена элементным и рентгеноструктурным анализами, а также ПМР спектром.

Вещество (1) фасуют в стерильную стеклянную посуду, плотно закупоривают и хранят до применения. Перед применением навеску вещества (1) растворяют в апирогенной стерильной дистиллированной воде до концентрации ≅5%
Пример 2. Определение оптимальной дозы препарата для защиты взрослых белых мышей от ящура.

Оптимальную дозу препарата, в наивысшей степени защищающую взрослых белых мышей от ящура, определяют опытным путем. Для этого взрослым белым мышам массой 18-20 г вводят подкожно в область спины 2-кратные разведения описываемого соединения в объеме 1 мл. Через 24 часа животных заражают вирусом ящура типа 0-194 в дозе 50 ЛД₅₀. В качестве контроля используют группу животных, не обработанных предлагаемым средством. Подсчет результатов проводят через 96 часов после экспериментального заражения.

Данные исследований по установлению оптимальной дозы предлагаемого препарата для защиты взрослых белых мышей от ящура приведены в таблице 1.

Результаты исследований, приведенные в таблице 1, свидетельствуют, что оптимальная доза 1-хлорметилгерматрана для взрослых белых мышей находится в пределах 0,75-1,5 мг.

Результаты исследований противоящурной активности 1- хлорметилгерматрана в оптимальной дозе для взрослых белых мышей в сравнении с прототипом представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, описываемое соединение по сравнению с антибиотиком 514/8 (прототипа обладает более выраженной противоящурной активностью При использовании предлагаемого препарата достигается защита 80% мышей, антибиотика 514/8 25% при 10% выживаемости мышей в контрольной группе.

Пример 3. Определение оптимальной дозы препарата для защиты мышат-сосунов от ящура.

Оптимальную дозу препарата для защиты мышат-сосунов от ящура определяют опытным путем. Для этого мышатам-сосунам 3-4- дневного возраста вводят подкожно в область спины 2-кратные разведения предлагаемого соединения в объеме 0,1 мл. Через 1-2 часа животных заражают вирусом ящура типа А-22 N 550 в дозе 300 ЛД₅₀. Через 4 суток производят подсчет результатов. Результаты исследований по установлению оптимальной дозы описываемого соединения для защиты мышат-сосунов от ящура приведены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, оптимальная доза препарата для мышат-сосунов находится в пределах 0,125-0,250 мг.

Результаты исследований противоящурной активности 1-хлорметилгерматрана в оптимальной дозе на мышатах-сосунах в сравнении с прототипом приведены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, описываемое соединение обладает более выраженной противоящурной активностью по сравнению с препаратом-прототипом.

Пример 4. Определение оптимальной дозы препарата для защиты взрослых свиней от ящура.

Оптимальную дозу описываемого соединения, в наивысшей степени защищающую взрослых свиней от ящура, определяют опытным путем. Для этого свиньям массой 30-40 кг вводят внутримышечно в область шеи двукратные разведения 1-хлорметилгерматрана в объеме 5 мл. Через 24 часа животных заражают вирусом ящура типа А-22 N 550 в дозе 100 ИД₅₀. В качестве контроля используют группу животных, не обработанных предлагаемым препаратом. Подсчет результатов проводят через 96 часов после экспериментального заражения. Данные исследований по установлению оптимальной дозы предлагаемого препарата для защиты свиней от ящура приведены в таблице 5.

Результаты исследований, приведенные в таблице 5, показывают, что оптимальная доза 1-хлорметилгерматрана для свиней находится в пределах 1000-1500 мг.

Результаты исследований противоящурной активности 1-хлорметилгерматрана в оптимальной дозе для свиней в сравнении с прототипом представлены в таблице 6.

Как видно из таблицы 6, предлагаемое средство 1-хлорметилгерматран по сравнению с антибиотиком-прототипом обладает выраженной противояшурной активностью. При использовании предлагаемого препарата достигается защита 50% свиней, а эффект защиты антибиотика не наблюдался.

Пример 5. Определение токсичности предлагаемого препарата для мышат-сосунов и взрослых белых мышей. Токсичность 1-хлорметилгерматрана изучали на мышатах-сосунах 4-6-дневного возраста и на взрослых белых мышах обоего пола массой 18-23 г. Препарат вводили в виде 1-10% водного раствора подкожно. Препарат в каждой дозе испытывали не менее чем на 4 животных. Объем вводимого раствора составлял: для мышат-сосунов 0,2 мл, взрослых белых мышей 1 мл.

Значение средней смертельной дозы (ЛД₅₀) определяли по методу Литчфильда-Уилконсона при р=0,05.

Установлено, что 1-хлорметилгерматран малотоксичен: даже в дозах 2500 мг/кг для мышат-сосунов и 3125 мг/кг для взрослых белых мышей он не вызывал гибели животных: ЛД₅₀ для мышат-сосунов составляла 4300 мг/кг, для взрослых белых мышей 6250 мг/кг.

Испытуемые дозы препарата в пределах 60-80 мг/кг для подсвинков были не токсичными. Все животные в период опыта и после него оставались клинически здоровыми.

Таким образом установлено, что 1-хлорметилгерматран проявляет более высокую противоящурную активность по сравнению с прототипом. При использовании предлагаемого средства в оптимальной дозе достигается защита от ящура, в 3-4 раза превышающая эффект от использования антибиотика 514/8.

Кроме того, предлагаемое средство более стандартно, чем антибиотик, так как получено химическим методом и может быть охарактеризовано определенными физико-химическими параметрами.

1-Хлорметилгерматран является низкотоксичным веществом, не вызывающим осложнений на месте введения.

Предлагаемое средство найдет применение в сельскохозяйственном производстве для профилактики ящура у животных. ТТТ1 ТТТ2 ТТТ3 ТТТ4 ТТТ5 ТТТ6

Использование: в ветеринарии. 1-Хлорметилгерматран, обладаю- щий противоящурной активностью. Продукт: 1 - хлорметлгерматран. БФ СlCH₂Gе(OСН₂2СН₂)₃N, выход 29,6 проц., т. пл. 218 град.С. ЛД₅₀ 130 мг/кг. Реагент 1: C1CH₂Ge(OC₃3H₇-U₃₀)₃ в 50 мл бензола, peaгент 2: триэтаноламин в соотношении 2: 1. Условия реакции: выдерживания указанной смеси при 15-20 град. С в течение 30 минут до выпадения кристаллов с последующим их отфильтровыванием, промыванием и высушиванием. Оптимальная доза препарата для защиты от ящура: мышей-сосунов - 0,125-0,250 мг, взрослых белых мышей - 0,75-1,5 мг, свиней - 1000-1500 мг. 6 табл.

1-Хлорметилгерматран формулы

обладающий противоящурной активностью.