СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭНДОТОКСИКОЗА Российский патент 1996 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, реаниматологии, токсикологии, клинической биохимии, хирургии, комбустиологии и может быть использовано в клинике для количественной оценки эндотоксикоза.

Известные в настоящее время способы определения степени интоксикации у больных основываются преимущественно на данных клинической картины и традиционного клинико-лабораторного обследования, например определение лейкоцитоза, формулы крови, подсчета лейкоцитарного индекса интоксикации, учета изменений в общепринятых клинико-биохимических исследованиях. Реже используются способы определения токсичности биологических сред с помощью биопроб, например, на мышах с блокированной ретикуло-эндотелиальной системой, на простейших парамецийный тест, тетрахименовый и др. (Оболенский С. В. Малахова М. Я. Лабораторная диагностика интоксикации в практике интенсивной терапии. С-Пб, 1993).

Однако известные способы не полностью удовлетворяют клиницистов, так как позволяют регистрировать лишь выраженную стадию эндотоксикоза. Это отодвигает во времени начало терапии, что в свою очередь ухудшает прогноз заболевания.

Существует способ определения степени интоксикации по содержанию в плазме крови больного молекул средней массы (МСМ). По современным представлениям МСМ ответственны за развитие синдрома интоксикации у больных самого разнообразного профиля. Этот скрининг-метод был принят за прототип. Метод нашел распространение в клинической практике и описан в ряде работ (Габриэлян Н. И. Дмитриев А. А. Кулаков Г. Н. и др. Клин. мед. 1981. N 10. с. 38 42; Габриэлян Н. И. Левицкий Э. Р. Щербакова О. А. и др. Тер. архив. 1983. N 6, с. 76 78.

К недостаткам скрининг-метода, описанного в указанных выше работах, можно отнести ограниченность получаемой информации, так как для исследования используется лишь одна составная часть крови плазма. Кроме того, концентрация МСМ определяется только по одной (254) или двум длинам волн (254 и 282 нм), что резко сокращает объем информации об интоксикации и сводит анализ к определению только нескольких веществ, регистрируемых на этих длинах волн.

Целью изобретения является повышение точности и надежности способа оценки эндотоксикоза путем определения концентрации возможно большего количества молекул низкой и средней молекулярной массы (МНиСММ), достигаемое тем, что регистрация производится в зоне длин волн ультрафиолета от 238 до 310 нм одновременно в двух составляющих крови плазме и взвеси эритроцитов.

Окончательный результат представляет собой сумму показателей концентрации МНиСММ полученных отдельно в плазме крови и эритроцитах и выраженных в условных единицах площади под кривой, образуемой значениями полученных экстинкций и построенной в осях координат интенсивности поглощения и значений длин волн.

Сущность заявляемого способа состоит в следующем. Производят забор крови путем пункции кровеносного сосуда в пробирку, содержащую стабилизатор (гепарин). Центрифугируя цельную кровь, получают плазму и осадок, содержащий форменные элементы. Отбирают пипеткой 1,0 мл плазмы и 0,5 мл эритроцитов со дна пробирки и помещают в центрифужные пробирки. В пробирку с эритроцитами добавляют 0,5 мл физиологического раствора и размешивают. Таким образом получают две среды для исследования плазму и эритроцитарную взвесь. Далее производят осаждение крупномолекулярных белков раствором кислоты, центрифугируют для осаждения крупномолекулярных белков и получения прозрачного супернатанта, содержащего низко- и среднемолекулярные вещества. Концентрацию низко- и среднемолекулярных веществ плазмы или эритроцитарной взвеси измеряют на спектрофотометре или любом другом приборе, имеющим диапазон ультрафиолетового излучения от 238 до 310 нм.

Измерение супернатанта по определенному спектру длин волн позволило одномоментно регистрировать более 200 наименований веществ различного происхождения (мочевину, креатинин, глюкозу, аминокислоты, холестерин, фосфолипиды, билирубин и т.д. в том числе и производные этих соединений), а также вещества, вызывающие эндотоксикоз как в плазме, так и эритроцитах. Далее проводится сопоставление полученных результатов с показателями, полученными у здоровых людей.

В основу заявляемого способа положены закономерности, выражаемые как
И = {(П_x+Э_x)} - {(П_n+Э_n)+Δ},
где И интоксикация;
П концентрация в плазме;
Э концентрация в эритроцитах, Δ допустимое отклонение от нормального состояния (m ±0,5);
x у исследуемого;
n усредненная норма.

Положительный эффект был получен при обследовании больных с эндотоксикозом в различных клиниках: у больных реанимационных отделений, беременных с гестозами, ожоговых больных, при перитонитах, сепсисе, панкреатитах и т.п. с тесной корреляционной зависимостью между детальностью и выраженностью эндотоксикоза, определенным данным способом (г 0,92).

Пример. Больной Т. 57 лет, поступил в диагностическое отделение института туберкулеза с неясным диагнозом, с жалобами на кашель с большим количеством мокроты, слабость, периодически появляющуюся температуру. Объективно: больной пониженного питания, кожные покровы бледные, в легких дыхание жесткое, справа отмечаются влажные хрипы по всей поверхности легкого, скорость оседания эритроцитов 47 мм в час. Степень эндогенной интоксикации была оценена методом, выбранным за прототип (по Н. И. Габриэлян и соавт.). Результат составил 0,21 (при норме 0,23) и предлагаемым способом. Предлагаемым способом было найдено, что в плазме показатель интоксикации равен 28,1 у.е. пл. (при норме 23,2±0,2), эритроцитах 50,0 у.е. пл. (в норме 45,5±1,2). Рассчитаем наличие интоксикации у данного пациента:
ИИ (28,1 + 50,0) (23,1 + 45,0) 83,1 68,1 15,0 у.е. пл. что
соответствует 2 стадии развития эндогенной интоксикации и соответствует клинической картине. Методом, взятым за прототип, не подтвердили наличие эндотоксикоза вообще.

Использование: медицина, терапия, реаниматология, токсикология, для количественной оценки эндотоксикоза. Сущность изобретения: определяют концентрацию молекул низкой и средней молекулярной массы в плазме крови и в эритроцитарной взвеси, при этом регистрируют оптическую плотность образцов при 238 - 310 нм с последующим расчетом интоксикации по предлагаемой формуле.

Способ оценки эндотоксикоза, включающий забор пробы крови больного, отделение плазмы от форменных элементов, осаждение высокомолекулярных веществ кислотой, отделение супернатанта и определение оптической плотности супернатанта в зоне ультрафиолета, отличающийся тем, что к форменным элементам добавляют изотонический раствор натрия хлорида в объеме, равном объему удаленной плазмы, осуществляют перемешивание и осаждение кислотой аналогично плазме, затем определяют оптическую плотность супернатанта, полученного из плазмы и форменных элементов в диапазоне 238-310 нм с графической регистрацией кривой в координатах интенсивности поглощения и значений длин волн, содержание веществ средне- и низкомолекулярной массы определяют в условных единицах площади под кривой, после чего производят расчет оценочного показателя интоксикации по формуле
И (П_i + Э_i) (П_н + Э_н) + d,
где
И интоксикация;
П концентрация средне- и низкомолекулярных веществ в плазме;
Э концентрация тех же веществ в эритроцитах;
d допустимое отклонение от нормального состояния (0 ±0,5);
i N испытуемого;
н усредненный вариант нормы.