СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СЕПТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимической верификации септического состояния, и может быть использовано для быстрой и точной диагностики септических состояний в клинической практике.

Существует несколько способов диагностики септических состояний. Первый, наиболее широко используемый способ заключается в посеве различных сред организма (крови, мочи, серозных выпотов и других жидкостей) на плотные питательные среды с последующей верификацией возбудителей. Второй способ заключается в посеве материала на жидкие среды с последующей регистрацией в них продуктов жизнедеятельности микробной флоры. Третий способ - проведение скринингового теста с использованием сложных и дорогостоящих диагностикумов.

Недостаток известных способов состоит в большом 30 - 35% ложноотрицательных результатов, подборе специальных питательных сред для выращивания бактерии, длительности проведения анализов (от нескольких часов до 3 - 5 суток) и дороговизны исследований.

Недостаточная надежность, дороговизна и длительность проведения анализа микробиологических методов диагностики септических состояний заставляют исследователей искать другие способы регистрации в крови и других биологических жидкостях бактерий или продуктов их жизнедеятельности.

При классическом микробиологическом способе обнаружения сепсиса у больного берут анализируемую жидкость, например кровь, и сразу у постели больного производят посев на питательную среду в чашку Петри. Чашку Петри помещают в термостат при 37^oC и ждут появления роста бактериальной флоры, которая появляется спустя значительное время - через 3 - 5 дней. При некоторых видах возбудителей посев на обычные питательные среды неэффективен, требуется добавление эритроцитов барана или других пищевых добавок. Эти манипуляции увеличивают время исследования, а работа с бактериальными культурами требует специального режима. Подтверждение этим методом обеспечивается в 60 - 75% случаев сепсиса.

Целью изобретения является разработка быстрого и надежного биохимического способа диагностики септических состояний независимо от вида возбудителя, без использования сред для посева культуры и контакта с возбудителем инфекции.

С этой целью авторы применили биохимический скрининговый тест, не имеющий аналогов.

Указанная цель достигается тем, что после осаждения крупномолекулярных белков биологических жидкостей проводят спектрофотометрирование супернатанта в зоне ультрафиолета и в случае выявления эффекта "зазубренности" на спектрограмме судят о наличии септического состояния.

Сопоставительный анализ с другими способами при отсутствии аналога показывает, что заявляемый способ имеет существенные различия, выраженные в следующих критериях:
1. быстрота определения - анализ занимает 30 - 35 мин с момента взятия пробы;
2. дешевизна способа - для анализа требуются распространенные в клинико-диагностических лабораториях реактивы. Определение ведется непосредственно из исследуемых биологических сред организма без этапа обогатительных сред и инкубации;
3. высокая чувствительность способа - незначительные воспалительные процессы, такие как зубные гранулемы, геммороидальные воспаления и др. могут быть выявлены путем исследования эритроцитарной взвеси. Известно, что любая микрофлора или продукты ее жизнедеятельности фиксируются вначале на эритроцитарную поверхность (на гликокаликсе) и этот эффект можно наблюдать предлагаемым способом, что и свидетельствует о высокой чувствительности метода;
4. надежность способа - обеспечивается подтверждением предъявленного способа регистрации септического состояния классическими способами (высевание микрофлоры).

Таким образом, заявляемый способ диагностики септического состояния отличается от известных тем, что он позволяет оптимизировать качество диагностики сепсиса, сделать эту процедуру доступной для клинико-диагностических лабораторий и быстрее поставить диагноз.

Тест исследован в лабораторных условиях при воспроизведении сепсиса in vitro при добавлении живых культур в кровь или другие биологические жидкости с последующей инкубацией при 37^oC и исследованием предлагаемым способом с положительными результатами.

Способ испытан при верификации сепсиса у больных in vivo с параллельным исследованием классическим микробиологическим способом.

Пример 1. В больницу им. С.Перовской поступила М-ва, 78 лет с ожогом кипятком 2 - 3-ей степени в нижней трети голени. Через 2 дня на месте ожога, который был на месте привычного рожистого воспаления, развилась инфекция, состояние больной ухудшилось, через 1 день поднялась температура. Взята кровь на посев и для предлагаемого способа регистрации септического состояния. Как в плазме крови, так и эритроцитах был зарегистрирован эффект зазубренности, что свидетельствовало о развитии септического состояния. Через 1 день после подъема температуры у больной стали отмечаться клинические признаки сепсиса. Только на 6-й день поступил положительный ответ из микробиологической лаборатории. Лечение больной начато сразу после установления диагноза предлагаемым способом и было успешным. При дальнейших исследованиях крови эффект зазубренности постепенно исчез и при полном выздоровлении не наблюдался.

Пример 2. Произведено сопоставление результатов анализов по бацилловыделению у больных туберкулезом, которые затем были прооперированы, и у некоторых очаг туберкулеза был удален полностью. Перед операцией больным предлагаемым методом исследована кровь и у всех тех больных, у которых отмечалось бацилловыделение, отмечался эффект зазубренности. У двух больных, не имевших бацилловыделения, этот эффект не наблюдался.

В одном случае отрицательных эффект был при наличии положительного заключения о бацилловыделении. Как обнаружилось при гистологическом исследовании, произведенном после оперативного вмешательства, у данного больного была хроническая локальная пневмония, а не туберкулез, не было специфической морфологической картины туберкулеза, следовательно, предлагаемым способом мы не могли обнаружить бацилловыделение, так как не было туберкулеза.

Пример 3. Проведены исследования in vitro с добавлением бактериальных культур в кровь человека и последующей инкубацией при 37^oC. Эффект регистрировался более стабильно при использовании крови от больных людей или хранении в течение нескольких дней крови здорового человека в холодильнике (ослабление антимикробных свойств крови).

Разработан способ диагностики септических состояний путем исследования супернатанта, который получается из биологических жидкостей путем осаждения крупномолекулярных белков. Цель изобретения - повышение чувствительности и надежности способа и ускорение диагностики. Супернатант исследуют в слабокислой среде в зоне ультрафиолета в диапазоне длин волн 238-300 нм и в случае выявления эффекта зазубренности на спектрограмме судят о наличии септического состояния.

Способ диагностики септических состояний путем исследований биологических жидкостей, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и надежности способа и ускорения диагностики септических состояний, из биологических жидкостей получают супернатант, не содержащий крупномолекулярных белков, после чего спектрофотометрируют его в слабокислой среде в зоне длин волн 238 - 300 нм и в случае выявления эффекта зазубренности на спектрограмме, шумов судят о наличии септического состояния.