СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 1996 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к области медицины, а именно иммунологии.

Известен способ моделирования вторичного иммунодефицита путем внешнего острого или хронического облучения животных в дозе 0,5-8,0 Гр с последующим определением динамики иммунного статуса (В.М.Шубик "Иммунологические исследования в радиационной гигиене", М: Энергоатомиздат, 1987, с.30-56). Этот способ предусматривает моделирование развития пострадиационного иммунодефицита у практически здоровых людей.

Однако в ряде случаев воздействие фактора ионизирующей радиации наслаивается на условия уже существующей патологии (например у жителей зон, подвергшихся воздействию факторов Чернобыльской аварии). Такой патологией чаще всего является хронический воспалительный процесс, уже сам по себе меняющий функциональное состояние иммунной системы. Поэтому в отношении указанных контингентов способ прототипа не обладает достаточной адекватностью и полнотой воспроизведения ситуации.

Сущность изобретения состоит в том, что группе животных, например, крыс, вначале вводят в подушечки задних лап адъювант по 0,1 мл в каждую, после чего, начиная с 35-37 дня производят внешнее фракционированное гамма-облучение по 2 Гр через день в суммарной дозе 6 Гр На 4, 9, и 23 дни после начала облучения контролируют состояние иммунного статуса.

Способ осуществляют следующим образом. Вначале животным вводят в подушечки задних лап по 0,1 мл адъюванта, а спустя 35-37 дней проводят внешнее фракционированное гамма -облучение (по 2 Гр 3 раза через день), после чего наблюдают животных в течение 23 дней. Указанным животным производят исследования показателей иммунного статуса: на 4 и 9 дни после начала облучения показатели фагоцитоза (А.И.Иванов, Б.А.Чухловин "К методике определения поглотительной и переваривающей способности нейтрофилов" //Лаб. дело, 1967, No 10,0.610-613) и лейкоцитемии, на 23-ый день уровни антителообразующих клеток ("Иммунологические методы" под редакцией Г.Фримеля, М. Медицина, 1987, с. 57-63) и массы тимуса. При развитии лучевой лейкопении на 9-ый день при снижении качества фагоцитоза (ПЗФ) на 4-ый день в 1,8-2 раза, уменьшении на 23-ий день после облучения массы тимуса и количества лиенальных антителообразующих клеток (АОК) в 2,2-2,4 раза, констатируют воспроизведение модели вторичного иммунодефицита.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами
1. Крыса-самец линии Вистар не подвергалась воздействию патогенетических факторов. Уровень лейкоцитемии 20,4 х 10⁹ кл/мл, ПЗФ 67,4% АОК в селезенке 480 кл/чП, маcсы тимуса 170 г.

2. Крыса-самец линии Вистар проведено моделирование фракционированного гамма-облучения. Уровень лейкоцитемии на 4-ый день 2,2 х 10⁹, на 9-ый день 3,5х10⁹ кл/мл, ПЗФ на 4-ый день 50,9% на 23-ий день АОК в селезенке 360 кл на чашку Петри, массы тимуса 80 г.

3. Крыса-самец линии Вистар проведено моделирование адъювантного артрита. Уровень лейкоцитемии на 4-ый день после срока облучения в соответствующих группах 37,5 х 10⁹ кл/мл, ПЗФ 88,4% на 23-ий день - АОК в селезенке 608 кл/чП, массы тимуса 220 г.

4. Крыса-самец линии Вистар проведено моделирование адъювантного артрита и фракционированного гамма-облучения. Уровень лейкоцитов на 4-ый день 12,5х10⁹, на 9-ый день 3,2х10⁹ кл/мл, ПЗФ на 4-ый день - 28,4%на 23-ий день АОК в селезенке 272 кл на чашку Петри, массы тимуса - 50 г.

Способ испытан в отделе механизмов действия физических факторов Пятигорского НИИ курортологии и физиотерапии в эксперименте на 35 крысах линии Вистар, разделенных на 4 группы. У животных 1 группы воспроизводилась модель адъювантного артрита. Крысы 2 (основной или опытной группы) после воспроизведения адъювантного артрита подвергались фракционированному внешнему гамма-облучению в суммарной дозе 6 Гр. Интактные животные 3 группы являлись контролем для всех остальных групп. Животные 4 группы получали только облучение. Лучевая лейкопения на 4-ый день после начала облучения составившая 2,16+0,27x10⁹ кл/мл (контроль 14,7 + 1,74х10⁹ кл/мл; Р<0,001), на фоне адъювантного заболевания в этот срок практически не проявлялась (14,1 + 1,99х10⁹ кл на мл; Р>0,5), тогда как при изолированном адъювантном артрите зафиксирован выраженный лейкоцитоз (35,0 + 3,77 х 10⁹ кл/мл; Р<0,001). На 9-ый день после начала облучения уровень лейкопении был примерно одинаковым в обеих облученных группах (соответственно 3,99 + 0,38х10⁹ и 3,87 + 0,50х10⁹ кл/мл). Качество фагоцитоза (ПЗФ) снижалось на 4-ый день после облучения в опытной группе с 60,3 + 6,89 до 32,9 + 3,53% Р<0,01).

При исследовании на 23-ый день после облучения установлено, что масса тимуса при изолированном адъювантном артрите практически не менялась (197,8 + 13,8 против 190,0 + 19,0 г у интактных животных; Р>0,8), при изолированном облучении существенно снижалась (102,8 + 7,14 против 190,0 + 19,0 г у интактных животных; Р<0,001), а при сочетании адъювантного артрита и облучения снижалась еще более значимо (до 81,5 + 8,82; Р<0,001). Аналогичные результаты получены при изучении в этот срок количества антителообразующих клеток (ДОК) в селезенке животных. При изолированном адъювантном артрите уровень этого показателя существенно возрастал (634,0 + 52,7 против 462,0 + 23,2 кл/чП у интактных животных; Р <0,01), что указывает на повышение напряженности иммунитета в этом случае. При изолированном облучении уровень этого показателя существенно снижался (до 350,8 + 30,8 против 452,0 + 23,2 кл/чП у интактных животных; Р<0,05). При сочетании адъювантного артрита и облучения уровень этого показателя снижался еще более значимо до 270,2 + 22,5 кл/чП, достоверно ниже, чем у интактных животных или 2 у животных, получивших изолированное облучение (соответственно Р<0,001 и Р<0,05).

Использование: экспериментальная медицина, для моделирования вторичного иммунодефицита у экспериментальных животных. Сущность изобретения: у животного вызывают адьювантный артрит, через 35-37 дней воздействуют гамма-облучением, на 4-ый, 9-ый и 23 день после облучения контролируют состояние иммунного статуса и при развитии лучевой лейкопении на 8-ый день, снижении качества фагоцитоза в 1,8-2 раза на 4-ый день, уменьшении массы тимуса и количества лиенальных антителообразующих клеток в 2,2-2,4 раза ни 23 день, констатируют воспроизведение модели вторичного иммунодефицита.

Способ моделирования вторичного иммунодефицита в эксперименте, включающий воздействие на экспериментальное животное внешним гамма-облучением, отличающийся тем, что перед гамма-облучением у животных вызывают адьювантный артрит, затем через 35-37 дней производят облучение, на 4, 9 и 23 дни после начала облучения контролируют состояние иммунного статуса и при развитии лучевой лейкопении на 9 день, снижении показателя завершенности фагоцитоза в 1,8-2 раза на 4 день, уменьшении массы тимуса и количества лиенальных антителообразующих клеток в 2,2-2,4 раза на 23 день констатируют воспроизведение модели вторичного иммунодефицита.