СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТА ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ВОЛН МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА (КВЧ) В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2014 года по МПК A61N5/02 A61N5/10 A61B17/04 A61K31/675 A61P35/00 G01N33/48 G09B23/28 

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к иммунологии.

Известен способ оценки действия ультразвука в эксперименте (патент РФ №2105982. «Способ оценки действия ультразвука в эксперименте». Авторы: Ю.М. Гринзайд, Н.И. Демешко). Способ заключается в следующем: на область иммунокомпетентного органа животного воздействуют ультразвуком интенсивностью 0,05 Вт/см² с разовой экспозицией 1-2,5 мин, курс 5-6 процедур через 2-3 дня. После проведения установленного количества процедур животное иммунизируют эритроцитами барана. После забоя животного дополнительно определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови. В качестве оценочного показателя рассчитывают индекс иммуномодуляции как произведение содержания антителообразующих клеток в селезенке (клеток на чашку Петри) на уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови (отн. опт. ед.), деленное на массу селезенки (мг). При значении индекса иммуномодуляции более 20,4 оценивают действие ультразвука как иммуномодулирующее.

Данный способ обладает рядом недостатков, снижающих его практическую ценность. Одним из основных недостатков способа, проведенного на здоровых животных, предложенного в прототипе, является неприменимость его в условиях лечебной технологии, в частности в онкологической практике, где большинство реальных цитостатических сценариев лечения включает в себя минимум 2 звена - операцию, фракционированное облучение и/или химиотерапию.

Предлагаемый нами способ позволяет оценить эффект электромагнитных миллиметровых волн (КВЧ) для трехсоставной модели цитостатического воздействия.

Технический результат способа изобретения заключается в возможности объективной оценки эффектов электромагнитных миллиметровых волн (КВЧ) в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. Эксперимент проводится на грызунах (крысы), иммунные реакции которых близки к человеческим.

Указанный технический результат достигается тем, что вначале группе животных, например крыс, воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм, разовой экспозицией 1-2 мин в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня, затем осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины, на седьмой день после операции проводят трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день, затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного и на 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов, при этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 10⁶ кл./100 мг его массы, функциональной активности лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед. и содержание антителообразующих клеток (АОК) по N.K. Erne в кл./чП в селезенке, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед., после чего определяют индекс эффекта физического фактора (ИФ) по формуле:

и при величине его меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия.

Способ осуществляют следующим образом: вначале группе животных, например крыс, проводят воздействие на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм, разовой экспозиции 1-2 минуты в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня. После завершения превентивных процедур КВЧ осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины. На седьмой день осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день (суммарная доза 7,5 Зв). Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. При этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 10⁶ кл./100 мг его массы, функциональную активность лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед. и содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК) в кл./чП по N.K.Erne, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед., после чего определяют индекс иммуномодуляции физического фактора (ИФ) по формуле:

и при величине его меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ)-воздействия.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов (ОИМДФФ) Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 20 крыс-самцов линии Вистар, разделенные на 3 группы: 1) интактные, 2) с трехсоставной моделью патологии и 3) с процедурами электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) перед инициацией этой модели.

Результаты эксперимента проиллюстрированы в таблице.

Из таблицы видно, что способ прототипа (индекс иммуномодуляции - ИИМ) оказался неинформативным, по изменению отдельных показателей иммунного статуса можно было оценить или влияние модели, или влияние КВЧ, что привело к необходимости интегрального показателя для оценки эффективности КВЧ-воздействия. Тогда как уровень индекса иммуномодуляции физического фактора (ИФ) под влиянием пресанации электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ), как видно из таблицы, изменяется существенным образом в сторону значений у интактных животных.

Предлагаемый индекс иммуномодуляции физического фактора (ИФ) позволяет увидеть существенное различие как между интактными животными и животными с моделью иммунодефицита трехсоставного реального цитостатического воздействия, так и между крысами только с моделью и животными, получавшими профилактические процедуры КВЧ.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

Пример 1. Интактная крыса-самец линии Вистар №19, масса тела 275 г. Дополнительных воздействий не получала. Исследование животного осуществлено одновременно с животными опытной группы (через 14 дней после инъекции циклофосфана). Клеточность тимуса (КТ) - 243,3 в 10⁶ кл./100 мг его массы, тест с нитросиним тетразолием (НСТ) - 3,06 в ед. и содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК) - 220 в кл./чП, апоптоз (АП) - 0,3 в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) - 24 в ед.

Пример 2. Крыса-самец линии Вистар №13, масса тела 240 г. Осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины под ингаляционным наркозом. На седьмой день осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв (суммарная доза 7,5 Зв). Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. Клеточность тимуса (КТ) - 160,4 в 10⁶ кл./100 мг его массы, тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) - 1,34 ед. и содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК) - кл./чП, апоптоз (АП) - 18,1%, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) - 7 ед.

Пример 3. Крыса-самец линии Вистар №7, масса тела 250 г. Воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня. Разовая экспозиция физического фактора при этом составляет 1-2 минуты. После завершения превентивных процедур КВЧ осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины под ингаляционным наркозом. На седьмой день осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в курсовой дозе 2,5 Зв (суммарная доза 7,5 Зв). Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. Клеточность тимуса (КТ) - 160,4 10⁶ кл./100 мг его массы, тест с нитросиним тетразолием (НСТ) - 1,01 ед. и содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК) - 152 кл./чП, апоптоз (АП) - 3,5%, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) - 54 ед.

Таким образом, предлагаемый способ оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ), проведенный в условиях трехсоставной модели реального цитостатического воздействия, является информативным. Эффект миллиметровых волн в предлагаемом изобретении определяется сдвигом уровня индекса иммуномодуляции физического фактора (ИФ) по формуле:

(ИФ) в сторону значений у интактных животных, и при величине его меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и иммунологии и может быть использовано для оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. Для этого в группе животных воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня. Разовая экспозиция физического фактора при этом составляет 1-2 минуты в течение 2 недель с перерывами 1-2 дня. Затем осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины. На седьмой день после операции осуществляют трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день. Затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. На 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов. При этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 10⁶кл./100 мг его массы, функциональную активность лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед., содержание антителообразующих клеток (АОК) по N.K.Erne в кл./чП в селезенке, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед. После этого расчитывают индекс эффекта физического фактора (ИФ) по формуле:

$$ИФ=\frac{АП\times НСТ\times КТ\times 100}{ЦИК\times АОК}$$ . При величине ИФ меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия. Способ обеспечивает возможность объективной оценки эффекта воздействия электромагнитных миллиметровых волн КВЧ в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия. 1 табл., 3 пр.

Способ оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (КВЧ) в эксперименте в условиях трехсоставной модели цитостатического воздействия, отличающийся тем, что вначале группе животных, например крыс, воздействуют на область тимуса электромагнитными волнами миллиметрового диапазона (КВЧ) при длине волны 5,6 мм, разовой экспозицией 1-2 мин в течение 2 недель с перерывами в 1-2 дня, затем осуществляют имитацию хирургического оперативного вмешательства путем вскрытия и зашивания брюшины, на седьмой день после операции проводят трехкратное фракционированное внешнее гамма-облучение животных в разовой дозе 2,5 Зв через день, затем животным внутрибрюшинно вводят циклофосфан в дозе 4 мг/100 г массы тела животного и на 14 день после инъекции цитостатика проводят забой животных с исследованием крови и иммунокомпетентных органов, при этом определяют клеточность тимуса (КТ) в 10⁶ кл./100 мг его массы, функциональной активности лимфоцитов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в ед. и содержание антителообразующих клеток (АОК) по N.K. Erne в кл./чП в селезенке, апоптоз в аннексиновом тесте (АП) в %, содержание циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК) в ед., после чего определяют индекс эффекта физического фактора (ИФ) по формуле:

и при величине его меньше 48 констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта КВЧ-воздействия.