СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно, к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления аллергии у взрослых и детей.

Диагностика аллергических заболеваний проводится в основном по данным анамнеза и клиники, однако часто затруднителен их дифференциальный диагноз с нозологическими формами, не связанными патогенетически с механизмами аллергии, поэтому важна лабораторная диагностика аллергии. В настоящее время лабораторная постановка диагноза основывается на определении общего иммуноглобулина Е и аллергенспецифических lg E-антител (4,6), проведения кожных проб (5), выявлении эозинофилии в крови и секретах (4, 5, 6).

Известен способ диагностики аллергических состояний, основанный на определении эозинофилов в крови, однако показатель эозинофилов в крови здоровых людей подвержен значительным индивидуальным колебаниям, нормативные пределы составляют 50-350 клеток/мкл•10⁹/л (6). Способ связан со взятием крови, что не желательно из-за нанесения травмы и возможности инфицирования.

Прототипом способа является определение эозинофилов в секрете слизистой носа (4). Этот способ прост, безопасен и легко воспроизводим. Диагностическим критерием считается само обнаружение эозинофилов в мазке из носа (1, 4, 8, 10, 13).

Недостатки прототипа: способ не позволяет дифференцировать истинную местную аллергическую эозинофилию от эозинофилии, которая не связана с аллергией, что может быть у здоровых детей (1), при гнойном процессе (3), при неаллергических ринитах (10). Способ не имеет цифрового диагностического критерия, что затрудняет трактовку результатов.

Целью изобретения является повышение точности диагностировки аллергии.

Сущность способа заключается в том, что в секрете слизистой носа подсчитывают процентное соотношение эозинофилов и нейтрофилов и оценивают их соотношения к нормативному показателю процентного соотношения эозинофилов и нейтрофилов в лейкоформуле крови здоровых людей, рассчитывая индекс эозинофилии и, исходя из его величины, диагностируют аллергию.

Поставленная цель достигается тем, что из содержимого нижнего носового хода делают мазок, высушивают его, фиксируют в течение 5-7 минут в парах 40% формалина, окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 15-20 минут, микроскопируют, подсчитывают процент эозинофилов и нейтрофилов, определяют изменение их соотношения к нормативному показателю процентного соотношения эозинофилов и нейтрофилов в лейкоформуле крови здоровых людей, рассчитывают индекс эозинофилии и при его величине более 15,0 диагностируют аллергию.

Способ осуществляют следующим образом: материалом для исследования служат выделения из полости носа больных. Для взятия материала в нижний носовой ход вводят ватно-марлевый тампон, прижимают его к латеральной стенке и делают 1-2 оборота для снятия выделений. Из материала делают мазок, высушивают его на воздухе, фиксируют в парах 40%-ного формалина (в эксикаторе) 5-7 минут, окрашивают по Романовскому-Гимзе 15-20 минут, микроскопируют под иммерсией, просматривая 100 клеток и определяя число (процент) эозинофилов и нейтрофилов. Рассчитывают индекс эозинофилии (ИЭ) по формуле:

При получении величины ИЭ больше 15,0 диагностируют аллергию.

40% -ный формалин это крепость формалина, которая позволяет фиксировать мазок биологического субстрата на предметном стекле, не вызывая при этом разрушения клеток;
5-7 минут время, достаточное для фиксации мазка;
15-20 минут время, достаточное для прокрашивания фиксированного на стекле материала;
100 клеток количество клеток, от которого считается процент эозинофилов и нейтрофилов;
нормативное процентное соотношение эозинофилов и нейтрофилов в лейкоформуле крови здоровых детей составляет 4/50 (7);
15,0 это диагностическая величина индекса эозинофилии, установленная опытным путем при исследовании ИЭ в контрольных группах здоровых детей и больных ОРВИ (см. приложение к акту клинических испытаний).

Примеры конкретного выполнения способа касаются здоровых детей, больных ОРВИ и аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, аллергический ринит, аллергический стеноз гортани, нейродерматит).

Пример 1. Ребенок Ф. в возрасте 6 лет, посещает д/с, практически здоров. Способ осуществляли при разных условиях: результаты осуществления предлагаемого способа с использованием фиксации мазка из носа в течение 5 минут 40%-ным формалином, окраске по Романовскому-Гимзе в течение 15 минут приведены в табл. 1.

Результаты предлагаемого способа с использованием фиксации мазка в парах 40%-ного формалина в течение 7 минут и последующей окраске в течение 20 минут приведены в табл. 1.

Достоверность отличий при разных условиях способа р > 0,05 Диагноз: здоров. Аллергического состояния не выявлено.

Пример 2. Ребенок З. в возрасте 4 лет, посещает д/с, практически здоров. Способ осуществляли при разных условиях. Результаты осуществления предлагаемого способа с использованием фиксации мазка из носа в 40%-ном формалине в течение 5 минут с последующей окраской по Романовскому-Гимзе в течение 15 минут приведены в табл. 2. Результаты предлагаемого способа с использованием фиксации мазка из носа в парах 40%-ного формалина в течение 6 минут и окраске по Романовскому-Гимзе в течение 18 минут приведены в табл. 2.

Достоверность отличий при различных условиях осуществления способа р > 0,05. Диагноз: Здоров. Аллергии не выявлено.

Пример 3. Ребенок К. в возрасте 4 лет, посещает д/с, практически здоров. Способ осуществляли при разных условиях. Результаты осуществления предлагаемого способа с использованием фиксации мазка из носа в 40%-ном формалине в течение 7 минут с последующей окраской по Романовскому-Гимзе в течение 20 минут представлены в табл. 3. Результаты предлагаемого способа с использованием фиксации мазка из носа в парах 40%-ного формалина в течение 6 минут и окраске по Романовскому-Гимзе в течение 18 минут представлены в табл. 3.

Достоверность отличий при разных условиях осуществления способа р > 0,05. Диагноз: Здоров. Аллергия не выявлена.

Пример 4. Больная Е. в возрасте 15 месяцев. Отмечается гиперемия в зеве, повышение температуры, снижение аппетита. Показатели аллергологического обследования представлены в табл. 4.

Аллергическое состояние не выявлено. Отсутствие аллергии подтверждено также отрицательными результатами исследования общего lg Е и аллергенспецифических lg E-антител. Диагноз: ОРВИ.

Пример 5. Больная Б. в возрасте 13 лет. Поступила с жалобами на кашель, насморк в горле, повышение температуры. Результаты обследования представлены в табл. 5.

Аллергическое состояние не выявлено. Отсутствие аллергии подтверждено отрицательными результатами исследования общего lg Е и аллергенспецифических lg E-антител. Диагноз: ОРВИ.

Пример 6. Ребенок М. в возрасте 9 лет. У мальчика типичные приступы удушья с затруднением выдоха, дыхание "свистящее", в легких масса сухих хрипов. Температура не повышена. Результаты обследования приведены в таблице. 6.

Наличие аллергии у ребенка подтверждается высоким значением ИЭ, а также повышением уровня общего lg E и выявлением аллергенспецифических lg E-антител. Диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма.

Пример 7. Ребенок С. в возрасте 8 лет. У больного отмечается повторяющиеся 4-5 раз в год приступы затрудненного дыхания с "лающим" кашлем, осиплостью голоса. Начинаются они внезапно без катаральных явлений и без признаков подъема температуры. Проходят на фоне антигистаминных препаратов через 2-3 часа. Данный приступ развился сразу после прививки. Результаты обследования представлены в табл. 7.

У ребенка наличие аллергии подтверждается высоким значением ИЭ, повышенным содержанием эозинофилов в крови и выявлением аллергенспецифических lg E-антител к определяющимся аллергенам. Диагноз: аллергический рецидивирующий стеноз гортани.

Пример 8. Ребенок Ш. в возрасте 6 лет. У девочки периодически, чаще весной, возникают периоды появления слизистого отделяемого из носа, чихание, зуд. Результаты обследований представлены в табл. 8. Наличие аллергии подтверждено значительным повышением ИЭ, уровня общего lg E и выявлением аллергенспецифических lg E-антител. Диагноз: Аллергическая риносинусопатия.

Пример 9. Ребенок Ш. в возрасте 4 лет. На коже имеется полиморфная сыпь, кожа сухая, в сгибах утолщена, складчата, зуд. Признаки усиливаются после употребления сладкого, цитрусовых. Результаты обследования представлены в табл. 9.

Наличие аллергии у ребенка подтверждается высоким значением ИЭ, повышением содержания эозинофилов в крови, высоким уровнем lg E и выявлением аллергенспецифических lg E-антител. Диагноз: нейродермит.

Таким образом, результат проведенного исследования показывает, что у больных с аллергическим генезом заболевания изменяется соотношение эозинофилов и нейтрофилов в мазке из носа, что может быть оценено количественно в виде индекса эозинофилии и использована как диагностический признак аллергических заболеваний.

В целом результаты применения предлагаемого способа приводятся в приложении к акту клинических испытаний.

Положительный эффект:
предлагаемый способ диагностически более точен, так как он имеет конкретный цифровой критерий в виде индекса эозинофилии, что позволяет объективнее оценить получаемые результаты;
при применении предлагаемого способа удается подтвердить диагноз и установить аллергическую природу заболевания у 78% больных в сравнении с 32% случаев диагностики по традиционному выявлению эозинофилии в крови, то есть предлагаемый способ эффективнее в 2,4 раза;
предлагаемый способ технически прост, безопасен, не связан со взятием крови и легко может быть произведен в условиях любой лаборатории.

Использование: в области медицины, а именно в лабораторной диагностике и может применяться для выявления аллергии у взрослых и детей. Сущность изобретения: у больного берут мазок из носа, высушивают его, фиксируют в течение 5-7 минут в парах 40% формалина, окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 15-20 минут, микроскопируют, подсчитывают процент эозинофилов и нейтрофилов, определяют изменение их соотношения к нормативному показателю процентного соотношения эозинофилов и нейтрофилов в лейкоформуле крови здоровых людей. Рассчитывают индекс эозинофилов и при его величине более 15,0 диагностируют аллергию. Способ позволяет повысить точность диагностики.

Способ диагностики аллергии путем определения в окрашенном мазке секрета слизистой носа содержания эозинофилов, отличающийся тем, что дополнительно в этом же препарате определяют содержание нейтрофилов, рассчитывают отношение первого показателя к второму и затем индекс эозинофилии ИО по формуле

где Э/Н_о% соотношение эозинофилов и нейтрофилов в секрете слизистой носа;
Э/Н_н% соотношение эозинофилов и нейтрофилов в крови в норме,
и при значении показателя 15 и более диагностируют аллергию.