Способ дифференциальной диагностики острого инфаркта миокарда и стенокардии Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для диагностики острого инфаркта миокарда и стенокардии.

Цель изобретения - повышение точности способа диагностики острога инфаркта миокарда и стенокардии.

Способ осуществляется следующим образом.

Из венозной крови в количестве 10 мл выделяют нейтрофилы на градиенте плотности верографинафиколла. Для этого кровь, отобранную с Na-солью этилендиаминтет- рауксусной кислотой, разводят в 4 раза 0,9%-ным раствором Nad и наслаивают на раствор верографинфиколла (d - 1,077 - 1,078 г/см3) по 7 мл в каждую, пробирку и центрифугируют 40 мин при 400 д. После центрифугирования образуется осадок эритроцитов и гранулоцитов. Нейтрофилы располагаются пленкой на поверхности осадка.

Для получения взвеси гранулоцитое удаляют верофиколл. а осадок, содержащий эритроциты и гранулоциты, разводят в 1 мл физиологического раствора. Содержимое пробирок объединяют и переносят в силико- нированные пробирки, где осаждают эритроциты 10%-ным раствором желатина (конечная концентрация желатина - 1 %). В течение 45-60 мин при 37°С эритроциты лизируют 0.83%-ным раствором . После перемешивания осадка фракции, содержащей гранулоциты с десятикратном объем раствора NH-iCI, центрифугируют ее 5-10 мин при 400 д. Процедуру повторяют несколько раз до полного освобождения гранулоцитов от эритроцитов. Проверяют жизнеспособность клеток по трипановому синему и подсчитывают в камере Горяева

Выделенные клетки доводят до рабочей концентрации 2,0-2.5 10 кл/мл и инкубируют с люминесцентными коньюгатами кроличьих иммуноглобулинов против иммуноглобули« Ј

S

о

нов человека в течение 15 мин при 37°С. Отмывают двукратно в среде 199 и делают препараты, которые просматривают с помощью люминесцентного микроскопа ЛМ- И2 с использованием объектива хбО (водная иммерсия) и окуляра х8.

Подсчитывают на мазке 50 нейтрофи- лов и среди них выделяют следующие морфологические варианты или типы свечения: ринг (ring) - кольцо флюоресценции, видимое в ультрафиолетовом свете, демонстрирует равномерность распределения меченых комплексов на клеточной поверхности, пэтч (patch) - нарушается равномерность свечения клеточной поверхности, образуются разрывы кольца с появлением зон с усиленным или ослабленным свечением; кэп (cap) или шапочка - процесс перераспределения в плоскости мембраны заканчивается объединением мелких комплексов в массивный агрегат, который принято называть колпачком.

Из перечисленных трех морфологических форм выбирают для анализа только клетки с. кэпами как наиболее демонстративные по типу свечения мембраны.

Интенсивность свечения выбранных клеток измеряют в условных единицах, показания снимаются с фотоэлектронного умножителя, установленного на микроскопе.

Подсчитывают интенсивность свечения каждой клети следующим образом: регистрируют показания ФУ единичной клетки и вычитают из него значение интенсивности свечения фона - участка чистого поля, расположенного рядом с этой клеткой.

Рассчитывают среднее арифметическое значение интенсивности свечения анализируемых клеток. В том случае, если величина рассчитываемого показателя находится в диапазоне 0,009 усл.ед . и ни- же, то ставится диагноз острый инфаркт миокарда: диапазон 0,010-0.014 усл.ед. - стенокардия, значение интенсивности свечения нейтрофилов 0,014 усл. ед. и выше характерны для здоровых лиц.

Пример 1. Больной Ш,, 55 лет, поступил в клиническое отделение кардиологии с диагнозом - подозрение на инфаркт миокарда. Клинические данные соответствовали классической картине острого инфаркта миокарда; наличие выраженного болевого синдрома, симптомов недостаточности кровообращения (сердечная астма) существенное снижение уровня артериального давления (95/55 мм рт.ст.).

Забор крови был произведен в первые сутки с момента поступления больного в клинику. По представленному способу определена интенсивность свечения кзпов - 0,007 усл. ед. что позволило поставить диагноз - острый инфаркт миокарда.

Пример 2. Больной Б., 50 лет. поступил в клинику кардиологии с интенсивными болевыми приступами за грудиной с иррадиацией в левое плечо и лопатку. Боли держались в течение б ч до момента купирования их фармакологическими средствами.

Исследование пробы, взятой в первые сутки с момента поступления больного-.в клинику, на определение функционального состояния рецепторного аппарата нейтрофилов показали значения интенсивности

свечения кэпов 0,012 усл.ед., что позволило предположить у больного наличие стенокардии.

Дальнейшее наблюдение за состоянием

больного показало, что произошло длительное и существенное снижение длительности и интенсивности приступов боли в области сердца, уровень АД за время наблюдения был стабильным (130/180 мм рт.ст.). Лабораторно-биохимические методы исследования позволили исключить наличие у больного острой ишемии миокарда. ЭКГ не отражала признаков нарушения коронарного кровообращения, гиперферментемия отсутстввовала.

Результаты ЭКГ с дозированной физической нагрузкой, толерантность 75 Вт х 3 мин, причина прекращения пробы-типичный приступ стенокардии, смещение сегмента Т в двух отведениях на 1 мм. Совокупность вышеизложенных данных позволила клиницистам определить диагноз как ИБС. стенокардия напряжения II функциональный класс.

Способ позволяет корректно судить о состоянии рецепторного аппарата нейтрофилов за счет оценки функционально активных его компонентов на поверхности клеток. При этом отработаны количественные критерии, позволяющие проводить дифференциальную диагностику острого инфаркта миокарда и стенокардии. Использование данного метода позволит адекватно судить об эффективности фармакорегуляции синтеза рецепторов, кэппинге, сбросе их или интернализации.Контролирование и коррекция этих процессов принципиально необходимы при реализации современных методов терапии, предлагаемых молекулярной иммунологией.

Формулаизобретения

Способ дифференциальной диагностики острого инфаркта миокарда стенокардии путем иммунофлуоресцентного исследования полиморфно-ядерных лейкоцитов крови, отличающийся тем, что, с целью

повышения точности способа, исследуюти при свечении 0.009 усл.ед. и ниже диагнейтрофилы, в которых определяют интвн-носцируют острый инфаркт, а при свечении

сивностъ свечения кэпов мембран клеток0,010-0,014 усл. ед. - стенокардию.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и кардиологии. Целью является повышение точности дифференциальной диагностики. Цель достигается тем, что исследуют нейтрофилы крови, в которых определяют интенсивность свечения ке- пов мембран клеток и при интенсивности этого свечения от 0,009 ус.ед. и ниже определяют острый инфаркт, а при интенсивности свечения от0.010-0,014усл.ед. -стенокардию. Способ позволяет равно провести диагностику ИБС и скорректировать последующее лечение.