СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КАТАЛАЗЫ КРОВИ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лабораторных исследованиях в качестве экспресс-теста при решении различных задач, в том числе при изучении антиокислительных процессов.

Каталаза является одним из звеньев антиоксидантной защитной системы организма, значимость изучения которой все более возрастает в связи с ухудшающейся экологической ситуацией. В этих условиях актуальна разработка именно экспрессивных методов исследования, обеспечивающих в то же время достаточно высокую точность определения активности данного фермента.

Аналогом способа может служить способ определения активности каталазы цельной крови (авт.св. N 1772763, кл. G 01 N 33/48, 1990), заключающийся в том, что на предметном стекле готовят препарат, смешивая равные объемы взвеси клеток крови и перекиси водорода, затем при малом увеличении микроскопа подсчитывают количество сфер выделяющегося кислорода. Ошибка данного метода составляет 10 12 что не позволяет с достаточной точностью выявлять отклонения в активности каталазы крови под влиянием тех или иных воздействий.

Наиболее близким к предлагаемому, принятому за прототип, является способ определения активности каталазы крови по высоте столбы пены, выделившейся при ее реакции с перекисью водорода (Gross Von J. et al. 1975). Он состоит в том, что в полиэтиленовый шланг до 2-милиметровой отметки набирают 25-кратно разведенный образец крови, вставляют конец шланга в ячейку пластины, содержащую 1,86 н. раствор перекиси водорода, причем шланг и ячейка должны герметично подходить друг к другу. Фиксируют результат, т.е. высоту образовавшегося столба пены через 10 с. По данным авторов ошибка метода, как и аналога, составляет 11 12
При попытке воспроизвести описанный способ оказалось, что реакция происходит как мгновенное вспенивание, при котором практически невозможно зарегистрировать результат. Кроме того, его осуществление требует специального оборудования, обеспечивающего герметичные условия для протекания реакции.

Целью изобретения является повышение точности и его упрощение.

Это достигается за счет того, что, смешивая более низкие концентрации крови и перекиси водорода, замедляют процесс образования пены до экспозиции, удобной для снятия результата. При этом используют оборудование, имеющееся в любой диагностической лаборатории, а герметичность протекания реакции обеспечивают специальным приемом.

Способ осуществляют следующим образом.

В лунку иммунологического планшета или в конусообразную пробирку помещают 2 капли 50-кратно разведенной крови. Берут капилляр для СОЭ и последовательно втягивают в него с помощью резинового наконечника вначале 0,02 мл 0,3 -ного раствора перекиси водорода, а затем исследуемый образец крови таким образом, чтобы под столбом смеси образовалась воздушная пробка. Следят за образованием пены в верхней части капилляра в течение 25 45 с, слегка покачивая столб жидкости, и фиксируют максимальный за этот временной промежуток результат по делениям капилляра. Повторное исследование одного и того же образца крови показало, что ошибка метода составляет 4 5 т.е. она вдвое ниже, чем в аналоге и прототипе.

В качестве примеров конкретной реализации способа определяли показатели активности каталазы цельной крови и гемолизата.

Пример 1. У обследуемого берут 0,02 мл крови из пальца и помещают ее в 1,0 мл цитратного физиологического раствора. 2 капли полученной взвеси клеток крови помещают в лунку иммунологического планшета. В капилляр для СОЭ с помощью резинового наконечника набирают 0,3-ный раствор перекиси водорода до отметки 8,0 и сразу же втягивают в него исследуемый образец крови до появления в нижней части капилляра воздушной пробки. Следят за образованием пены в верхней части капилляра в течение 25 45 с, слегка покачивая столб жидкости. Максимальная высота пены за указанный промежуток времени составила 20 мм.

Пример 2. У того же обследуемого берут 0,02 мл крови из пальца и вызывают ее гемолиз, поместив в 1,0 мл дистиллированной воды с добавлением цитрата. Описанным выше способом проводят реакцию гемолизата с перекисью водорода и определяют высоту столба пены, которая равняется 34 мм. Полученные результаты подтверждают общеизвестный факт о более высоких значениях активности каталазы гемолизата по сравнению с цельной кровью, что свидетельствует об информативности предлагаемого способа.

Таким образом, преимуществами предлагаемого способа по сравнению с известным являются более высокая точность и простота технического выполнения.

Источники информации
1. SU, авторское свидетельство N 1772763, кл. G 01 N 33/68, 1990.

2. Gross Von J. et al. Ein verbesserter siebtest Zur Katalasebestimmung im Blut. Z. med Labortechnik, 1975, Bd.16, W6, s. 336 339.

Использование в медицине, в частности в лабораторных исследованиях в качестве экспресс-теста при решении различных задач. Сущность изобретения: в капилляр для СОЭ последовательно набирают вначале 0,02 мл 0,3 %-ного раствора перекиси водорода, затем 2 капли 50-кратно разведенной крови таким образом, чтобы под столбом смеси образовалась воздушная пробка. Следят за образованием пены в верхней части капилляра в течение 25 - 45 с и фиксируют максимальный за этот временной промежуток результат по делениям капилляра.

Способ определения активности каталазы крови по высоте столба пены, образующейся при реакции с перекисью водорода, отличающийся тем, что в капилляр для СОЭ последовательно набирают 0,02 мл 0,3%-ного раствора перекиси водорода и 2 капли 50-кратно разведенной крови таким образом, чтобы под столбом смеси образовалась воздушная пробка, и по делениям верхней части капилляра фиксируют максимальную высоту столба пены за 25-45 с экспозиции.