АНТИКОАГУЛЯНТ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственных средств растительного происхождения, обладающего антикоагулянтными свойствами.

Среди известных фармпрепаратов указанного действия широко применяется гепарин антикоагулянт прямого действия. Однако гепарин является лекарственным средством животного происхождения и может вызывать в кровотоке тромбоцитопению, а после отмены его у больных могут возникать тромбоэмболические осложнения в виде так называемых "рикошетных" тромбозов (1).

В настоящее время следует считать актуальной задачей необходимость поиска новых антикоагулянтов прямого действия среди растения, произрастающих в Средней полосе России.

Известно, что экстракты ряда растений могут оказывать антикоагулянтный эффект, который зачастую обусловлен присутствием в них ингибиторов агрегации тромбоцитов свитенинов и свитенолидов, сапонинов, кумарина, гепариноподобного мукополисахарида и т.д. (2, 3).

Задачей изобретения является расширение арсенала лекарственных средств из растительного сырья с антикоагулянтным действием.

Для решения поставленной задачи предлагается комплекс, представляющий собой гепариноподобный полисахарид, связанный с пептидом молекулярной массы равной 5-6 кДа. Это соединение получено путем водной экстракции корней пиона древовидного (при соотношении сырье-экстрагент 1:20) с последующим нагреванием на кипящей водяной бане при помешивании в течение 10-20 мин. Далее осадок удаляют центрифугированием при 1800-2000 об/мин в течение 20-30 мин, супернатант замораживают при (-10) (-20)^oC и лиофильно высушивают. Дополнительная очистка антикоагулянта проводилась на сефадексе G-50. Выход полученного средства составляет 0,4-0,5% из жидкого экстракта и характеризуется следующими данными.

1) Содержание микроэлементов.

Эмиссионным масс-спектрометрическим методом получили масс-спектры 0,4% -ых растворов препаратов пиона и гепарина фирмы "Celsus" (США) и определили в них содержание серы (S), азота (N) и углерода (С).

Установлено, что в препарате из пиона содержится:
серы 0,071±0,009
азота 0,074±0,005
углерода 0,054±0,007
Для сравнения в коммерческом низкомолекулярном гепарине фирмы "Celsus" (США) содержится:
серы 0,064±0,05
азота 0,068±0,008
углерода 0,048±0,03
Нормировка интенсивностей линий этих элементов была осуществлена относительно 19-й линии Н⁺(H₂O).

2) Данные спектрального анализа в инфракрасной (ИК)-области спектра.

Определение проводили на приборе ИКС-29. Сняты ИК-спектры твердых препаратов (КВч-техника, таблетки):
1) коммерческого ВМГ фирмы "Spofa" (Чехословакия),
2) коммерческого НМГ фирмы "Celsus" (США),
3) препарат из пиона (табл. 1)
3) Цвет сухого препарата лимонно-желтый.

4) Хранение в стеклянных пузырьках в холодильнике (+4^o в эксикаторе над хлористым кальцием в течение не менее 6 месяцев.

5) Оптимум рН 6,9-7,4
6) Применение очищенного препарата из пиона в экспериментах in vivo. На моделях животных (крысах) с предтромболический эффекты препарата в дозах 30-40 мкг на кг веса тела.

7) LD 1 мг/200 г
70 мг/кг веса тела.

Из предоставленных данных видно, что препарат из пиона содержит больше азотсодержащих функциональных групп по сравнению с гепарином. Как и в гепарине имеется значительное количество серусодержащих функциональных групп. По содержанию других различных функциональных групп СОО^-; -C-C; C=O и т.д. препарат из пиона имеет большее сходство с низкомолекулярным гепарином (НМГ).

Препарат из пиона представляет собой гепариноидный полисахарид, связанный с пептидом. Это гликопептид, углеводная часть которого представлена глюкозамином.

В условиях in vitro и in vivo изучали влияние этого комплекса на систему гемостаза.

В экспериментах in vivo было использовано более 20 белых крыс-самцов тела 180-200 г. Очищенный препарат из пиона вводили внутривенно в дозе 4,5 МЕ гепарина на крысу массой тела 200 г. Кровь на анализы брали через 10 мин после введения препарата. В плазме крови определяли суммарную фибринолитическую активность (СФА), неферментативный фибринолиз (НФ) на нестабилизированных фактором ХIII фибрине методом Кудрявцева и др. (4), уровень активатора плазминогена на стабилизированных прогретых и непрогретых при 86^oC в течение 30 мин пластинах фибрина по методу Astrup (5), процент агрегации тромбоцитов по методу Borm (6), используя в качестве агрегата АДФ, на агрегометре отечественного производства; антикоагулянтную активность по тесту тромбинового времени общепринятым методом.

Статистическая обработка данных проведена по методу Стьюдента-Фишера.

В экспериментах in vitro во второй фракции, содержащей гепарин и белок, установлена неферментативная фибринолитическая активность в отличие от первой фракции, не содержащей белок, где такая активность не была обнаружена в течение 2 ч инкубации проб при 37^oC.

При внутривенном введении препаратов растительного гепарина (1 фракция) здоровым животным отмечено достоверное увеличение в плазме крови суммарного и неферментативного фибринолиза в 1,6-1,7 раз соответственно по сравнению с контрольными образцами (после введения 0,85%-ного раствора хлорида натрия). Однако ферментативный фибринолиз за счет активности активатора плазминогена был одинаков в опытных и контрольных пробах.

Обращает на себя внимание факт снижения процента агрегации тромбоцитов на 32% в опытной группе животных по сравнению с контрольной, не получавшей активный продукт из пиона. По-видимому, содержащийся в этом продукте гепариноподобный агент, подобно гепарину животного происхождения (Bratt et al, 1985) снижает или предотвращает склеивание тромбоцитов.

Что касается антикоагулянтных свойств плазмы крови опытной группы животных, получавших гепариноподобный агент из пиона, то по тесту тромбинового времени изменений по сравнению с контролем не обнаружено. Однако по данным определения времени рекальцификации установлено достоверное удлинение времени свертывания в опытных образцах по сравнению с контролем (в 1,37 раза).

На основании проведенного исследования можно заключить, что полученный нами очищенный от белка препарат антикоагулянта из пиона обладает антикоагулянтными свойствами, но не обнаруживает фибринолитического действия в условиях in vitro. В целом по данным электрофоретического, хроматографического, спектрального анализов этот антикоагулянт подобен гепарину. Растительный гепарин в условиях организма антикоагулянтные и фибринолитические свойства плазмы и снижает агрегацию тромбоцитов крови. ТТТ1 ТТТ2

Изобретение относится к медицине, в частности касается создания антикоагулянта растительного происхождения. Антикоагулянт представляет собой гепариноподобный полисахарид, связанный с пептидом молекулярной массой 5-6 кДа и выделенный экстракцией водой из корней пиона древовидного. Предлагаемое растительное гепариноподобное средство повышает антикоагулянтные и фибринолитические свойства плазмы и снижает агрегацию тромбоцитов крови. 2 табл.

Антикоагулянт растительного происхождения, отличающийся тем, что он представляет собой гапариноподобный полисахарид, связанный с пептидом мол. м. 5 6 кДа и выделенный экстракцией водой корней пиона древовидного.