СРЕДСТВО С АНТИКОАГУЛЯНТНОЙ, АНТИТРОМБОЦИТАРНОЙ, АНТИТРОМБОТИЧЕСКОЙ, ФИБРИНДЕПОЛИМЕРИЗАЦИОННОЙ И ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЯМИ Российский патент 2006 года по МПК A61K38/08 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине, к средствам, обладающим антикоагулянтной, фибриндеполимеризационной, антитромбоцитарной, антитромботической и фибринолитической активностью.

Среди фармпрепаратов антикоагулянтного действия известен гепарин, обладающий антикоагулянтной активностью (Zaman S.M., Neiring P., Gandhi M.R., Gaines P.A. The pharmacokinetics and US usage of heparin in vascular intervention. // Clin. Radiol. 1996. V 51. №2. P.113-116.) [1].

Однако он имеет следующие недостатки:

1) не обладает антитромбопитарными свойствами,

2) не обладает фибринолитическим действием,

3) при передозировке высокомолекулярные фракции могут вызвать нежелательные побочные явления кровоточивости.

Известен препарат ацетилсалициловой кислоты, который обладает антитромбоцитарным действием (МсКее S.A., Sane D.C., Deliargyris E.N. Aspirin resistance in cardiovascular disease: a review of prevalence mechanisms, and clinical significance. // Thromb. Haemost. (Schattauer). 2002. V.88. №5. P.711-715) [2].

Препарат имеет следующие недостатки:

1) не обнаруживает антикоагулянтной активности,

2) имеет слабое фибриндеполимеризационное действие,

3) имеет побочные эффекты - кровоточивость со стороны желудочно-кишечного тракта.

Известен препарат плазмина, оказывающий фибринолитическое действие (Gitabert J., Estelles A., Grancella S., Espana F., Aznar J. Fibrinolytic system and reproductive process with special reference to fibrinolytic failure in preeclampsia. // Hum. Reprod. 1995. V.10. Suppl. 2. P.121-131.) [3].

Он имеет следующие недостатки:

1) не имеет антикоагулянтаых эффектов,

2) не имеет антатромбоцитарного действия,

3) не имеет фибриндеполимеризационной активности,

4) проявляет протеолитическое действие.

Известны пептиды, продукты расщепления фибриногена, обладающие антитромботической, антитромбоцитарной активностью и вызывающие локальный фибринолиз (Standker L., Sillard R., Bensch K.W., Ruf A., Raida M., Schulz-Knappe P., Shenky A.G., Patscheke H., Forssmann W.-G, In vivo degradation of human fibrinogen Aα: detection of cleavage sites and release of antithrombotic peptides. // Biochem. biophys. research communications. 1995. V.215. №3. P. 826-832.) [4].

Однако у этих пептидов не обнаружено антикоагулянтной, фибриндеполимеризационной и общей фибринолитической активности.

Известен гептапетид формулы Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, получивший название селанк, обладающий противотревожным действием (Середенин С.Б., Козловская М.М., Бледнев Ю.А. и др. Изучение противотревожного действия аналога эндогенного пептида тафцина на инбредных мышах с различным фенотипом эмоционально-стрессорной реакции. // Журнал ВНД. 1998. Т.48. Вып.1.) [5].

Однако антикоагулянтные, фибриндеполимеризационные и фибринолитические свойства данного известного гептапептида не описаны.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является выявление и рекомендация средства, сочетающего антикоагулянтную, антитромбоцитарную, антитромботическую, фибриндеполимеризационную и фибринолитическую активности.

Указанный технический результат достигается тем, что гептапептид селанк формулы: Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro применяют в качестве средства с антикоагулянтной, антитромбоцитарной и антитромботической, фибриндеполимеризационной, фибринолитической активностью.

Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение.

Пример 1.

Берут 1 мг препарата гептапептида селанк - Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, растворяют в 2,5 мл физиологического раствора NaCl и вводят внутривенно в v.jugularis 5-ти лабораторным крысам по 0,5 мл (200 мкг) на 200 г массы тела. Контрольным животным тем же способом вводят 0,85% раствор NaCl в дозе 0,5 мл на 200 г массы тела. Через 10 мин берут кровь и центрифугируют ее при 1000 об/мин в течение 5 мин для получения богатой тромбоцитами плазмы (для анализа агрегации тромбоцитов), затем дополнительно центрифугируют кровь в течение 10 мин при 2000 об/мин и получают плазму, бедную тромбоцитами. В богатой тромбоцитами плазме агрегация тромбоцитов в опытных пробах составляла 68,8%, в то время как в контроле - 100%, т.е. гептапептид селанк обладает высокой антитромбоцитарной активностью. В бедной тромбоцитами плазме обнаружено увеличение ферментативной фибринолитической активности за счет увеличения активности активатора плазминогена в 2,3 раза, общей фибринолитической активности - в 2,1 раза, антикоагулянтной активности - в 1,2 раза, фибриндеполимеризационной активности - в 8 раз по сравнению с контролем (физиологическим раствором NaCl).

Пример 2.

Берут 1 мг препарата селанк, растворяют в 5 мл физиологического раствора. Далее поступают так, как описано в примере №1.

В результате анализа параметров гемостаза обнаруживают следующее.

В богатой тромбоцитами плазме агрегация тромбоцитов в опытных пробах составляла 83%, в то время как в контроле - 100%, т.е. гептапептид обладает антитромбоцитарной активностью. В бедной тромбоцитами плазме обнаружено увеличение ферментативной фибринолитической активности за счет усиления активности активатора плазминогена в 1,7 раза, обшей фибринолитической активности - в 1,6 раза, антикоагулянтной активности - в 1,4 раза, фибриндеполимеризационной активности - в 1,8 раз по сравнению с контролем (физиологическим раствором).

Пример 3.

Берут 1 мг препарата пептид селанка Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, растворяют в 2,5 мл физиологического раствора NaCl и вводят интраназально в течение 5 дней через каждые 24 часа 5-ти лабораторным крысам по 0,5 мл на 200 г массы тела. Контрольным животным тем же способом вводят 0,85% раствор NaCl. Через 5 дней после последнего введения берут кровь из v.jugularis и проводят ее центрифугирование при 2000 об/мин в течение 10 мин для получения плазмы, бедной тромбоцитами. Затем в изолированном зажимами участке v.jugularis (стаз) с помощью тромбина вызывают образование тромба и определяют через 1 час антитромботический эффект препарата.

В бедной тромбоцитами плазме обнаруживают увеличение обшей фибриколитической активности - в 2 раза за счет увеличения активности активатора плазминогена, антикоагулянтной активности - в 1,5 раза, фибриндеполимеризационной активности - в 2 раза по сравнению с контролем (физиологическим раствором). Препарат селанка проявлял высокий антитромботический эффект, превышающий антитромботические свойства плазмы крови здоровых крыс в 5,6 раза: если в контроле вес тромбов составлял 1,4 мг, то в опыте - лишь 0,27 мг.

В таблице 1 приведены сравнительные данные предлагаемого препарата селанка и известного [4].

Таблица 1.Свойства целевых продуктовИзвестный [4]Предлагаемый пептид - СеланкАктивности1) антикоагулянтныеОтсутствуютИмеются2) ферментативный фибринолитиз в кровотокеЛокальныйОбщий3) фибриндеполимеризационная, фибринолитическаяОтсутствуетИмеется4) антитромбоцитарнаяИмеетсяИмеется5) антитромботическаяИмеетсяИмеется

Как видно из таблицы 1, предлагаемый препарат селанк, в отличие от известного [4], в условиях in vitro обладает дополнительными сочетанными положительными свойствами - антикоагулянтными, фибриндеполимеризационными, усиливающими общую фибринолитическую активность в плазме крови. В отличие от известных пептидов [4], предлагаемый препарат селанка при появлении в организме животных обладает одновременно антикоагулянтными, фибринолитическими, антитромбоцитарными, антитромботическими и фибриндеполимеризационными эффектами.

Таким образом, известный гептапептид селанк сочетает антикоагулянтные, фибриндеполимеризационные, антитромбоцитарные, антитромботические и фибринолитические свойства.

В таблице 2 представлены данные, свидетельствующие о преимуществах заявленного пептида Селанка Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro по сравнению с эталонными препаратами комплекса гепарин-фибриноген и три- и тетрапептидами (Pro-Gly-Pro и Gly-Pro-Gly-Gly).

Таблица 2АктивностиСеланк Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-ProКомплекс фибрино-генгепарин (прототип)Pro-Gly-Pro (прототип)Gly-Pro-Gly-Gly (прототип)In vitro    Антикоагулянтная120-143%140%122-140%118%Фибринолитическая (суммарная)36-42 мм²30-36 мм²36-42 мм²24 мм²Антитромбоцитарная61-68%-83%75%In vivo    Внутривенное введ.    Антикоагулянтная активность121%135%173%100%Фибринолитическая неферментативная активность150%140%173%100%Активность тканевого активатора плазминогена298%103%220%100%Агрегация тромбоцитов68,8%-83%100%Интраназальное введение    Антитромботическая активность(по весу тромбов)19%48%19%100%

Таким образом, из таблицы 2 видно, что заявленный пептид Селанк (Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro) имеет преимущества перед пептидами Pro-Gly-Pro и Gly-Pro-Gly-Gly по степени увеличения антикоагулянтной, фибринолитической и антитромбоцитарной активности в условиях in vitro: при внутривенном введении антикоагулянтно-фибринолитические эффекты заявленного пептида превышают те же активности эталонного тетрапептида Gly-Pro-Gly-Gly; при интраназальном введении антитромботические эффекты Селанка (Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro) превышают подобное действие комплекса фибриноген-гепарин и тетрапептида Gly-Pro-Gly-Gly и соответствуют эффекту Pro-Gly-Pro.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается антикоагулянтного, антитромбического, фибриндеполимеризационного и фибринолитического средства, содержащего гептапептид селанк формулы Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro. Заявленное средство обладает высокой активностью и эффективностью по сравнению с известными средствами. 2 табл.

Применение гептапептида селанка формулы

Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro

в качестве средства с антикоагулянтной, антитромбоцитарной, антитромботической, фибриндеполимеризационной и фибринолитической активностями.