АНТИТРОМБОТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ГЕПАРИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/727 A61K35/60 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается создания средств на основе гепарина, обладающих антикоагулянтным, антитромбоцитарным, фибринолитическим, фибриндеполимеризационным действием на организм.

Наиболее часто в медицине в качестве антикоагулянтных средств используются препараты на основе гепарина и его производных. Гепарин является кислым мукополисахаридом с молекулярной массой около 16000 дальтон. Вырабатывается в организме человека и животных базофильными (тучными) клетками.

Гепарин является естественным противосвертывающим фактором и совместно с фибринолизином входит в состав физиологической антисвертывающей системы. Он относится к антикоагулянтам прямого действия, т.е. непосредственно влияет на факторы свертывания крови (XII, XI, X, IX, VII и II). Кроме того, он блокирует биосинтез тромбина и уменьшает агрегацию тромбоцитов. Противосвертывающее действие гепарина проявляется in vitro и in vivo. Гепарин обладает не только антикоагулянтным действием, но и угнетает активность гиалуронидазы, активизирует в некоторой степени фибринолитические свойства крови и улучшает коронарный кровоток. Введение гепарина в организм сопровождается некоторым понижением содержания холестерина и β-липопротеидов в сыворотке крови [Клиническая биохимия. / Под ред. В.А.Ткачука. 2-е изд., испр. и доп. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. 512 с.].

Противосвертывающее действие гепарина осуществляется при его введении в вену, мышцы или под кожу. Гепарин действует быстро, но относительно кратковременно.

Гепарин применяют при профилактике и терапии различных тромбоэмболических заболеваний и их осложнений, например для предотвращения или ограничения тромбообразования при остром инфаркте миокарда, тромбозах и эмболиях магистральных вен и артерий, сосудов мозга и глаз.

Однако ему присущ ряд отрицательных свойств, таких как тромбоцитопения и аллергические реакции немедленного типа (крапивница, ангионевротический отек или бронхоспазм). После введения гепарина наблюдается значительное замедление времени рекальцификации плазмы, понижение толерантности и удлинение тромбинового времени. Применяя гепарин необходимо учитывать возможность развития геморрагии. Для предупреждения осложнений препарат вводят только в условиях стационара, ограничивая количество инъекций других лекарств.

Кроме гепарина в последнее десятилетие в медицине вновь стали использоваться антикоагулянтные препараты на основе биологически активных веществ, выделенных из пиявок, и в первую очередь препарат гирудин. Препарат был впервые получен из слюнных желез пиявок Hirudo medicinalis. Относительная эффективность гирудина наиболее выражена в первые сутки и со временем нивелируется. Гирудин в оптимальной дозе не увеличивает существенно риск тяжелых геморрагических осложнений. К недостаткам гирудина следует отнести иммуногенность и преимущественно почечную экскрецию [Warkentin Т.Е. Bivalent direct thrombin inhibitors: hirudin and bivalirudin // Best Practice Res. Clinic. Haemat. 2004. V.17. P.105-125]. [Заявка на выдачу патента РФ №96119944, А61К 38/58, опубл. 1999.02.20].

Известны антикоагулянтные средства животного происхождения, представляющие собой фрагмент коллагена с мол. м. около 12 кДа, содержащий 10,0-12,0% углеводов, 6,0-7,5% сульфатных групп, микро- и макроэлементы. [пат. РФ №2302250, А61К 35/56, опубл. 2007.07.10.]

Известно также применение известного пептида "Семакс" формулы Met-Gly-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве антитромботического, антикоагулянтного средства для внутривенного и внутрибрюшинного введения [пат. РФ №2286168, А61К 38/08, опубл. 2006.10.27, пат. РФ №2290194, А61К 38/08, опубл. 2006.12.27].

Указанные средства обеспечивают расширение спектра веществ иного механизма антикоагулянтного действия, чем механизм действия гепарина, однако способ получения их сложен и длителен, и, кроме того, антитромбоцитарное и антикоагулянтное действие их недостаточно.

Гепарин часто используют в сочетании с ферментными фибринолитическими препаратами.

Так, например, известно антитромботическое средство комплекса высокомолекулярного гепарина с протеолитическим ферментом тромбином. Средство обладает антикоагулянтными и тромболитическими свойствами, но препарат эффективен лишь при внутривенном и внутримышечном введениях, небольшая длительность действия препарата (1,5-2,0 ч) и наличие побочных эффектов не позволяет его широко использовать в медицинской практике [Ж. "Биохимия животных и человека", "Неферментативный фибринолиз". Ляпина Л.А. и др. Киев, 1982, №6,с.64-73].

Известна также терапевтическая композиция, обладающая антикоагулянтной активностью, на основе комплексов гепарина с веществами, усиливающими антикоагулянтное действие, в частности с аминокислотами, такими как аспарагиновая, глутаминовая, антраниловая, р-аминобензойная, а также с глицином, глутамином, валином и β-аланином.

К недостаткам известной композиции следует отнести отсутствие фибринолитических и тромболитических свойств получаемых продуктов [пат. США №3577534, кл. С08В 37/10, опубл. 1971.05.04].

Известен тромболитический комплекс гепарина с ферментом трипсином, взятом в соотношении 1:6. Однако использование трипсина придает полученному продукту токсичные протеолитические свойства. Более того, получаемый препарат активен только при внутривенном или внутримышечном введении [Mansfeld V., Hladovec J. Studien über Reactionen des Kristallisierten Trypsins. II. Beziehung zwischen der Aktivität des Heparins und Trypsins. - "Collection of Czechoslovak chemical commmiication", 1957, т.21, №5, c.1209].

В качестве прототипа выбрано антитромботическое средство, включающее пептид "Семакс" и гепарин, описанный в пат. РФ №2138269, А61К 31/725, опубл. 1999.09.27, как наиболее близкое к заявляемому средству по фармакологическому действию. Наименование пептида "Семакс" утверждено решением Фармакологического комитета МЗ РФ от 11.11.93 г.

Семакс - синтетический аналог адренокортикотропного гормона, обладающий ноотропными свойствами и лишенный гормональной активности. Обладает избирательным действием на центральную нервную систему, являясь стимулятором умственной работоспособности. Препарат влияет на процессы, связанные с формированием памяти и обучением. Семакс усиливает избирательное внимание и обучение при анализе информации, улучшает запоминание. В условиях нервно- психического утомления препарат облегчает концентрацию внимания, улучшает операторскую деятельность, способствует сохранению и ускоряет восстановление умственной работоспособности.

Указанное средство получают смешением компонентов в весовом соотношении 1:1, инкубируют полученную смесь при 36,5-37,5°С в течение 50-60 мин при pH 3.0-4.0, осаждают продукт центрифугированием с последующим высушиванием. Препарат обладает антитромботическим действием при его многократном интраназальном введении (крысам и другим животным).

Недостатком указанного средства является его невысокое антитромбоцитарное и антикоагулянтное действие, обусловленное в основном интраназальным способом его введения, и недостаточная длительность действия препарата.

Все вышеизложенное позволяет сделать вывод, что поиск новых эффективных и безопасных антикоагулянтов остается до настоящего времени чрезвычайно актуальным.

В основу настоящего изобретения положена задача создания средства, обладающего антикоагулянтным, фибринолитическим (суммарным и неферментативным) и антитромбоцитарным длительным действием при его пероральном применении.

Поставленная задача достигается созданием композиции на основе высокомолекулярного гепарина, для перорального применения дополнительно включающая рыбное масло Эйконол в виде его 25-45% раствора в пищевом растительном масле, при этом содержание гепарина в композиции 80-120 ME антитромбиновой активности высокомолекулярного гепарина на 1 мл Эйконола.

Обычно используют жидкий высокомолекулярный гепарин в объемном соотношении Эйконол:гепарин, равном 1:0,018-0,022, или сухой высокомолекулярный гепарин в количестве 0,8-1,2 вес.ч. на 1 об.ч. Эйконола.

Целесообразно использовать рафинированное пищевое масло, например кукурузное.

Поставленная задача решается также применением композиции на основе гепарина, дополнительно включающей рыбное масло Эйконол в виде его 25-45% раствора в пищевом растительном масле в качестве антикоагулянтного, антитромбоцитарного, фибринолитического, фибриндеполимеризационного средства, для перорального введения

В настоящих исследованиях использовали препарат "Эйконол" фирмы «Тринита» и высокомолекулярный гепарин как отечественного, так и иностранного производства фирмы "Синтилейт."

Масло пищевое «Эйконол», вырабатываемое согласно ТУ 400 СП «А» - 1145-1-18-92 из тканей пелагических рыб, является продуктом, богатым незаменимыми полиненасыщенными кислотами семейства «Омега-3» с содержанием последних до 30%.

Эйконол рекомендуется для лечения поражений кожи и желудочно-кишечного тракта у детей [Патент №2090188, кл. А61К 31/20, А61К 35/60, опубл. 1997.09.20], лечения язвенной болезни желудка [Патент РФ №2120282, кл. А61К 31/20, А61К 35/60, опубл. 1998.10.20] и снижения в крови уровня общего холестерина и триглицеридов [Патент №2055590, кл. А61К 35/60, опубл. 1996.03.10].

Для получения композиции исходный коммерческий препарат Эйконола (Э) разбавляют рафинированным кукурузным маслом до концентрации 25-45% и смешивают с 80-120 ME гепарина (Г), периодически, через каждые 30 мин, перемешивают в течение 1-2-х часов при комнатной температуре.

Эксперимент проводили следующим образом.

Использовано 55 самцов белых лабораторных крыс с массой тела 200-230 г. Первая группа крыс получала в течение 4-х дней перорально Э по 0.05 мл ежедневно через каждые 24 ч, а вторая подобным образом Э+Г. Взятие крови на анализ осуществляли через 1 ч после последнего введения препаратов.

В образцах крови определяли антикоагулянтную активность по тесту активированного частичного тромбопластинового времения (АЧТВ), суммарную (СФА) и неферментативную (НФ) фибринолитическую активность и агрегацию тромбоцитов (по тесту определения неферментативного фибринолиза в присутствии блокаторов ферментативного фибринолиза) и антитромбоцитарную активность по снижению агрегации тромбоцитов от контрольного уровня.

Следующие материалы иллюстрируют изобретение.

Пример 1

100 ME раствора гепарина и 1 мл разбавленного кукурузным маслом в 2,2 раза Эйконола смешивают, смесь инкубируют при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 120 мин, далее оставляют в холодильнике при +4-6°С до применения.

Полученная композиция при пероральном введении крысам весом 200 г в дозе 0,05 мл (5 ME гепарина) обнаруживает в плазме крови 133% фибриндеполимеризационной (неферментативной фибринолитической) активности, 140% суммарной фибринолитической активности, 127,5% антикоагулянтной активности и антитромбоцитарный эффект, т.е снижение агрегации тромбоцитов на 24%. Один Эйконол при пероральном применении обладал умеренной суммарной (112%) и неферментативной (116%) фибринолитической активностью. В данных условиях эксперимента Эйконол не проявлял антикоагулянтного и антиагрегационного в отношении тромбоцитов (т.е. антитромбоцитарного) действия.

Полученная композиция обладает максимальным суммарным и фибринолитическим эффектом, фибриндеполимеризационным действием, а также умеренным антикоагулянтным и антитромбоцитарным действием в кровотоке после его перорального введения животным.

Следует отметить, что комплекс Семакс-гепарин, указанный нами в качестве прототипа, в дозе 0,1 мг (включающей 5 ME гепарина) при пероральном применении крысам весом 200 г неактивен, т.е. не повышает ни антикоагулянтной, ни фибринолитической, ни фибриндеполимеризационной, ни антитромбоцитарной активности плазмы крови животных.

Для сравнения приведены примеры 2 и 3 с уменьшенной и увеличенной дозой гепарина в композиции.

Пример 2

Смешивают 10 ME раствора гепарина и 1 мл разбавленного кукурузным маслом в 2,2 раза Э, смесь инкубируют при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 120 мин, далее оставляют в холодильнике при +4-6°С.

Полученная композиция (доза гепарина в 10 раз меньше, чем в примере 1) при пероральном введении крысам весом 200 г в дозе 0,05 мл (0,5 ME гепарина) обнаруживает в плазме крови 116% фибриндеполимеризационной активности, 114% суммарной фибринолитической активности и не обнаруживает антикоагулянтной и антитромбоцитарной активности. Один Э при пероральном применении обладал умеренной суммарной (112%) и неферментативной (116%) фибринолитической активностью. В данных условиях эксперимента Э не проявлял антикоагулянтного и антиагрегационного в отношении тромбоцитов (антитромбоцитарного) действия.

Полученная композиция обладает слабым суммарным и неферментативным фибринолитическим эффектом и не обладает антикоагулянтным и антитромбоцитарным действием в кровотоке после его перорального введения животным.

Для сравнения - комплекс Семакс-гепарин в дозе 0,01 мг, содержащей 0,5 ME гепарина, при пероральном введении крысам весом 200 г не изменяет параметров гемостаза и не обладает антикоагулянтной, фибринолитической, фибриндеполимеризационной и антитромбоцитарной активностью в плазме крови крыс.

Пример 3

Смешивают 500 ME раствора гепарина и 1 мл разбавленного кукурузным маслом в 4,5 раза Э. Смесь инкубируют при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 120 мин, далее оставляют в холодильнике при +4-6°С.

Полученная композиция при пероральном введении крысам весом 200 г в дозе 0,05 мл (25 ME гепарина) обнаруживает в плазме крови 150% антикоагулянтной активности, но не обнаруживает в плазме крови фибриндеполимеризационной активности, суммарной фибринолитической и антитромбоцитарной активности. Один Э при пероральном применении обладал умеренной суммарной (112%) и неферментативной (116%) фибринолитической активностью. В данных условиях эксперимента Э не проявлял антикоагулянтного и антиагрегационного в отношении тромбоцитов (антитромбоцитарного) действия.

Следовательно, полученная композиция (доза гепарина в 5 раз выше, чем в примере 1) обладает высоким антикоагулянтным действием, но не обладает суммарным и неферментативным фибринолитическим и антитромбоцитарным действием в кровотоке после его перорального введения животным.

Для сравнения - комплекс Семакс-гепарин в дозе 0,5 мг, содержащий, как и в предлагаемом способе, 25 ME гепарина, при пероральном введении животным весом 200 г не выявлял никаких изменений в плазме крови.

Полученные данные и данные сравнения показателей плазменного и тромбоцитарного гемостаза после перорального введения животным одного эйконола (Э) и смеси эйконола с гепарином (Э+Г) (М±m), комплекса Семакс-гепарин приведены в таблице.

Таким образом, композция Эйконола с гепарином обладает in vitro и in vivo антикоагулянтной, фибринолитической, антитромбоцитарной, высокой фибриндеполимеризационной активностью даже в присутствии блокаторов ферментативного фибринолиза (эпсилон-аминокапроновой кислоты, ингибитора трипсина из соевых бобов). В организме целевой продукт способен предупреждать и снижать уровень тромбообразования при пероральном применении. При пероральном введении Э+Г установлена тенденция к повышению антикоагулянтной активности плазмы и к снижению агрегации тромбоцитов в крови животных при использовании в 5-10 раз меньших доз.

Композиция стабильна при хранении при +4-6°С, нетоксична при пероральном способе введения в организм, длительность действия препарата в организме до 4-5 ч. Способ получения его экономически выгоден.

Изобретение относится к фармакологии и медицине и касается антитромботической композиции на основе гепарина и ее применения в качестве антикоагулянтного, антитромбоцитарного, фибринолитического, фибриндеполяризационного средства при пероральном введении. Композиция содержит высокомолекулярный гепарин и дополнительно рыбное масло Эйконол в виде его 25-45% раствора в пищевом растительном масле в количестве, равном 1 мл Эйконола на 80-120 ME антитромбиновой активности высокомолекулярного гепарина. При использовании жидкого высокомолекулярного гепарина используют соотношение Эйконол: гепарин, равное 1:0,018-0,022 (по объему). При использовании сухого высокомолекулярного гепарина используют соотношение 0,8-1,2 вес.ч. на 1 об.ч. Для антитромботической композиции используют рафинированное пищевое масло, например кукурузное. Изобретение обеспечивает пероральное использование средства на основе гепарина. 2 н. и 4 з.п.ф-лы, 1 табл.

1. Антитромботическая композиция на основе высокомолекулярного гепарина, отличающаяся тем, что для перорального применения она дополнительно содержит рыбное масло Эйконол в виде его 25-45%-ного раствора в пищевом растительном масле в количестве, равном 1 мл Эйконола на 80-120 ME антитромбиновой активности высокомолекулярного гепарина.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что используют жидкий высокомолекулярный гепарин в соотношении Эйконол : гепарин, равном 1 : 0,018-0,022 (по объему).

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что используют сухой высокомолекулярный гепарин в соотношении 0,8-1,2 мг на 1 мл Эйконола.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что используют рафинированное пищевое масло.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве пищевого масла используют кукурузное масло.

6. Применение композиции по п.1 в качестве антикоагулянтного, антитромбоцитарного, фибринолитического, фибриндеполяризационного средства для перрорального введения.