СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПОНИЖЕННОЙ ГЕПАТОТОКСИЧНОСТЬЮ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/18 

Изобретение относится к области медицины. Может найти применение при создании новых препаратов, обладающих пониженной гепатотоксичностью.

Цитохром Р-450 представляет собой семейство изоферментов печени, которым принадлежит ключевая роль в метаболизме лекарственных препаратов и др. ксенобиотиков в организме человека и животных. Метаболические превращения лекарств с участием цитохрома Р-450 могут приводить как к детоксикации исходного препарата, так и к образованию токсичных и канцерогенных продуктов. Балланс процессов детоксикации и активации конкретного лекарственного препарата в организме человека зависит от каталитической активности отдельных изоформ цитохрома Р-450, принимающих участие в этих процессах. Наиболее яркий тому пример биотрансформация широко используемого анальгетика парацетамола (ацетаминофена). Известно, что в метаболизме этого лекарственного препарата в организме человека принимают участие главным образом 4 фермента. Это два фермента II фазы биотрансформации ксенобиотиков, сульфотрансфераза и УДФ-глюкуронозилтрансфераза, участвующие в биоинактивации парацетамола, и две изоформы цитохрома Р-450, цитохромы Р4501А1/2 и Р4502Е1, принимающие участие в активации парацетамола до гепатотоксичного продукта, N-ацетил-р-бензохинонимина. Очевидно, для того, чтобы снизить гепатотоксичность парацетамола для организма человека необходимо блокировать путь активации парацетамола на двух изоформах цитохрома Р-450. Эта задача может быть реализована при применении некоторых натуральных продуктов, входящих в состав плодов цитрусовых растений, в частности, D-лимонена, D-лимонен представляет собой составную часть масла плодов цитрусовых растений. Обнаружено, что применение этого вещества экспериментальным животным предотвращает развитие опухолевых процессов, индуцируемых химическими канцерогенами. Механизм биологического действия D-лимонена заключается в ингибировании активации проканцерогенов на цитохроме Р-450 и способности этого вещества увеличивать в организме уровень восстановленного глутатиона, участвующего, как известно, в конъюгации активных продуктов проканцерогенов. Более детальные исследования показали, что D-лимомен способен ингибировать не все изоформы цитохрома Р-450 печени, а только цитохромы Р4501А1/2 и Р4502Е1, т.е. именно те изоформы гемопротеина, которые принимают участие в биологической активации парацетамола до гепатотоксического продукта у человека. Т.о. совместное применение парацетамола и D-лимонена может существенным образом снизить гепатотоксические свойства анальгетика. Кроме парацетамола на цитохромах Р450А1А1/2 и Р4502Е1 активируются до активных гепатотоксичных продуктов такие лекарственные препараты, как фенацетин, кофеин, хлорзоксазон, теофиллин, хинолин, хиноксалин, антипирин, изониазид, галотан и др. а также некоторые канцерогены (галогенировання полиароматика, полициклические ароматические углеводороды, нитрозосоединения), органические растворители (четыреххлористый углеводород, бензол, толуол, ацетон, анилин, стирен), спирты (этанол, пропанол, бутанол, пентанол). Гепатотоксическое действие всех этих соединений может быть блокировано D-лимоненом.

Применение D-лимонена in vivo мышам описано в работе Reicks M.M. Crankshaw D. Xenobiotica, 1993, 23, 809-819. В этой работе показано, что хроническое применение D-лимонена животным (1,0% от диеты в течение 10 дней) приводит к существенном ингибированию цитохромов Р4502Е1 и Р4501П1 печени без существенного изменения активностей цитохромов Р4502В1/2. Кроме этого хроническое применение D-лимонена приводит к заметному (примерно на 40% от контрольных значений) увеличению уровня восстановленного глутатиона печени, а также увеличивает цитозольную активность глутатион-S-трансферазы (в 2 раза от контрольного уровня).

Наиболее близким к предлагаемому препарату следует рассматривать совместное применение фенацетина и кофеина в лекарственной форме цитрамон (Машковский М.Д. Лекарственные средства, т.1, стр.192, 1984). Известно, что в организме человека из фенацетина образуется парацетамол, который затем подвергается дальнейшему метаболизму, как описано выше (4). Обнаружено, что кофеин способен ингибировать метаболическую активацию парацетамола с участием цитохромов Р4501А1/2 и Р4502Е1. Многочисленные экспериментальные данные и клинические исследования свидетельствуют о том, что гепатотоксические свойства фенацетина значительно снижены при совместном применении этого лекарственного препарата с кофеином.

Предпосылками создания предлагаемого препарата явились исследования о влиянии различных флавонойдов на активность изоформ цитохрома Р-450. Известно, что для эффективного катализа необходимо функциональное взаимодействие молекулы цитохрома Р-450 с флавопротеином, НАДФ-цитохромом Р-450 редуктазой. Это взаимодействие осуществляется в липидном бислое микросомальной мембраны. Некоторые соединения, например, ионы Mg²⁺, способны влиять на этот процесс, тем самым изменяя скорость электронного транспорта с флавопротеина на гемопротеин, и, если этот участок монооксигеназного цикла скорость-лимитирующий, и монооксигеназные активности. По всей видимости, этот механизм действия свойственен флавонойдам, хотя прямого экспериментального подтверждения этому не найдено. Обнаружено, что многие флавонойды способны как понижать, так и увеличивать кажущиеся значения К_м при взаимодействии цитохрома Р-450 с редуктазой в реконструированной системе. Поэтому некоторые из этих соединений выступают ингибиторами, а некоторые активаторами зависимых от цитохрома Р-450 монооксигеназных реакций. Интересно отметить, что одни и тот же флавон, например, 7,8-бензофлавон, способен в зависимости от изоформы цитохрома Р-450, как активировать, так и ингибировать окислительный метаболизм. Любопытен эффект, который оказывает сок грейпфрута на зависимый от цитохрома Р450111А4 окислительный метаболизм нифедипина у человека in vivo. Оказалось, что применение примерно стакана этого сока существенным образом блокирует окисление этого лекарства, замедляя его общий клиренс более чем в 2 раза. Выяснилось, что действующим началом в соке грейпфрута является флавонойд нарингенин. Эффект наренгенина на окислительный метаболизм нифедипина был подтвержден in vitro. Оказалось, что в микросомах печени человека это соединение значительно ингибирует метаболизм нифедипина и его производного фелодипина. Авторы работы рассматривают некоторые цитрусовые как средство предотвращения риска возникновения злокачественных новообразований, индуцируемых активирующимися на цитохроме Р450111А4 канцерогенами. По-видимому схожий с флавонойдами механизм действия на монооксигеназные реакции характерен и для некоторых искусственных стероидных гормонов, в частности, для бетаметазона, и хинонов, таких, например, как менадион.

Т. о. техническим результатом предложения является снижение гепатотоксичности лекарственных препаратов, метаболизирующихся на цитохромах Р4501А1/2 и Р4502Е1 печени человека до активных метаболитов.

Реализация предложения.

Больной принимает п/о 500 мг парацетамола или 500 мг фенацетина или 100 мг кофеина и 0,5-5 г D-лимонена. Дальнейшее применение препаратов по показаниям.

Основные результаты исследования представлены в табл.1, 2, 3. Эксперименты проводились на практически здоровых добровольцах (от 20 до 56 лет мужского и женского пола). При экспериментальном исследовании дозы парацетамола, фенацетина, кофеина и D-лимонена были повышены до 4, 3, 0,7 и 10 г, соответственно. Добровольцы получали вышеуказанные препараты двукратно с интервалом в 24 часа. Критериями оценки гепатотоксичности служили: 1) биохимический анализ крови (ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ, ЩФ, ЛДГ), 2) уровень восстановленного глутатиона в крови. Анализ крови проводили спустя сутки после последнего применения парацетамола и D-лимонена.

Пример 1. Доброволец А.Т. получал парацетамол в количестве 4 г двухкратно с интервалом в 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения парацетамола активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ и ЩФ составляли, соответственно, 48, 36, 47, 20 и 139 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,44 моль/моль Hb.

Пример 2. Доброволец Р.М. получал парацетамол (4 г) в смеси с D-лимоненом (10 г) двухкратно с интервалом 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения парацетамола и D-лимонена активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ и ЩФ составляли, соответственно, 15, 12, 41, 6 и 70 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,93 моль/моль Hb.

Пример 3. Доброволец И.В. получал фенацетин в количестве 3 г двухкратно с интервалом в 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения фенацетина активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТи ЩФ составляли соответственно, 47, 35, 49, 21 и 136 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,24 моль/моль Hb.

Пример 4. Доброволец В.М. получал фенацетин (3 г) в смеси с D-лимоненом (10 г) двухкратно с интервалом 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения фенацетина и D-лимонена активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ и ЩФ составляли, соответственно, 20, 25, 29, 10 и 67 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,45 моль/моль Hb.

Пример 5. Доброволец А.В. получал кофеин в количестве 0,7 г двухкратно с интервалом в 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения кофеина активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ и ЩФ составляли, соответственно, 41, 38, 44, 22 и 140 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,55 моль/моль Hb.

Пример 6. Доброволец В.И. получал кофеин (0,7 г) в смеси с D-лимоненом (10 г) двухкратно с интервалом 24 часа. Обнаружено, что спустя сутки после последнего применения кофеина и D-лимонена активности ГОТ, ГПТ, гамма-ГТ и ЩФ составляло, соответственно, 11, 14, 23, 13 и 75 Ед/л. Содержание восстановленного глутатиона в крови составляло 0,66 моль/моль Hb.

Таким образом, исследования показали, что совместное применение D-лимонена с парацетамолом, или фенацитином, или кофеином значительно снижает гепатотоксические свойства препарата.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение при создании новых препаратов, обладающих пониженной гепатотоксичностью. Сущность способа: смешивают лекарственный препарат, метаболизирующийся на цитохромах Р4501А1 и Р4502Е1 печени человека до активных метаболитов. В качестве протектора используют Д-лимонен. Указанные компоненты берут при весовом соотношении в мг (50-5000):(100-5000( соответственно. Причем с Д-лимоненом смешивают или парацетамол, или кофеин, или фенацитин. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ получения препарата, обладающего пониженной гепатоксичностью, предусматривающий смешивание лекарственного средства с протектором, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства используют препарат, метаболизирующий на цитохромах Р4501А1/2 и Р4502Е1 печени человека до активных метаболитов, а в качестве протектора D-лимонен, причем берут их при массовом соотношении (мг) 50 5000 100 5000 соответственно. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве лекарственного препарата используют парацетамол, кофеин, фенацетин.