ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS EQUI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ МЫТА ЛОШАДЕЙ Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 A61K39/09 C12N1/20 C12R1/46 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и представляет собой штамм мытного стрептококка серологической группы C, используемый для изготовления вакцины против мыта и диагностической сыворотки.

Аналог изобретения штамм бактерий Streptococcus egui, используемый для изготовления профилактических препаратов против стрептококкоза лошадей (патент США N 4582798, C 12 N 1/20, 1986).

Штамм выделен от больного стрептококкозом поросенка и относится к серологической группе с, однако, данный штамм не пригоден для иммунизации лошадей и изготовления препаратов для диагностики мыта.

Штамм Streptococcus egui "Н-34", выделен из секрета абсцесса подчелюстного лимфатического узла большого мыта жеребенка. Штамм обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью и используется для изготовления вакцины против мыта и специфической диагностической сыворотки.

Штамм Streptococcus egui "Н-34" депонирован 6 декабря 1993 г. в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справка о депонирования штамма от 17 декабря 1993 г. N 988/27.

Штамм Streptococcus egui "Н-34" получен из секрета абсцесса подчелюстного лимфатического узла больного мытом жеребенка в ОПХ "Покровское" Республика Саха (Якутия) в 1992 г.

Штамм характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки. При микроскопии мазков гноя абсцессов и суточной бульонной культуры, окрашенных по грамму, представляет собой граммположительные кокки диаметром 0,7 0,8 мм, расположенные длинными цепочками. В препаратах из бульонных культур выявляется, исчезающая при старении культур. В мазках из плотных питательных сред (МПА) стрептококки располагаются парами, иногда короткими цепочками.

Культурные свойства. Штамм хорошо растет на питательных средах, используемых для культивирования стрептококков серологической группы C, например в мясопептонном бульоне и на мясопептонном агаре, содержащих 10% сыворотки крови лошади и 1% глюкозы при pH 7,4 7,6.

На жидкой питательной среде характерен придонный рост с образованием небольшого осадка. На мясопептонном агаре штамм растет в виде мелких росинчатых слизистых колоний белого цвета. На кровяном агаре (мясопептонный агар с 5% дефибрированной крови лошади) формирует сливающиеся в виде длинных тяжей колоний вязкой консистенции с блестящей сочной поверхностью, окруженных зоной гемолиза сочной поверхностью, окруженных зоной гемолиза, характеризующегося образованием вокруг колоний зоны просветления.

Штамм сохраняется в лиофилизированном виде при температуре 4 6^oC, в течение 1 г. Нативная культура поддерживается на мясопептонном бульоне с сывороткой и глюкозой в течение 10 сут.

Ферментативные свойства. Штамм ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, мальтозу и сахарозу. Не расщепляет маннит, сорбит, дульцит, раффинозу и арабинозу.

Вирулентные свойства. ЛД₅₀ для белых мышей составляет 0,2^o10⁸ микробных клеток.

Антигенные свойства. Штамм преципитируется специфической стрептококковой сывороткой серогруппы C.

Антигенная активность. Титр антител у кроликов, иммунизированных штаммом "Н-34", составил 1:64, что в два раза выше по сравнению с эталонным штаммом
(штамм N 25).

Иммуногенную активность определяли по эффективности вакцины, приготовленной из штамма "Н-34" в хозяйстве, неблагополучном по мыту лошадей, вызываемому мытным стрептококком. Заболеваемость мытом среди жеребят иммунизированных вакциной из штамма "Н-34" составляет 18,5% что на 61,5% ниже, чем у невакцинированных.

Пример 1. Штамм Str. egui "Н-34" серогруппы C выращивают в мясопептонном бульоне, содержащем 10% сыворотки крови лошади и 1% глюкозы до накопления 3 млрд. микробных клеток в 1 мл. Бактериальную массу инактивируют формалином в течение 72 ч, затем добавляют 3%-ный раствор гидроокиси алюминия из расчета 10% к объему культуры. Через 3 сут после внесения адъюванта вакцину расфасовывают во флаконы и контролируют на безвредность, стерильность и активность.

При введении жеребятам полученной вакцины заболеваемость снижается до 61,5% по сравнению с невакцинированными животными.

Пример 2. Штаммы мытного стрептококков N 25 и "Н-34" используют для приготовления диагностических препаратов.

Штаммы стрептококков выращивают в мясопептонном бульоне, содержащим 10% сыворотки крови лошадей и 1% глюкозы при температуре 37 38^oC в течение 18 24 часов, центрифугируют и дважды отмывают в растворе хлористого натрия (0,85% ). Полученную взвесь прогревают в водяной бане при 56 58^oC в течение 45 мин, центрифугируют, к осадку добавляют 0,25-ный раствор пепсина и оставляют 4 ч при 37^oC. Затем pH добавляют до 7,0 путем добавления IN - раствора едкого натрия, трижды отмывают физиологическим раствором и готовят навесь, содержащий 2•10⁹ микробных тел в 1 мл.

Каждым антигеном иммунизируют по четыре кроликов. Антиген вводят внутривенно в течение 8 недель. В процессе иммунизации каждому кролику дают 24 инъекций и вводят 40 млрд. микробных клеток. Средний титр полученных сывороток в реакции преципитации следующий: сыворотка N 25 1:32, сыворотка "Н-34"
1:64.

Таким образом, результаты проверки показали, что диагностическая сыворотка к штамму "Н-34" обладает более высокой активностью по сравнению с сывороткой к штамму N25.

Штамм Str.egui "Н-34" депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер Str. egui "Н-34-ДЕП". Дата депонирования 6 декабря 1993 г. Место хранения штамма Якутский НИИ сельского хозяйства НПО "Якутское" (677891, г. Якутск, 7, ул Каландарашвили, 5).

Использование: микробиология, биотехнология, диагностические и профилактические препараты против мыта лошадей. Сущность изобретения: предлагается штамм бактерий Strertococcus egui N H-34. Штамм депонирования в коллекции микроорганизмов ВГНКИ под N Н-34-ДЕП. Штамм относится к серологической группе C и используется для изготовления вакцины против мыта и диагностической стрептококковой сыворотки.

Штамм бактерий Streptococcus equi ВГНКИ N Н-34-ДЕП, используемый для изготовления диагностических и профилактических препаратов против мыта лошадей.