СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/14 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для предупреждения и лечения ряда заболеваний бактериальной и вирусной природы.

Препараты иммуноглобулина человека, применяемые в настоящее время, получили высокую оценку в практике борьбы с рядом заболеваний. Однако препараты иммуноглобулина, получаемые по методу Кона, содержат, в основном, IgG-иммуноглобулины, иммуноглобулины других классов удаляются с балластными фракциями в процессе производства. Как известно, антибактериальные антитела относятся, в основном, к фракциям IgM и удаляются из препаратов в ходе фракционирования.

Применение обычных препаратов гамма-глобулина недостаточно эффективно при ряде инфекций у новорожденных и детей первых месяцев жизни, кровь которых отличается низким содержанием иммуноглобулинов классов М и А.

В настоящее время в мире выпускаются и применяются в клинике препараты, обогащенные IgM и IgA, для профилактики и лечения тяжелых бактериальных инфекций, сепсиса, иммунодефицитных заболеваний.

Известен способ получения комплексного иммуноглобулинового препарата /КИП/ из спиртового осадка Б /III фракции Кона/, являющегося балластной фракцией при спиртовом фракционировании сыворотки /патент СССР N 836831, 1991/.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения иммуноглобулинового препарата /Экспериментально-производственный регламент N 338-91. Иммуноглобулин человека сухой для энтерального применения. 1991/, который предусматривает солевую экстракцию осадка Б /III фракции Кона/ в 0,9%-ном растворе хлорида натрия /в десятикратном объеме/, обработку экстракта с целью удаления липопротеидов и последующее осаждение фракции иммуноглобулинов полиэтиленгликолем /конечная концентрация 12% /. Препарат, полученный по этому способу, содержит 50% IgG и по 25% IgM и IgA; в нем обнаружены повышенные титры антител против ряда энтеробактерий, вирусов. Комитет МИБП 27 декабря 1990 г. /протокол N 14/ рекомендовал МЗ РФ внедрение КИП для орального применения в практику здравоохранения для лечения острых кишечных инфекций у детей.

Недостатком способа является то, что он не позволяет в достаточной мере очистить конечный продукт от иммунологически неактивных примесей, снижающих специфическую активность препарата и вызывающих аллергизацию организма. Содержание белковых балластных фракций составляет 3-5% Кроме того, способ предусматривает применение дорогостоящего импортного реагента-декстренсульфата /схема 1/.

Целью настоящего изобретения является увеличение чистоты препарата, повышение его специфической активности и выхода.

Поставленная цель достигается тем, что экстракцию спиртового осадка Б /III фракции Кона/ проводят в десятикратном объеме дистиллированной воды, а для удаления фракции липопротеидов наряду с хлороформом используют хлорид натрия в конечной концентрации 0,9% по объему. При этом повышается чистота препарата по сравнению с прототипом. Специфическая активность повышается в 2-3 раза. Себестоимость конечного продукта снижается на 25% благодаря исключению из технологического цикла импортного реагента декстрансульфата /схема 2/.

Пример. К 1 кг осадка Б /III фракция Кона/ добавляют 10 л дистиллированной воды при постоянном перемешивании. После растворения объем экстракта 11 л, содержание белка 2,2%
К экстракту осадка Б добавляют 1 л хлороформа /10% по объему/. Смесь медленно перемешивают в течение 2 часов, затем добавляют 99 г хлорида натрия /до конечной концентрации 0,9%/, перемешивают в течение 10 минут и центрифугируют до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 8 л, содержание белка 1,2%
К 8 л экстракта для выделения фракции иммуноглобулинов добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля /м. м. 6 тыс./ до конечной концентрации 12% при постоянном перемешивании.

Осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и центрифугирования, промывают дистиллированной водой, подкисленной до pH 5, растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка 5-8% pH 7,2. После растворения осадка препарат центрифугируют для удаления нерастворимых примесей. К раствору после удаления добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора.

Объем полученного препарата составляет 800 мл. Специфическая активность в препарате увеличивается по сравнению с прототипом в 2-3 раза /табл. 1/.

Содержание иммунологически неактивных фракций, определяемых методом бумажного электрофореза, составляет 0-1% от общего содержания белка /в прототипе -3-5%/, т.е. повышается чистота препарата.

По сравнению с прототипом в 1,5 раза увеличивается выход конечного продукта. Если по способу, описанному в прототипе, выход составил 4 дозы из 1 л донорской сыворотки, то по заявляемому способу 6 доз.

Таким образом, высокоочищенный от иммунологически неактивных примесей комплексный иммуноглобулиновый препарат с повышенной специфической активностью получен экономически эффективным способом. При этом выход препарата увеличивается в 1,5 раза, а себестоимость его снижается по сравнению с прототипом на 25%
Осадок Б /III фракция Кона/
Растворение в дистиллированной воде; pH 5,5; 1 кг осадка Б + 10 л дистиллированной воды. Центрифугат: хлороформ 10% по объему; перемешивание - 2 часа, затем хлорид натрия 0,9% в смеси; осадок удаляют. Центрифугат: полиэтиленгликоль м.м. 6 тыс. конечная концентрация 12% осадок удаляют.

Осадок
Растворение в 0,15 М NaCl; pH 7,2; глюкоза 2% осветляющая и стерилизующая фильтрация; лиофилизация; центрифугат удаляют.

КИП
IgG 50% IgM 25% IgA 25%
Схема 1. Получение комплексного иммуноглобулинового препарата /КИП/ - заявляемый способ
Осадок (III фракция Кона)
Растворение в 0,15 М NaCl; pH 5,5; 1 кг осадка Б + 10 л 0,9%-ного раствора натрия. Центрифугат: хлороформ 10% по объему; перемешивание 2 часа; декстрансульфат 0,1% в смеси; осадок удаляют. Центрифугат: полиэтиленгликоль м.м. 6 тыс. конечная концентрация 12% осадок удаляют.

Осадок
Растворение в 0,15 М NaCl; pH 7,2; глюкоза 2% осветляющая и стерилизующая фильтрация; лиофилизация; центрифугат удаляютю
КИП
IgG 50% IgM 25% IgA 25%
Схема 2. Получение комплексного иммуноглобулинового препарата /КИП/ - прототип.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для предупреждения и лечения ряда заболеваний бактериальной и вирусной природы. Цель изобретения - повышение чистоты препарата, его специфической активности и выхода. Поставленная цель достигается тем, что экстракцию спиртового осадка Б (III фракции Кона) проводят в десятикратном объеме дистиллированной воды, а для удаления фракции липопротеидов наряду с хлороформом используют хлорид натрия в конечной концентрации 0,9% по объему. Осаждение из экстракта иммуноглобулиновой фракции проводят в присутствии 12% полиэтиленгликоля. При этом повышается чистота препарата по сравнению с прототипом (в заявляемом способе содержание балластных примесей в препарате составляет 0-1% от общего белка, в прототипе - 3-5%). Специфическая активность повышается в 2-3 раза, а выход препарата - в 1,5 раза. Себестоимость конечного продукта снижается по сравнению с прототипом на 25%. 1 табл.

Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний путем экстракции спиртового осадка Б (III фракции Кона), очистки его от липопротеидов с последующим выделением целевого продукта осаждением в присутствии 12% полиэтиленгликоля, отличающийся тем, что экстракцию спиртового осадка Б (III фракции Кона) проводят в десятикратном объеме дистиллированной воды, а для удаления фракции липопротеидов наряду с хлороформом используют хлорид натрия в конечной концентрации 0,9 об.