Способ получения иммуноглобулинового препарата Советский патент 1996 года по МПК A61K39/395 

о м

00 «Г)

«н 00

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний, в том числе ротавирусной инфекции. Цель изобретения - повышение антиротавирусной активности препарата. Спиртовой осадок Б (111 фракция Кона) экстрагируют в растворе хлористого натрия, с целью удаления липопротеидов обрабатываютхлороформом и декстрансульфатом. Осаждение из экстракта иммуноглобулиновой фракции проводят в присутствии 12% полиэтиленгликоля. Антиротавирусная активность препарата при этом увеличивается по сравнению с прототипом в 3 раза (в заявляемом препарате титр антнротавирусных антител 1 : 128000, в прототипе 1 : 32000). СЯ d 00 ц-k ел 00 ы о

р

и

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний, в том числе ротавирусной инфекции.

Целью изобретения является повышение антиротавирусной активности препарата.

С1тособ о,существляют следующим обра- зом Долевому экстракту осадка Б (III фрак- ци11 Кона)ддб авляюг хлороформ, затем д ек ЬТр ёнсул:ьфЭт. 3Дл 5 осаждения фракции иммуноглобулййов добавляют полиэтиленг- ликоль(ПЭГ) до конёчШй концентрации 12%.

П .р и м е р. 1 кг осадка Б экстрагируют в десятикратном объеме 0,9%-ного охлажденного раствора хлорида натрия при постоянном перемешивании. Затем смесь доводят до десятикратного объема, хорошо перемешивают и оставляют на ночь (18 ч) при температуре 4-б°С, рН смеси 5,5 ± 0,3. На следующий день смесь центрифугируют в течение 1 ч при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют, в полученном экстракте определяют содержание белка, которое равно 2%. Объем полученного экстракта составляет 10600мл. К экстракту осадка Б добавляют 10600 мл охлажденного до 4-6°С хлороформа (10% по объему). Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч при температуре 4-6°С. К Смеси экстракт с хлороформом добавляют 233 мл 5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%). Смесь энергично встряхивают в течение -5-ТО мин и центрифугируют при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем цен- трифугата составляет 8 л, содержание белка 0,4%. К 8 л экстракта для концентрирования иммуноглобулинов добавляют 50%-ный

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛО- БУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА из крови человека путем солевой экстракции спиртового осадка сыворотки крови, обработки его хлороформом и декстран- сульфатом с последующим выделением

раствор полиэтиленгликоля (6000 мм) до конечной концентрации 12% при постоянном перемешивании. Осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300-400 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5 ± 0,2, при температуре 0-2°С

, Осадок иммуноглобулинов растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка около 5-6%, ,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин на

центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей.

К раствору после центрифугирования добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора. После

стерилизующей фильтрации через миллипо- ровые фильтры 0,2 препарат разливают по ампулам и лиофилизируют. Хранят в сухом темном месте при температуре (6-4°)С, Срок хранения 3 г. После растворения осадка иммуноглобулинов в готовом препарате определяют титры антител к ротавирусу и количественное содержание различных классов иммуноглобулинов. Титры антител против ротавируса, определяемые методом

иммуноферментного анализа (ИФА), составляли в иммуноглобулин (IgM 1 64000), IgG 64000, (IgM+IgG) суммарная активность 1:128000, т.е. антиротавирусная активность в заявляемом препарате в 3 раза выше, чем

в прототипе (в прототипе суммарная активность 1:32000). Состав препарата: IgG 68%, lgM17%,lgA15%.

Количество иммунологически неактив- ных примесей составляет не более 3-5%,

что регламентировано НТД на иммуноглобулин.

45

50

целевого продукта осаждением в присутствии полиэтиленгликоля, отлмаю- щийся тем, что, с целью повышения антиротавирусной активности целевого продукта, осаждение фракции иммуноглобулинов проводят в присутствии 12%- ного раствора полиэтиленгликоля.