СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1995 года по МПК A61K39/395 

Описание патента на изобретение RU2051054C1

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса (ВПГ).

Актуальность изобретения обуславливается резким увеличением в настоящее время числа заболеваний, вызываемых ВПГ, что связано в значительной степени с ухудшающейся экологической обстановкой, а также с все более широким применением иммуносупрессивной терапии.

Одним из перспективных подходов при профилактике и лечении герпесвирусных инфекций является применение препаратов иммуноглобулинов человека.

К настоящему моменту установлено, что вирусспецифические антитела играют существенную роль в патогенезе герпетических инфекций. Защитное действие герпесспецифических антител связывают как с их непосредственным участием в нейтрализации вирусных частиц, так и с активацией или комплемент-опосредованного лизиса и антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности в отношении инфицированных ВПГ-клеток.

В настоящее время выпуск препарата противогерпетического иммуноглобулина человека, как в отечественной медицинской промышленности, так и за рубежом не налажен.

Известен способ получения препарата цитомегаловирусного иммуноглобулина (U.S.Pat. No. 4.617, 379). Он предусматривает отбор плазмы нативных невакцинированных доноров с высокими титрами антител к цитомегаловирусу и ее последующее фракционирование по методу Cohn и Оncley с целью получения фракции II, представляющей собой гипериммунный цитомегаловирусный иммуноглобулин.

Однако данный способ получения препарата иммуноглобулина предусматривает использование дорогостоящего сырья плазмы крови доноров. Кроме того, образующийся при фракционировании плазмы осадок Б (фракция III Кона), является балластной фракцией и не утилизируется.

Целью настоящего изобретения является удешевление способа производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и утилизация отходов промышленного фракционирования плазмы крови человека.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного сырья для производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека используется осадок Б (фракция III Кона), образующийся при спиртовом фракционировании плазмы крови нативных невакцинированных доноров, имеющей исходно высокое содержание антител к ВПГ.

Проведенные нами исследования показали, что осадок Б содержит герпесспецифические антитела, причем их титры имеют практически те же значения, что и в плазме крови, что позволяет рассматривать осадок Б как доступное дешевое сырье для получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека. Преимущество использования данного источника сырья заключается также в том, что осадок Б обогащен 3 и 4 подклассами IgG. Это особенно важно, так как известно, что при рецидивирующей герпетической инфекции герпесспецифические антитела представлены в основном 1, 3 и 4 подклассами IgG.

Способ предусматривает обработку водного экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом, после чего проводится последовательное фракционирование раствором полиэтиленгликоля с молекулярной массой 4000 из рассчета 2-4% по объему и 5-7% по объему. Для осаждения фракции IgG добавляют полиэтиленгликоль до насыщения 12-14% по объему.

Способ поясняют следующим примером.

Приготовление экстракта из осадка Б.

1 кг осадка Б суспендируют в 30 л охлажденной апирогенной дистиллированной воды при постоянном перемешивании. рН смеси устанавливают 5,2-0,5. После отстаивания в течение 18 ч при t + 5oC смесь центрифугируют в течение 1 ч при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют, в полученном экстракте определяют содержание белка, которое равно 1% Объем полученного экстракта составляет 15900 мл.

Удаление балластных фракций путем обработки экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом.

К экстракту осадка Б добавляют 160 мл охлажденного до +5оС хлороформа (1% по объему). Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч при температуре +5оС. К смеси экстракта с хлороформом добавляют 328 мл 5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%). Смесь энергично встряхивают в течение 5-10 мин и центрифугируют при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 12 л, содержание белка 0,2%
Осаждение IgG полиэтиленгликолем (ПЭГ).

К 12 л экстракта добавляют ПЭГ (М.В.4000) из рассчета 2 г на 100 мл раствора при постоянном перемешивании. Через 2 ч осадок отделяют фильтрацией через миллипоровые фильтры μ= 0,45, а к супернатанту добавляют ПЭГ из расчета 6% по объему. Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч. Образовавшийся осадок удаляют путем фильтрации через миллипоровые фильтры μ= 0,45. рН супернатанта доводят до 8,0 6% тригидроксиэтиламинометаном.

Для осаждения IgG к супернатанту добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 13% при постоянном перемешивании.

Осадок IgG отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300-400 мл апирогенной дистиллированной воды, подкисленной до рН 5±0,2 при температуре от 0 до +2.

Растворение осадка IgG.

Осадок IgG растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка 10% рН 6,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей.

К раствору после центрифугирования добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора. После стерилизующей фильтрации через миллипоровые фильтры μ= 0,2 препарат разливают по ампулам и лиофилизируют. Хранят в сухом темном месте при температуре (6±4)оС. Срок хранения 3 года.

После растворения осадка IgG в готовом препарате определяют количественное содержание подклассов IgG и специфическую активность.

Распределение подклассов IgG определенное методом радиальной иммунодиффузии с использованием стандартов фирмы Nordic Immunological Laboratories", представлено в таблице.

Титр антител в препарате, определенный методом твердофазного иммуноферментного анализа, составляет 1: 256000, что позволяет использовать данный препарат в профилактических и лечебных целях при инфекциях, вызываемых ВПГ.

Количество иммунологически неактивных примесей составляет не более 2-3% что регламентировано НТД на иммуноглобулин.

Предлагаемый способ имеет преимущество, так как позволяет получить из балластной фракции III (осадок Б) препарат противогерпетического иммуноглобулина человека, состоящий на 97% из IgG.

Технико-экономическая эффективность.

Предлагаемый способ позволяет удешевить производство препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и использовать отходы промышленного фракционирования плазмы крови человека, так как он предполагает использование в качестве исходного сырья при производстве препарата осадка Б, являющегося балластной фракцией, образующейся при спиртовом фракционировании плазмы крови.

Похожие патенты RU2051054C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1994
  • Алешкин В.А.
  • Борисова И.В.
  • Быко-Янко Г.В.
RU2084229C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА 1993
  • Алешкин В.А.
  • Борисова И.В.
  • Новикова Л.И.
RU2073525C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА 1995
  • Волков А.В.
  • Алешкин В.А.
RU2111001C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА 2000
  • Зорик А.В.
  • Алешкин В.А.
  • Лютов А.Г.
  • Борисова И.В.
RU2189833C2
Способ получения иммуноглобулинового препарата 1990
  • Алешкин Владимир Андрианович
  • Борисова Ирина Валерьяновна
  • Холчев Николай Васильевич
  • Пономарева Александра Манковна
  • Быко-Янко Галина Владимировна
SU1815820A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ С1-ИНАКТИВАТОРА ЧЕЛОВЕКА 1992
  • Розина М.Н.
  • Алешкин В.А.
RU2068693C1
ПРЕПАРАТ ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1996
  • Алешкин В.А.
  • Лютов А.Г.
RU2122864C1
ИММУНОГЛОБУЛИНОВАЯ ОСНОВА ДЛЯ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ, СУППОЗИТОРИИ И МАЗЬ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 2007
  • Алешкин Владимир Андрианович
  • Афанасьев Станислав Степанович
  • Новикова Лидия Ивановна
  • Борисова Ирина Валериановна
  • Волков Александр Валерьянович
  • Зуева Марина Михайловна
  • Кострова Ольга Михайловна
RU2361612C1
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФРАГМЕНТА С3D КОМПОНЕНТА С3 КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА 1992
  • Матвеевская Н.С.
  • Алешкин В.А.
RU2068694C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ДИФТЕРИИ 1994
  • Алешкин В.А.
  • Борисова И.В.
  • Соколов А.Л.
RU2074725C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 051 054 C1

Реферат патента 1995 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса. Целью настоящего изобретения является удешевление способа производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и утилизация отходов промышленного фракционирования плазмы крови человека. Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного сырья для производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека используется осадок Б, образующийся при спиртовом фракционировании плазмы крови нативных невакционированных доноров, имеющей исходно высокое содержание антител к вирусу простого герпеса. Способ предусматривает обработку водного экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом, после чего проводится последовательное фракционирование полиэтиленгликолем с молекулярной массой 4000 из расчета 2 -4% и 5 -7% по объему. Для осаждения фракции JgG добавляют полиэтиленгликоль до насыщения 12 14% по объему. Способ позволяет удешевить производство препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и использовать отходы промышленного фракционирования человеческой плазмы, так как он позволяет получить из балластной фракции (осадок Б) препарат противогерпетического иммуноглобулина человека, состоящий на 97% из JgG. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 051 054 C1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА путем спиртовой обработки плазмы невацинированных доноров с высоким содержанием антител к вирусу простого герпеса последовательно 8-, 25- и 17%-ным раствором этилового спирта с последующим центрифугированием и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что после обработки раствором 17%-ного этилового спирта собирают осадок, разводят водой, инкубируют при перемешивании, центрифугируют, обрабатывают хлороформом и декстрансульфатом, снова центрифугируют и проводят поэтапное осаждение целевого продукта полиэтиленгликолем из расчета 2 4, 5 7, 12 14 об.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1995 года RU2051054C1

Патент США N 4617379, кл
Устройство для сортировки каменного угля 1921
  • Фоняков А.П.
SU61A1

RU 2 051 054 C1

Авторы

Кострова О.М.

Алешкин В.А.

Даты

1995-12-27Публикация

1992-04-14Подача