СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОХРОМА С В ПРЕПАРАТАХ, СОДЕРЖАЩИХ КОЛЛАГЕН Российский патент 1997 года по МПК G01N21/25 

Описание патента на изобретение RU2084869C1

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения цитохрома C в растворах, и может быть использовано для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтическими производствами.

Известен способ количественного определения содержания цитохрома C по восстановленной форме [1] включающий растворение лиофилизированного порошка цитохрома C в изотоническом растворе натрия хлорида с прибавлением к нему натрия гидросульфита и измерение в течение 30 секунд оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 550 нм, при этом в качестве раствора сравнения используют раствор натрия хлорида изотонический.

Содержание цитохрома C в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D550 оптическая плотность препарата;
12300 молекулярная масса цитохрома C (Да);
27700 молярный коэффициент экстинкции для восстановленной формы (моль-1 см-1);
m навеска препарата (г).

Однако описанный выше способ не позволяет точно измерить содержание цитохрома C в растворах, содержащих коллаген, в частности в цитоколе [3] В процессе хранения изменяются некоторые физико-химические параметры цитокола за счет коллагеновой основы препарата, которая при использовании общепринятой методики взаимодействует с гидросульфитом натрия, изменяя при этом оптическую плотность раствора. При добавлении к раствору цитокола натрия гидросульфита происходит постоянное сползание величины оптической плотности раствора, что приводит к получению недостоверных результатов.

Задача, на решение которой направлено изобретение, создание метода точного количественного определения цитохрома C в растворах по окисленной форме цитохрома C.

Сущность изобретения состоит в следующем. Для определения концентрации окисленной формы цитохрома C предлагаем использовать разность оптических плотностей при λ, равной 400 и 490 нм.

Использование длины волны 400 нм для определения концентрации окисленной формы цитохрома C дает значительно более высокий (в 3-5 раз) максимум поглощения, чем при длине волны 550 нм восстановленной формы. За счет этого резко возрастает чувствительность метода, что позволяет уловить более низкие концентрации цитохрома C и получить достоверные результаты.

Количественное определение цитохрома C в растворах препаратов определяют по произведению разности оптических плотностей, измеренных при длинах волн 400 и 490 нм на коэффициент экстинкции k 0,115, учитывая при этом степень разведения препарата.

Коэффициент экстинкции k 0,115 был получен расчетным путем.

Пример 1. Определение количественного содержания цитохрома C в цитоколе проводят следующим образом. Около 60 мг препарата (точная навеска) тщательно измельчают ножницами и растворяют в 20 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты на водяной бане при температуре не выше 80oC. После охлаждения раствор переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, и доводят объем раствора до метки. 4 мл раствора помещают в кювету с толщиной слоя 10 мм, и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 400 и 490 нм. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

Содержание цитохрома C в процентах вычисляют по формуле:

где C концентрация цитохрома C в цитоколе;
k коэффициент экстинкции;
D400 оптическая плотность раствора при длине волны 400 нм;
D490 оптическая плотность раствора при длине волны 490 нм;
P навеска препарата (мг);
100 коэффициент перевода в проценты;
V объем раствора (мл).

Воспроизводимость и точность метода определения цитохрома C в цитоколе проверялись на модельных растворах с известным содержанием цитохрома C, полученного путем выделения из сердечной мышцы крупного рогатого скота и ластоногих.

Данные анализа цитохрома C в цитоколе приведены в таблице N 1. Параллельно в указанных растворах готовых лекарственных форм (сериях препарата) проводилось определение цитохрома C по известному способу (1). Результаты определения также приведены в таблице N 1.

Пример N 2. Определение количественного содержания цитохрома C в таблетированных и лиофилизированных лекарственных формах проводят следующим образом. Около 50 мг препарата (точная навеска) растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 200 мл и доводят объем до метки. Раствор помещают в кювету с толщиной слоя 10 мм, и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 400 и 490 нм. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

Содержание цитохрома C в процентах вычисляют по формуле:

где C концентрация цитохрома C в лекарственной форме;
k коэффициент экстинкции;
D400 оптическая плотность раствора при длине волны 400 нм;
D490 оптическая плотность раствора при длине волны 490 нм;
P навеска препарата (мг);
100 коэффициент перевода в проценты;
V объем раствора (мл).

Пример N 3. Определение количественного содержания цитохрома C в жидких лекарственных формах проводят следующим образом. Препарат разводят в 40-50 раз дистиллированной водой (точное разведение). 4 мл раствора помещают в кювету с толщиной слоя 10 мм, и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 400 и 490 нм. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

Содержание цитохрома C в препарате в мг/мл вычисляют по формуле:
C k • (D400 D490) • n,
где C концентрация цитохрома C в лекарственной форме;
k коэффициент экстинкции;
D400 оптическая плотность раствора при длине волны 400 нм;
D490 оптическая плотность раствора при длине волны 490 нм;
n степень разведения препарата.

Результаты определения цитохрома C в растворах препаратов (жидких лекарственных форм) приведены в таблице N 2. В таблице N 2 представлены данные, полученные предлагаемым новым способом и общепринятым методом [2]
При сравнении метрологических характеристик результатов определения цитохрома C по изобретению и способу [1, 2] видно, что заявляемый способ имеет ряд преимуществ.

Общепринятый метод определения резко искажает значения концентраций цитохрома C в цитоколе, что связано с коллагеновой основой препарата. Таким образом, известный способ не применим для растворов с коллагеновой составляющей.

Разработанный новый способ определения цитохрома C в растворах препаратов позволяет получить результаты, соответствующие технологически заложенным концентрациям в лекарственных формах, что подтверждают данные представленные в таблицах N 1, 2.

Кроме того, разработанный способ позволяет исключить дополнительный реактив натрия гидросульфит, сократив тем самым время измерения, а также упростить процесс за счет стабильности величины оптической плотности растворов, что дает возможность работать независимо от временного интервала (30 секунд). Это позволяет подготовить и произвести измерение целой серии исследуемых растворов, что существенно повышает производительность труда.

При использовании новой длины волны значительно возрастает чувствительность метода, что позволяет уловить более низкие концентрации цитохрома C.

По общепринятому способу измерение проводили на одной длине волны, предлагаемый нами новый метод имеет существенное отличие и включает в себя измерение на двух длинах волн. Расчет концентраций цитохрома C по разнице оптических плотностей значительно повышает достоверность результатов, нивелируя ошибки определения и влияние различных составляющих раствора.

Метод дает стабильные и хорошо воспроизводимые результаты.

Источники информации
1. ФС 42-2534-88 на "Цитохром C лиофилизированный".

2. ФС 42-2533-88 на "Цитохром C для инъекций".

3. Заявка N 94-006811 от 22.02.94 г. на изобретение "Ранозаживляющее покрытие на основе полимера и фермента, губка "Цитокол", кл. A 61 K 37/00.

Похожие патенты RU2084869C1

название год авторы номер документа
ЛИПОСОМАЛЬНАЯ ВЕЗИКУЛА С ЦИТОХРОМОМ С 1994
  • Шанская А.И.
  • Криворучко Б.И.
  • Булушева Е.В.
  • Яковлева Т.Е.
  • Пучкова С.М.
  • Недачина Н.А.
  • Смирнов А.В.
  • Кашина Е.А.
RU2110990C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО АНТИГИПОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ 2001
  • Слепнева Л.В.
  • Хмылова Г.А.
  • Алексеева Н.Н.
  • Селиванов Е.А.
RU2189813C1
РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО ГУБКА ЦИТОТИМОКОЛ, ЕЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ (ВАРИАНТЫ) И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 1996
  • Сидорова Н.Д.
  • Селиванов Е.А.
  • Алексеева Н.Н.
  • Абоянц Р.А.
  • Слепнева Л.В.
  • Истранов Л.П.
  • Истранова Е.В.
  • Малинин В.В.
  • Буракова М.А.
RU2126693C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ 1994
  • Шанская А.И.
  • Булушева Е.В.
  • Яковлева Т.Е.
  • Недачина Н.А.
RU2071765C1
ФУМАРАТГИДРАТ ТРЕХВАЛЕНТНОГО ЖЕЛЕЗА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИИ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ 1997
  • Селиванов Е.А.
  • Слепнева Л.В.
  • Алексеева Н.Н.
  • Кацнельсон Е.З.
RU2161963C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ ЛИПОСОМ 1997
  • Шанская А.И.
  • Иванова Р.П.
  • Булушева Е.В.
  • Яковлева Т.Е.
  • Милицина Т.В.
RU2144352C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАКТИВА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВИРОВАННОГО ПАРЦИАЛЬНОГО ТРОМБОПЛАСТИНОВОГО ВРЕМЕНИ 1995
  • Старицына Н.Н.
  • Шанская А.И.
  • Папаян Л.П.
  • Хролова П.В.
  • Иванова Р.П.
RU2104551C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНСЕРВАНТА ДЛЯ ЭРИТРОЦИТОВ 1995
  • Селиванов Е.А.
  • Кривцова И.М.
  • Мельникова В.Н.
  • Плешаков В.Т.
  • Дегтерева И.Н.
RU2098959C1
ЛИПОСОМНАЯ ВЕЗИКУЛА 1993
  • Шанская А.И.
  • Яковлева Т.Е.
  • Булушева Е.В.
  • Недачина Н.А.
  • Пучкова С.М.
RU2084219C1
КРОВЕЗАМЕНИТЕЛЬ - ПЕРЕНОСЧИК КИСЛОРОДА, СОСТАВ ДЛЯ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНОГО МОДИФИЦИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА 1999
  • Кузнецова Н.П.
  • Гудкин Л.Р.
  • Селиванов Е.А.
  • Быстрова И.М.
  • Ханевич М.Д.
  • Мишаева Р.Н.
  • Панарин Е.Ф.
  • Гербут К.А.
  • Кочетыгов Н.И.
  • Гончаров А.В.
  • Молоковская И.Е.
  • Белов Е.В.
RU2162707C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 084 869 C1

Реферат патента 1997 года СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОХРОМА С В ПРЕПАРАТАХ, СОДЕРЖАЩИХ КОЛЛАГЕН

Использование: аналитическая химия, а именно спектрофотометрический способ количественного определения цитохрома C в препаратах, содержащих коллаген. Сущность: растворяют пробу, измеряют оптические плотности раствора при 400 и 490 нм. Рассчитывают разность оптических плотностей, и по ее величине судят о содержании цитохрома C в препарате. Количество цитохрома C в жидких лекарственных формах рассчитывают по произведению степени разведения препарата на разность оптических плотностей и на коэффициент экстинкции k, равный 0,115. Количество цитохрома C в твердых лекарственных формах определяют по произведению объема раствора на разность оптических плотностей и на коэффициент экстинкции k, равный 0,115. Способ характеризуется высокой чувствительностью и достоверностью определения. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Формула изобретения RU 2 084 869 C1

1. Способ количественного определения цитохрома C в препаратах, содержащих коллаген, включающий растворение анализируемой пробы в растворителе и измерение оптической плотности раствора, отличающийся тем, что оптическую плотность измеряют при 400 и 490 нм, рассчитывают разность оптических плотностей, по величине которой судят о содержании цитохрома C в препарате. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество цитохрома C для жидких лекарственных форм определяют по произведению степени разведения препарата на разность оптических плотностей при длинах волн 400 и 490 нм и на коэффициент экстинкции K, равный 0,115. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество цитохрома C для твердых лекарственных форм определяют по произведению объема раствора на разность оптических плотностей при длинах волн 400 и 490 нм и на коэффициент экстинкции K, равный 0,115.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1997 года RU2084869C1

Устройство для усиления микрофонного тока с применением самоиндукции 1920
  • Шенфер К.И.
SU42A1
Устройство для усиления микрофонного тока с применением самоиндукции 1920
  • Шенфер К.И.
SU42A1

RU 2 084 869 C1

Авторы

Селиванов Е.А.

Хмылова Г.А.

Беляева И.С.

Слепнева Л.В.

Сидорова Н.Д.

Даты

1997-07-20Публикация

1994-06-27Подача