ЛИПОСОМНАЯ ВЕЗИКУЛА Российский патент 1997 года по МПК A61K9/127 

Изобретение относится к медицине и фармакологии, и может быть использовано, например, для производства лекарственных препаратов.

Известны липосомные везикулы, в которых в качестве липидов используют лецитин и отрицательно заряженные кардиолипин или фосфатидилсерин (Авт. свид. N 1186212, кл. A 61 K 9/22). Фосфатидилсерин, входящий в состав оболочки этих липосомных везикул, выделяют из мозга крупного рогатого скота. При комнатной температуре фосфатидилсерин разлагается на 0,5% в день. Кардиолипин выделяют из сердец крупного рогатого скота.

Известны также липосомные везикулы, где в качестве отрицательно заряженных липидов используют яичную фосфатидную кислоту или дицетилфосфат (Заявка ЕПВ N 0119020, кл. A 61 K 9/50).

Яичные фосфолипиды легко окисляются, причем продукты их окисления обладают в ряде случаев токсичными свойствами. Фосфатидная кислота нестабильна при хранении, отличается тенденцией к образованию небислойных структур. Децитилфосфат имеет высокую температуру фазового перехода (74-75^oC), что требует повышения температуры при диспергировании фосфолипидов, а следовательно, может провоцировать окислительные процессы фосфолипидов.

Заявляемое изобретение решает задачу сохранения размера и структуры (без агрегации и слияния) и химической природы компонентов липосамальной везикулы.

Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что в липосомной везикуле, стабильной при хранении и содержащей оболочку из лецитина и отрицательно заряженного компонента, в качестве отрицательно заряженного компонента используется смесь кислых фосфолипидов, выделяемая из соевых фосфатидов как единый компонент.

Соевые фосфатиды наряду с нейтральными фракциями (фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин) содержат значительное количество кислых фосфолипидов: фосфатидную кислоту, фосфатидилинозит и фосфатидилсерин. При экстракции из обезжиренных соевых фосфатидов кислые фосфолипиды, имеющие отрицательный заряд, остаются в основном в спиртонерастворимой кефалиновой фракции, являющейся отходами производства лецитина. Из кефалиновой фракции выделяют смесь кислых фосфолипидов, обладающую следующими свойствами:
кислотное числом, мг КОН 55-56
содержание фосфора, 1,7-1,8
цветность, мг 12-13
перекисное число, 0,2-0,2
содержание диенов, 0,7-0,8
триенов, 0,1-0,2.

Для лучшего понимания изобретения приведен пример получения смеси кислых фосфолипидов.

Пример. 100 г кефалина не растворимого в спиртах отхода производства лецитина, высушенного от остатков спирта, растворили в 400 мл хлороформа и переосадили в 1000 мл этанола. Выпавший осадок отделили фильтрацией, растворили в 300 мл хлороформа и переосадили в 600 мл этанола. Осадок вновь отделили, растворили в 200 мл хлороформа и переосадили в 600 мл этанола. Осадок отделили фильтрацией, промыли на фильтре 100 мл этанола, высушили под вакуумом и взвесили. Получено 70 г кислых фосфолипидов, имеющих следующий состав:
фосфатидные кислоты 30%
фосфатидилинозит 47%
фосфатидилэтаноламин 8%
фосфатидилсерин следы
неидентифицированные липиды 15%
Состав кислых фосфолипидов, полученных из разных партий кефалиновой фракции переработки лецитина, колебался в пределах:
фосфатидные кислоты 25-35%
фосфатидилинозит 45-53%
фосфатидилэтаноламин 5-10%
фосфатидилсерин следы
неидентифицированные липиды остальное.

Выделяемая смесь кислых фосфолипидов соевых фосфатидов стабильна при хранении в течение 2,5 лет при 4 8^oC и обладает высокими эмульгирующими свойствами. Данные по результатам хранения кислых фосфолипидов приведены в таблице 1.

Предлагаемая в качестве отрицательно заряженного компонента смесь кислых фосфолипидов соевых фосфатидов может быть использована для стабилизации липосомных везикул, получаемых из любых видов лецитина и других везикулообразующих веществ.

Оценку эффективности предлагаемого состава оболочки липосомных везикул проводят по физико-химическим характеристикам суспензий липосом в момент получения и после хранения в течение года.

Контроль за средним диаметром везикул и продуктами перекисного окисления липидов позволяет сделать вывод о степени стабильности липосомных везикул при хранении.

Данные по сравнительной оценке стабильности суспензий липосом известного из наиболее близкого аналога и предлагаемого состава оболочки везикул приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, наличие в липосомальной оболочке смеси кислых фосфолипидов соевых фосфатидов обеспечивает стабильность суспензии липосом при хранении при 4-8^oC в течение года. Наблюдается сохранение среднего диаметра липосомных везикул, агрегирование везикул отсутствует. При хранении суспензий липосом, содержащих оболочку с яичной фосфатидной кислотой, наблюдается значительное укрупнение везикул, а иногда и расслоение суспензии.

Контроль за продуктами перекисного окисления липидов показал, что наличие в оболочке липосомных везикул смеси кислых фосфолипидов соевых фосфатидов не приводит к заметному увеличению продуктов окисления, деградации липидов при длительном хранении, а, наоборот, обеспечивает сохранность химической природы компонентов оболочки везикулы, в то время как наличие в оболочке везикул отрицательно заряженной яичной фосфатидной кислоты приводит к значительному увеличению показателей перекисного окисления липидов при хранении.

Таким образом, суспензии липосом предлагаемого состава оболочки липосомной везикулы обладают большей стабильностью при хранении. Способ их получения не требует дорогостоящих и дефицитных источников сырья (мозговой ткани, сердец крупного рогатого скота и др.); а позволяет утилизировать отходы производства соевого лицитина, что значительно удешевляет целевой продукт и снимает возможность инфицирования персонала при работе.

Проведение первичного биологического исследования показало, что суспензия липосом предлагаемого состава оболочки апирогенны, атоксичны, не влияют на осмотическую резистентность эритроцитов и на свертывающую систему крови, что существенно необходимо для производства лекарственных препаратов.

Липосомные везикулы получают следующим образом: смешивают растворы лецитина и смеси кислых фосфолипидов соевых фосфатидов в органических растворителях в круглодонной колбе, растворители удаляют в вакууме и получают тонкую пленку фосфолипидов, которую затем смывают дисперсионной средой и диспергируют, затем фильтруют через фильтры и разливают во флаконы.

Липосомная везикула, стабильная при хранении, относится к медицине и фармакологии, может быть использована, например, для производства лекарственных препаратов. Изобретение решает задачу сохранения размера и структуры (без агрегации и слияния) и химической природы компонентов липосомной везикулы при длительном хранении. Липосомная везикула, стабильная при хранении, содержит оболочку из лецитина и отрицательно заряженного компонента. В качестве заряженного компонента используется смесь кислых фосфолипидов, выделяемая из соевых фосфатидов как единый компонент. Предлагаемый состав оболочки липосомной везикулы апробирован в лабораторных условиях и позволяет получать суспензии апирогенных, атоксичных липосом, стабильные при хранении в течение года и обладающие хорошими физико-химическими и биологическими свойствами. 2 табл.

Липосомная везикула, содержащая оболочку из лецитина и отрицательно заряженного компонента, отличающаяся тем, что в качестве отрицательно заряженного компонента оболочка содержит смесь кислых фосфолипидов, выделенную из соевых фосфатидов как единый компонент и обладающую следующими свойствами:
Кислотное число, мг • КОН 55 56
Содержание фосфора, 1,7 1,8
Цветность, мг 12 13
Содержание диенов, 0,7 0,8
Содержание тиенов, 0,1 0,2о