СТИМУЛЯТОР СИНТЕЗА ДНК Российский патент 1997 года по МПК A61K31/505 

Изобретение относится к медицине и биологии и касается препаратов, стимулирующих синтез ДНК.

Повреждение ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) и необходимость стимуляции ее репаративного синтеза возникает при воздействии ультрафиолетовой и ионизирующей радиацией, опухолевого процесса, интоксикации цитостатиками, психотропными и противососудорожными препаратами.

Под влиянием указанных факторов нарушается синтез ДНК, интегрированный ДНК полимеразой и процессы репликации. Возникают серьезные нарушения обмена.

Однако в настоящее время выбор препаратов, стимулирующих синтез ДНК невелик. Так, пуриновые и пиримидиновые основания малоэффективны. А экзогенная ДНК, как лекарственный препарат, исследована лишь на экспериментальном уровне [2]
Сущность изобретения состоит в том, что впервые в качестве стимулятора синтеза ДНК используют β форму метилурацила.

b форма метилурацила зарегистрирована как оригинальное химическое биологически активное вещество [1]
Ранее нами показаны ранозаживляющие и радиопротекторные свойства b - формы метилурацила. В качестве стимулятора синтеза ДНК это вещество ранее не использовалось.

В результате проведенных исследований нами выявлены свойства b формы метилурацила, дающие возможность применить ее по новому назначению.

В эксперименте проверяли включение предшественника (³Н-тимидин) в ДНК печени крыс в течение 24 ч при воздействии b формы метилурацила, в количествах 5, 25 и 100 мг на кг веса животного. В качестве сравнения животным вводили фармакопейный метилурацил в тех же дозах. В эксперименте использовано 50 крыс-альбиносов.

Препараты были разведены в дистиллированной воде в одинаковой концентрации 2,5 мг/мл. Контрольным крысам вводили 1,25 мл дистиллированной воды.

Через 30 мин крысам внутрибрюшино вводили ³Н-тимидин по 0,14 мКю на крысу в 0,7 мл дистиллированной воды.

На каждую точку брали по 2 крысы и определяли удельную активность кислоторастворимой фракции (КРФ), РНК и ДНК в каждой печени отдельно.

Через 24 ч из печени крыс готовили гомогенат в растворе 30 мМ фосфатного буфера pH 6,2 и 3 мМ MgCl₂ и брали пробы на определение ДНК, РНК и КРФ.

Содержание проб разделяли по Шмидту и Тонгаузеру и количество ДНК, РНК и КРФ определяли спектрофометрически по Спирину. Радиоактивность просчитывали на сцинтиляционном счетчике Мари-III по программе 8 в диоксановом сцинтиляторе.

Результаты исследования представлены в таблице, где показана удельная активность (УА) ДНК, РНК и КРФ в гомогенате печени крыс.

Удельная активность (УА) КРФ является показателем уровня включения меченного предшественника в пул нуклеотидов в печени крысы. По отношению к нему можно оценивать включение метки в ДНК. УА РНК показывает насколько фракция ДНК отмывается от невключившейся метки.

Из таблицы видно, что уровень УА РНК на порядок ниже, чем в КПФ и ниже, чем в ДНК. Следовательно, мы достаточно полно отмываемся от невключившихся в ДНК меченных предшественников.

При сравнении включения метки в ДНК по отношению к количеству метки в пуле предшественников (КРФ) видно, что только b форма метилурацила в концентрации 100 мг/кг веса животного дает превышение уровня включения метки в ДНК примерно в 2 раза.

Превышение уровня включения в ДНК при действии b формы метилурацила в дозе 25 мг/кг менее значительно. При введении фармакопейного метилурацила в том же диапазоне доз не выявлено превышения над контролем включения ³Н-тимидина в ДНК.

Таким образом, анализ экспериментальных исследований позволяет сделать вывод о стимулирующей активности b формы метилурацила в отношении синтеза эндогенной ДНК, что регистрируется по двукратному превышению над контролем включения ³Н-тимидина в ДНК (по отношению к содержанию ³Н-тимидина в кислоторастворимом пуле предшественников).

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

В эксперименте использовали 10 крыс-альбиносов весом 200-300 г. b - форму метилурацила вводили в дозе 100 мг/кг. Препарат разводили в дистиллированной воде в концентрации 2,5 мг/мл. Через 30 мин после введения препарата крысам в/бр вводили ³Н-тимидин по 0,14 мКю на крысу в объеме 0,7 мл дистиллированной воды. Определяли удельную активность (УА) кислоторастворимой фракции (КРФ), РНК и ДНК в каждой печени отдельно.

Через 24 ч крыс забивали, готовили гомогенат в растворе мМ фосфатного буфера при pH 6,2 и 3 мМ MgCl₂. Далее брали пробы на определение ДНК, РНК и КРФ.

Содержимое проб разделяли по Шмидту и Тонгаузеру. Количество ДНК, РНК и КРФ определяли спектрофотометрически по Спирину. Радиоактивность просчитывали на сцинтилляционном счетчике. При сравнении включения метки в ДНК по отношению к количеству метки в КРФ видно, что если в контроле процентное соотношение ДНК: КРФ составило 13,6, то при введении b формы метилурацила 28,3.

Таким образом, представленный пример иллюстрирует двукратное превышение над контролем включения меченого тимидина, что свидетельствует об усилении синтеза эндогенной ДНК.

Таким образом, нами впервые обнаружено свойство b формы метилурацила стимулировать синтез эндогенного ДНК.

Применение b формы метилурацила по заявленному назначению может быть перспективно при лучевой болезни, осложнениях химио- и лучевой терапии у онкологических больных и при других патологиях, связанных с нарушением синтеза эндогенной ДНК.

Изобретение относится к медицине и биологии и касается препаратов, стимулирующих синтез ДНК. Предложено применение β -формы метилурацила в качестве стимулятора синтеза эндогенной ДНК. Такое применение рекомендуется при всех случаях повреждения ДНК (действие радиации, интоксикации цитостатиками и т.д.). 1 табл.

Применение бета-формы метилурацила в дозе 100 мг/кг в эксперименте в качестве стимулятора синтеза эндогенной ДНК.