СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПИЩЕВОЙ АЛЛЕРГИИ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии и предназначено для диагностики пищевой аллергии, выявления пищевого антигена, вызывающего формирование повышенной чувствительности организма человека.

Наиболее близкими к предлагаемому способу являются способы диагностики сенсибилизации организма человека с использованием реакции торможения миграции лейкоцитов [1] и реакции торможения миграции макрофагов [2]
Однако данные способы технически сложны в исполнении, причем достоверность первого оценивается в 75-85% а второй является полуколичественным и биологически вариабелен.

Цель изобретения состоит в повышении точности диагностики и одновременном упрощении способа диагностики. Поставленная цель достигается тем, что полученную лимфокинсодержащую жидкость инкубировали в пробирках в термостате (37^oC) с клетками перитонеального экссудата (в основном макрофагов) крыс и оценивали сенсибилизацию лимфоцитов больных по степени торможения прилипания макрофагов лабораторного животного.

Способ осуществляется следующим образом.

На первом этапе исследования выделяют лимфоциты из крови больного по методу Tondal M. Holm J. Wigrell H. 1972 [3] На втором этапе исследования умерщвляют лабораторное животное (беспородная белая крыса-самец), вскрывают у него брюшную стенку и ополаскивают органы брюшной полости 20 мл ледяного физиологического раствора с гепарином (0,5 ЕД на 1 мл), пипеткой собирают в пробирку полученный перитонеальный экссудат. Пипетка при этом находится в ледяной бане. Полученный перитонеальный экссудат центрифугируют при 1000 об/мин по 10 мин дважды. Надосадочную жидкость сливают, а осадок разводят средой-199 до 2 мл. В стеклянные пробирки на 20 мл вносят 0,1 лимфокинсодержащей жидкости и 0,1 мл взвеси перитонеальных клеток, закрывают резиновыми пробками и помещают в горизонтальном положении в термостат при 37^oC на 2 ч. В параллельно проводимом контроле к 0,1 мл аллергена добавляют 0,1 мл перитонеальных клеток. Сравнивают процент неприлипших макрофагов (оставшихся в растворе) в опыте и в контроле. Если разница в количестве неприлипших макрофагов в опыте и контроле составляет 11-15% результат оценивают как сомнительный. При разнице 16-20% результат оценивают как положительный. При разнице более 20% реакция резко положительная.

При сопоставлении полученных результатов с данными, полученными другими методами диагностики пищевой аллергии, выявлена более высокая степень их корреляции с результатами комплексного обследования больных пищевой аллергией. Достоверность предлагаемого способа на 8-10% выше, чем прототипов. При этом достигнуто упрощение и удешевление способа за счет исключения использования специальных приспособлений для оценки миграции лейкоцитов и уменьшения времени инкубации индикаторных клеток.

Пример 1. Больная Л-на, 38 лет, с диагноз: поливалентная аллергия, хронический гастрит со сниженной секрецией. Поступила в клинику с высыпаниями по типу крапивницы, кожным зудом. При изучении анамнеза заболевания, проведении элиминационно-провокационных проб и теста деструкции тучных клеток выявлены пищевые аллергены, вызвавшие развитие заболевания белок куриного яйца, белок коровьего молока, цитрусовые. Реакция торможения прилипания макрофагов выявила резко положительный результат (22-42%) на указанные аллергены.

Пример 2. Больная В-ная, 61 год, с диагноз: поливалентная аллергия, хронический холецистит в фазе обострения, хронический гастрит со сниженной секрецией. Поступила в клинику с жалобами на першение в горле, боли в эпигастральной области после приема определенных видов пищевых продуктов. При комплексном обследовании выявлены причинно-зависимые пищевые аллергены белок куриного яйца, морская рыба (треска, хек), цитрусовые, белок коровьего молока. Тест торможения прилипания макрофагов выявил положительную реакцию на белок куриного яйца (14%), морскую рыбу (16-18%), резко положительную реакцию на цитрусовые (24%) и белок коровьего молока (30%).

Источники информации
1. Ashkenazi A. Levin S. Ider P. et al. An immunological assay for sensitivity to cow's milk protein//X International Congress of Allergology, 1979, N V. p. 4-11.

2. Бланк И. Реакция торможения миграции макрофагов. Иммунологические методы./Под ред. Х.Фримеля. М. Мир, 1979, с.165-170.

3. Шляхов Э.Н. Андриеш Л.П. Иммунология (справочное пособие). Кишинев, Штиинца, 1985, с. 261-262.

Использование: в медицине, в частности в иммунологии и аллергологии. Сущность изобретения: проводят исследование лимфоцитов крови больного в реакции торможения макрофагами перитонеального экссудата лабораторного животного в стеклянной пробирке, а затем оценивают сенсибилизацию лимфоцитов больного по степени торможения прилипания макрофагов лабораторного животного к стеклу, при разнице неприлипших макрофагов 16% и более относительно контроля диагностируют пищевую аллергию.

Способ диагностики пищевой аллергии путем исследования лимфоцитов крови больного в реакции торможения макрофагов, отличающийся тем, что лимфокинсодержащую жидкость инкубируют с макрофагами перитонеального экссудата лабораторного животного в стеклянной пробирке с последующей оценкой сенсибилизации лимфоцитов больного по степени торможения прилипания макрофагов лабораторного животного к стеклу и при разнице неприлипших макрофагов 16% и более относительно контроля диагностируют пищевую аллергию.