Способ выявления пищевого аллергена Советский патент 1989 года по МПК G01N33/483 G01N21/76 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления пищевых аллергенов.

Целью изобретения является повышение точности и специфичности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного производят забор секрета пищеварительного тракта (слюну, желудочный сок, дуоденальное содержимое), разводят его, распределяют на отдельные пробы, добавляют пищевые аллергены и производят замер хемилюминесценции. Сопоставляя полученные показатели с контролем (пробы без

аллергена), выявляют пищевой аллерген при увеличении хемилюминесценции на

200% и более.

Пример 1. Ребенок К. 1 г. 4 мес., поступил в детское отделение ДБ № 1 с жалобами матери на повторную рвоту, беспокойство ребенка, жидкий частый стул. В анамнезе - проявления аллергического диатеза (гнейс, молочный струп, опрелести). Контакт с инфекционными больными мать отрицает. В пищевом рационе дня

ребенка были включены следующие блюда: манная каша, яйцо, рыбное филе, картофельное пюре, печенье, творог. Переедание, нарушение режима дня ребенка мать отрицает.

Объективно: ребенок очень беспокоен, стучит ножками, кричит. Кожные покровы бледные. Сердце, легкие - без особенностей. Живот вздут, петли тонкого кишечника урчащие, стул жидкий, желтый, с прожилками слизи. Мочеиспускание в норме. Общий анализ крови - без патологии. При бактериологическим исследовании кала патологическая микрофлора не обнаружена. На основании клинико-анамнестических данных, а также исключения инфекционного генеза заболевания заподозрено наличие пищевой сенсибилизации.

Для диагностики этиологически значимого аллергена ребенку проведено исследование согласно предлагаемому изобретению. С этой целью у ребенка утром натощак собрана слюна в количестве 3 мл. Слюну развели раствором Ханкса 1.1, распределили на пробы в специальные флаконы по 1 мл, после чего в первую пробу (контрольную) Добавили О,1 мл физиологического раствора, в остальные (опытные) по 0,1 мл исследуемых пищевых аллергенов; 2-я проба - аллерген коровьего молока, 3-я - желтки куриного яйца, 4-я - белки куриного яйца, 5-я - рыбы хек, 6-я - картофельного аллергена. Пробы инкубировали в термостате в течение 1 ч. 30 мин, после чего добавляли 0,2 мл 3%-ного раствора перекиси водорода и производили замер хемилюми- несценции за 10 с, вычисляя средние показатели за 1 с. Получены следующие результаты: хемилюминесцентное свечение контрольной (первой) пробы 68750 имп/с, 2-й пробы 64300 имп/с, 3-й 67958 имп/с, 4-й 124322 имп/с, 5-й 59966 имл/с, 6-й 69600 имп/с.Следовательно, перекисная хемилюминесцен ция 4-й пробы, содержащей антиген белка куриного яйца существенно выше по сравнению с контролем, в то время как хемилюминесцентное свечение других проб, содержащих пищевые аллергены, существенно не отличаются от конт роля.

i на основании полученных данных

сделано заключение о наличии пищевой сенсибилизации к белку куриного яйца.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

Точность диагностики пищевой сенсибилизации по предлагаемому способу подтверждена другими методами исследования .

При аллергическом обследовании определены: увеличение концентрации УдЕ до 420 ед/мл, повышение показателя повреждения нейтрофилов с аллергеном белка куриного яйца 18%, теста угнетения миграции лейкоцитов с аллергеном куриного яйца 60%. Проведение кожных проб, также как и исследование по способу-прототипу (постановка провокационного теста), оказались невозможными в связи со значительно выраженным обострением аллергического энтероколита.

Проведение неспецифического десенсибилизирующего лечения, а также элиминация установленного этиологически значимого пищевого аллергена привели к полному выздоровлению ребенка.

Таким образом, точность способа в данном примере подтверждена целым комплексом методов аллергологического обследования, а также положительным клиническим эффектом от проведения элиминационного теста, в то время как обследование по способу-прототипу оказалось практически невозможным. Это подтверждает преимущество данного способа по сравнению с прототипом.

Пример 2. Ребенок Ж. Коля, поступил в гастроэнтерологическое отделение ДБ № 1 с жалобами на периодические боли в животе с преимущественной локацией в области правого подреберья. Боль обычно возникала после еды по типу колик.

В настоящее время состояние ребенка удовлетворительное. Кожные покровы обычной окраски, мальчик удовлетворительного питания. Тоны сердца звучные, ритмичные, В легких везикулярное дыхание. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области правого подреберья. Стул и мочеиспускание в норме. Общ. ан. крови: лейк. 5,5- 109/л, гемоглобин 120 г/л, лейкоцит- ная формула: Э-7, п-1, с-21, л-64, м-7, СОЭ-5 мм/ч. Протеинограмма: общ. белок 48 г/л, альбумины 62,7% глобулины 37,3, об, 7%; 10,5; / 14%, # 5,8%. Печеночные пробы: билирубин в норме. При лабораторном исследовании дуоденального содержимого: все три порции желчи прозрачны, лейкоциты 1,2 в п/зр., содержание белка в пределах нормы.

Для диагностики пищевой сенсибилизации желчь ребенка, полученную при дуоденальном зондировании взято для проведения хемилюминесцентного исследования по предложенному способу. Желч развели раствором Хенкса 1:10 и распределили на пробы по 1 мл. Дальнейшее исследование проведено согласно указанной методике.

В результате проведенных исследований получены данные о значительном повышении хемилюминесцентного свечения пробы, содержащей белок коровьего молока (189333 имп/с) по сравнению с контролем (43200 имп/с), в то время как хемилюминесцентное свечение проб, содержащих другие пищевые аллергены, практически не отличалось от контроля. На основании указанных данных установлен диагноз пищевой сенсибилизации к белку коровьего молока.

Комплексное аллергологическое обследование, проведенное ребенку, подтвердило точность способа. При постановке скарификационных проб с пищевым аллергеном положительная реакция на белок коровьего молока (4). Уровень УдЕ 490 ед/мл. ППМ на белок коровьего молока 27%, РБТЛ с ФГА 240, с белком коровьего молока 72%, реакция торможения миграции лейкоцитов 58%.

Учитывая удовлетворительное состояние ребенка, ему был проведен провокационный тест на молоко по прототипу Ответная клиническая реакция на введение специфического пищевого аллергена проявлялась однократной рвотой, генерализованными болями в животе спастического характера. Элиминацион- ная диета с применением неспецифических десенсибилизирующих средств оказала положительный результат.

Следовательно, в данном примере точность предлагаемого способа под0

тверждена постановкой кожных проб, комплексным аллергологическим обследованием провокационным тестом. Однако проведение провокационного теста вызнало значительное обострение заболевания, что еще раз подтверждает преимущества данного способа по срав-, нению с прототипом.

Q Таким образом, данный способ обладает целым рядом преимуществ.

Высокая точность и специфичность диагностики. Обследовано 79 человек с пищевой сенсибилизацией. Точность

5 диагностики подтверждена комплексом аллергологических методов исследования и составила 99%. Данные представлены в таблице.

Высокая объективность метода. Регистрация результатов проводится с помощью печатного устройства аппарата для измерения хемилюминесценции и не зависит от субъективных факторов (исследуемого и исследователя).

Всеобщая допустимость для больных, отсутствие противопоказаний, побочных явлений, осложнений.

Широкая информативность, поскольку способ позволяет одновременно исследовать неограниченное число пищевых аллергенов.

Формула изобретения

Способ выявления пищевого аллергена путем проведения аллергических проб со стороны местного иммунитета пищеварительного тракта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и специфичности способа, проводят измерение иницируе- мой перекисью водорода хемилюминесценции смеси стандартного пищевого аллергена и секрета пищеварительного тракта в соотношении 1:10 и при уве- , личении хемилюминесценции по сравнению с контролем на 200% и более выявляют аллерген пищевой сенсибилизации.

5

0

5

0

5

ЗА

15 15 15 20

64420+98

53210±132 67910±128 59770+245 60300+77

15896+110 ;

ЛИца с пищевой сенсибилизацией, молочной

к белку куриного ярда K рыбе к белку мяса

Здоровые лица

.. „..

# Р - достоверность различия результатов между контрольной

188395+140 125220±156 248200±140 62000+96

0

;0,001

0, 001 0,001 0,001 0,05

100

100 100

98

О

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления пищевых аллергенов. Целью изобретения является повышение точности. Для этого у больного утром натощак собирают слюну в количестве 3 мл, разводят ее раствором Хенкса 1:1, распределяют во флаконы по 1 мл, после чего в 1-ю пробу (контрольную) добавляют 0,1 мл физиологического раствора, в остальные - по 0,1 мл исследуемых пищевых аллергенов: 2-я проба - аллерген коровьевого молока, 3-я - желтка куриного яйца, 4-я - белка куриного яйца, 4-я - рыбы хек, 5-я - картофельного аллергена. Пробы инкубируют в термостате в течение 1 ч 30 мин, после чего добавляют 0,2 мл 3%-ного раствора перекиси водорода и производят замер хемилюминесценции за 10 с и вычисляют средние значения за 1 с. Получены следующие результаты: хемилюминесцентное свечение контрольной пробы 68750 имн/с, 2-й пробы 64300, 3-й 67958, 4-й 124322, 5-й 59996. Выявлен аллерген, которым является белок куриного яйца. То есть при увеличении хемилюминесценции по сравнению с контролем на 200% и более выявляют аллерген. Точность диагностики при использовании способа составляет 99%.

Редактор О.Спесивых

Составитель Э.Цыганов

Техред Л.Олийнык Корректор М.Максимишинец

Заказ 8094/51

Тираж 789

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное