Способ диагностики пищевой аллергии Советский патент 1992 года по МПК G01N33/533 

(Л

С

Изобретение относится к медицине. 1J частности к аллергологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения типа аллергии. Цель достигается путем постановки реакции спонтанного розеткообразования с выявлением Т- и В-лимфоцитов с последующим определением коэффициента синтетической активности а для Т- и В-лимфоцитов при окрашивании фиксированных клеток акридиновым оранжевым. И при ат больше 0,28 аллергию определяют как протекающую преимущественно по замедленному типу, а при Ов больше 0.33 - преимущественно по немедленному типу.

Изобретение относится к медицине, в частности к. иммунологии и аллергологии.

Целью изобретения является повышение точности способа путем определения типа аллергии.

Способ осуществляется следующим образом.

Лимфоциты периферической крови больного выделяют на фиколлверогрэфино- вом градиенте плотностью 1,077. затем дважды отмывают средой 199. Для получения Е-РОК0.1 мл взвеси содержащей 2 10 лимфоцитов, смешивают с 0.1 мл 0.5%-ной взвеси эритроцитов барана и выдерживают 5 мин при 37°С и 60 мин при 4-8°С. Для получения ЕАС-РСК взвесь лимфоцитов смешивают с эритроцитами барана, нагруженными антителами и комплементом. Розетки фиксируют глутэровым альдегидом в конечной концентрации 0,6%. Обычным

способом на стекле приготавливают мазки, которые красят акридиновым оранжевым по Карнаухову В.Н. (1978):10 мин - фиксатор Карнуа. 3 мин - 96%-ный этиловый спирт, 3 мин - 70%-ный этиловый спирт, 1,5 мин - 30%-ный этиловый спирт. 4 мин цитрзтно-фосфатный буфер (рН 4.2), 10 мин - акридиновый оранжевый 0.003%-ной концентрации. 2 мин - дистиллированная вода. Мазки просматривают с водной иммерсией в люминесцентном цитофлуо- риметре с последующей регистрацией фототока на цифровом вольтметре с каждого лимфоцита в красном (640 нм) и зеленом (530 нм) спектрах (всего 100 лимфоцитов в мазке). Эталоны о красном и зеленом спектрах вводят по регистрации тока фотолюминесценции с эталонного уранового стекла согласно инструкции пользования люминесцентным микроскопом. Коэффициент синтетической активности CL рассчитыVI

О

о

00

43

вэют по соотношению показаний красной люминесценции к зеленой для каждого мазка. И при повышении а Т-лимфоцитов больше 0,28 считают, что пищевая аллергия протекает по замедленному типу, а при а В-лимфоцитов более 0,33 - преимущественно по немедленному типу, что является существенным при выборе адекватного лечения.

П р и м е р 1. Больная И.. 34 года. Диагноз: пищевая аллергия по типу брон- хоспазма, вазомоторного ринита. Хронический гастрит с сохраненной секрецией. После приема 50 г земляничного варенья через 10 мин сердцебиение, головная боль, через 20 мин одышка, заложенность носа. Через сутки Т-лимфоциты 52%. В-лимфоци- ты 34%, ат -0,28. о -0,65, Ig Е-350 ME. В соответствии с определением типа аллергии была назначена терапия, подавляющая аллергические реакции немедленного типа. После лечения состояние улучшалось, брон- хоспазм исчез, заложенность носа уменьшилась, Т-лимфоциты 52%, В-лимфоциты 28%. ат -0.28. о. -0,22. lgE-300 ME. Клини- ко-лабораторные данные - снижение а% в три раза, эффект от лечения - у больной пищевая аллергия протекает по немедленному типу.

П р и м е р 2. Больная В. 62 года, Диагноз: пищевая аллергия по типу аллергического дерматита. Хронический колит. Состояние удовлетворительное, на коже рук, лица, передней брюшной стенки папулезные высыпания. Т-лимфоциты 59%, В- лимфоциты 15%, № -0,99, Ов-0,44, lgE-150 ME. После лечения эллюминаиионная дие0

та, курс иглорефлексотерэпии. которое более эффективно при аллергических реакциях замедленного типа, высыпания на коже значительно уменьшились и побледнели. Т-лимфоциты 57%, В-яи мфоциты 14%. а, - 0,48. Ов -0,43, Ig Е-150 ME. Клинико-лабо- раторные данные - уменьшение сгт в два раза, эффект от соответствующей терапии - пищевая аллергия протекает по замедленному типу.

Таким образом предлагаемый способ позволяет за короткий период диагностировать тип пищевой аллергии, что важно при назначении адекватного лечения. Способ 5 прост в исполнении и не требует сложной аппаратуры.

Формула изобретения Способ диагностики пищевой аллергии путем цитометрии лимфоцитов с помощью флуоресцентного красителя, отличающийся тем. что, с целью повышения точности способа путем определения типа аллергии, перед цитомет- рией осуществляют дифференцирование Т- и В-лимфоцитов в реакций розеткообра- зования. при этом розетки фиксируют глуто- ровым альдегидом, а окрашивают акридиновым оранжевым в концентрации 0,003%. измеряют флуоресценцию в зеленом и красном спектрах, считают козффици- ент а синтетической активности как отношение показаний красной и зеленой флуоресценции отдельно для Т- и В-лимфоцитов и при огт больше 0.28 диагностируют пищевую аллергию, протекающую по замедленному типу, а при OB больше 0.33 - по немедленному типу.

0

5

0

5