СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для экспресс-диагностики доклинических стадий опухолевых заболеваний.

Известен способ диагностики злокачественных новообразований с помощью хемилюминесценции сыворотки крови. Сверхслабое свечение сыворотки крови (СК) у больных со злокачественными опухолями понижено по сравнению со свечением СК здоровых лиц (Журавлев А. И. Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение в комплексной диагностике. М. 1975, с. 63). СК исследуемого лица помещали в цилиндрическую кювету из перекса с оптическим дном с последующим исследованием в специальной установке, которая состоит из блоков фотоумножителя, объекта, питания, регистрации. Использовали фотоэлектронный умножитель ФЭУ-42. Запись сигналов выводили на экран регистрирующего устройства. Вручную с помощью курсора проводили сканирование спектрограммы по максимальным значениям амплитуд и соответствующим им длинам волн возбуждения и испускания. Затем спектрограмму расшифровывали.

Недостатки метода:
длительность способа (не менее суток), сложность выполнения, наличие дорогостоящего оборудования, необходимость большого количества сыворотки крови. Кроме того, диагностика возможна только клинических стадий злокачественных новообразований.

Изобретение направлено на решение задачи диагностики доклинических стадий опухолевых заболеваний, ускорение и упрощение способа.

Указанная задача достигается тем, что проводят кристаллоскопическое исследование пробы в поляризованном свете (например, с помощью поляризационного микроскопа Мин-8), приготовленной из капель сыворотки крови подозреваемого лица с введенными в них каплями 0,05 0,1% раствора глютаминовой кислоты.

Затем капли СК подозреваемого лица (3-6) раздельно, объемом 0,02 0,03 мл каждая, наносят на предметное стекло, в каждую каплю вводят по 0,01 мл (одна капля) 0,05 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрывают покровными стеклами, сушат при Т 35-38^oC в суховоздушном шкафу на протяжении 1-2 ч, затем выдерживают на открытом воздухе 1 2 ч и проводят кристаллоскопическое (оптическое) исследование в поляризованном свете. При наличии в пробе кристаллов следующих форм: радиально-лучевых, коротко- и длинноразветвленных дендритов или их сочетаний диагносцируют злокачественное новообразование.

Протекание биохимических процессов на доклинических стадиях развития пролиферативных (злокачественных) состояний сопровождается повышенным содержанием в сыворотке крови больного человека глютаминовой кислоты. Она необходима как пластический материал при росте опухоли (Шапот В.С. Биохимические аспекты опухолевого роста. М. 1975, Блинов В.А. Биохимические проявления системного действия опухоли на организм (азотистый, углеводный обмен, аглюконеогенез). Дис. докт. Киев, 1975). 0,05-0,1% раствор глютаминовой кислоты использовали с целью ее возможной кристаллизации в сыворотке крови.

Помещение капли пробы между двумя стеклами (ориентированная кристаллизация) приводит к появлению специфических кристаллов дендритных микроформ, характерных для глютаминовой кислоты в условиях "пересыщения" ею среды исследования.

Температура 35 38^oC способствует проявлению оптических свойств пробы без значительных нарушений ее биологической структуры.

Время сушки 1-2 ч подобрано для максимального удаления влаги.

Выдерживание препарата на открытом воздухе на протяжении 1-2 ч усиливает рост кристаллов.

Способ осуществляют следующим образом:
Сыворотку крови исследуемого лица раздельно в виде капель (3-6), объемом 0,02 0,03 мл каждая, наносят на предметные стекла, в каждую каплю вводят по 0,01 мл (одна капля) 0,05 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрывают покровными стеклами и сушат в суховоздушном шкафу на протяжении 1 2 ч при Т 35 38^oC, затем выдерживают на открытом воздухе 1-2 ч и исследуют в поляризованном свете и при наличии радиально-лучевых, или коротко- или длинноразветвленных дендритных кристаллов или их сочетаний определяют злокачественное новообразование.

Результаты предлагаемого способа представлены на 9 фигурах, которые иллюстрируют варианты дендритных микроформ, полученных из СК больных, подозреваемых в наличии новообразования на ранних стадиях их развития.

Использованы сыворотки крови больных с заболеваниями крови (лимфолейкоз, миелолейкоз), опухолями нервной системы (нейрофиброма), опухолями молочной железы, матки и придатков.

На фиг. 1 показана проба, приготовленная из СК здорового человека с введенной в нее глютаминовой кислотой. Отсутствуют дендритные кристаллы; на фиг. 2 в пробе подозреваемого лица присутствуют радиально-лучевые дендритные кристаллы. Впервые выявленный хронический лимфолейкоз; на фиг. 3 в пробе присутствуют радиально-лучевые дендритные кристаллы. Выявлен впервые хронический миелолейкоз; на фиг. 4 в пробе подозреваемого лица присутствуют длинноразветвленные дендриты. Впервые выявлено новообразованние молочной железы; на фиг. 5 длинноразветвленные дендритные кристаллы. Впервые выявлен рак молочной железы; на фиг. 6 в пробе присутствуют радиально-лучевые и длинноразветвленные дендритные кристаллы. Впервые выявлен рак придатков; на фиг. 7 в пробе присутствуют длинноразветвленные дендриты. Впервые выявлен рак придатков; на фиг. 8 в пробе присутствуют короткоразветвленные дендритные кристаллы. Обнаружена впервые нейрофиброма; на фиг. 9 в пробе подозреваемого лица присутствуют радиальнолучевые и короткоразветвленные дендритные кристаллы.

Опухоль матки.

Пример 1. Фиг. 1, СК здорового человека с введенным в нее 0,1% раствором глютаминовой кислоты. Присутствуют нитевидные кристаллы, которые слабо реагируют на поляризованный свет. Уровень глютаминовой кислоты 52 м/моль микромоль.

Технология: на предметное стекло нанесли три капли СК здорового человека, каждая объемом 0,02 мл, в каждую каплю ввели 0,1 мл 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрыли капли покровными стеклами и сушили 1 ч в суховоздушном шкафу при Т 37^oC. Полученный препарат выдержали на открытом воздухе 1 ч, а затем микроскопировали в поляризованном свете.

Пример 2. Проба, приготовленная из СК подозреваемого лица. Присутствуют радиально-лучевые дендритные кристаллы. Содержание глютаминовой кислоты 80 микро/моль. Подозрение на опухолевый процесс. Диагноз подтвердился. Впервые выявлен хронический лимфолейкоз.

Технология: на предметное стекло нанесли четыре капли СК подозреваемого лица, каждая объемом 0,03 мл, в каждую каплю ввели 0,1 мл 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрыли капли покровными стеклами и сушили 2 ч в суховоздушном шкафу при Т 37^oC. Полученный препарат выдержали на открытом воздухе 2 ч, а затем микроскопировали в поляризованном свете.

Пример 3. Проба, приготовленная из СК подозреваемого лица. Присутствуют радиально-лучевые дендритные кристаллы. Содержание глютаминовой кислоты 75 микро/моль. Подозрение на новообразование. Диагноз подтвердился: впервые выявлен хронический миелолейкоз.

Технология: на предметное стекло нанесли три капли СК подозреваемого лица, каждая объемом 0,02 мл, в каждую каплю ввели 0,1 мл 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрыли капли покровными стеклами и сушили 1 ч в суховоздушном шкафу при Т 35^oС. Полученный препарат выдержали на открытом воздухе 2 ч, затем микроскопировали в поляризованном свете.

Пример 4. Фиг. 4. Проба, приготовленная из СК подозреваемого лица. Присутствуют длинноразветвленные дендритные кристаллы. Содержание глютаминовой кислоты 68 микро/моль. Подозрение на наличие новообразования. Диагноз подтвердился. Новообразование молочной железы.

Технология: на предметное стекло нанесли три капли СК подозреваемого лица, каждая объемом 0,02 мл, в каждую каплю ввели 0,1 мл 0,05% раствора глютаминовой кислоты, накрыли капли покровными стеклами и сушили 1 ч в суховоздушном шкафу на протяжении часа при Т 36^oC. Препарат затем выдержали на открытом воздухе 1 ч, а затем микроскопировали в поляризованном свете.

Пример 5. фиг. 5. Проба, приготовленная из СК подозреваемого лица. Присутствуют длинноразветвленные дендритные кристаллы. Содержание глютаминовой кислоты 74 микро/моль. Подозрение на новообразование. Диагноз подтвердился. Рак молочной железы.

Технология: капли СК подозреваемого лица наносят на предметное стекло, в каждую вводят по капле 0,1% раствор глютаминовой кислоты и накрывают каждую покровными стеклами, затем сушат в суховоздушном шкафу при Т 38^oC на протяжении 1 ч, выдерживают на открытом воздухе 1 ч и микроскопируют в поляризованном свете.

Пример 6. Фиг. 6. Проба, приготовленная из СК подозреваемого лица. Присутствуют радиально-лучевые и длинноразвлетвленные кристаллы. Впервые выявлен рак придатков.

Технология: капли СК исследуемого лица наносят по четыре на предметное стекло, объемом 0,02 мл каждая, в каплю вводят 0,1% раствора глютаминовой кислоты (объемом 0,01 мл), накрывают покровными стеклами и сушат в суховоздушном шкафу при Т 37^oC на протяжении 2 ч, полученный препарат выдерживают на открытом воздухе, а затем микроскопируют в поляризованном свете.

Пример 7. Фиг. 7. В пробе присутствуют длинноразветвленные дендриты. Впервые выявлен рак придатков.

Технология: капли СК исследуемого лица наносят на предметное стекло, объемом 0,03 мл каждая, в каплю вводят 0,01 мл 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрывают капли предметными стеклами, сушат в термостате при Т 37^oC, затем выдерживают на открытом воздухе на протяжении 1 ч и микроскопируют в поляризованном свете.

Пример 8. Фиг. 8. В пробе, приготовленной из СК подозреваемого лица, присутствуют короткоразветвленные дендритные кристаллы. Впервые найдена нейрофиброма.

Технология: на предметное стекло наносят три капли СК исследуемого лица, каждая объемом 0,02 мл, затем в каждую каплю вводят по капле 0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрывают капли покрывными стеклами и сушат в термостате при Т 38^oC на протяжении 1 ч, полученный препарат выдерживают на открытом воздухе на протяжении 1 ч, а затем микроскопируют в поляризованном свете.

Пример 9. Фиг. 9. В пробе подозреваемого лица присутствуют радиально-лучевые и короткоразветвленные дендритные кристаллы. Диагноз подтвердился. Опухоль матки.

Технология: на предметное стекло наносят шесть капель СК подозреваемого лица объемом 0,03 мл каждая, затем в капли вводят по одной капле 0,1% раствора глютаминовой кислоты, покрывают капли покровными стеклами и сушат в суховоздушном шкафу при Т 38^oC на протяжении 1 ч. Полученный препарат выдерживают в открытом воздухе на протяжении 2 ч и микроскопируют в поляризованном свете.

Положительный эффект: быстрота использования способа, доступность, возможность выявления доклинических стадий злокачественных новообразований.

Использование: в области медицины и биологии для экспресс-диагностики доклинических стадий опухолевых заболеваний. Сущность изобретения: исследуют сыворотку крови. 3 капли сыворотки крови наносят на предметное стекло, вводят в каждую каплю 0,05-0,1% раствора глютаминовой кислоты, накрывают покровными стеклами, сушат при t 35 - 38^oC на протяжении 1 - 2 ч, выдерживают на открытом воздухе 1 - 2 ч, затем проводят кристаллоскопическое исследование в поляризованном свете и при наличии в препарате радиально-лучевых, или коротко- или длинноразветвленных дендритных кристаллов или их сочетаний диагностируют злокачественное новообразование. Способ позволяет получить достоверные лабораторные данные о наличии опухолевых заболеваний. 9 ил.

Способ диагностики злокачественных новообразований путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что капли сыворотки крови наносят на предметное стекло, вводят в каждую каплю 0,05 0,1%-ного раствора глютаминовой кислоты, накрывают покровными стеклами, сушат при 35 38^oС на протяжении 1 2 ч, выдерживают на открытом воздухе 1 2 ч, затем проводят кристаллоскопическое исследование в поляризованном свете и при наличии в препарате радиально-лучевых или коротко- или длинноразветвленных дендритных кристаллов, или их сочетаний диагностируют злокачественное новообразование.