СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к невралогии.

Известен способ диагностики рассеянного склероза путем забора крови с последующим ее иммунологическим анализом, заключающимся в том, что исследуют кровь до и через 30 мин после подкожного введения больному раствора рауседила, к обеим пробам добавляют 0,1 - 0,2 мл 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных серотонином, инкубируют смесь при температуре 37 - 37,5^oC в течение 10 - 15 мин, подсчитывают в мазке число розеткообразующих лимфоцитов и при отсутствии достоверного увеличения показателя между обеими пробами диагностируют рассеянный склероз (авт. св. N 1640653, кл. G 01 N 33/48, 1990. Юшкова Т.А., Быкова А.А., Гаришина М.Ф.).

Недостатками этого способа являются техническая сложность его постановки, необходимость парентерального введения медикамента и связанная с этим опасность занесения инфекции, возможность аллергической реакции больного на введение лекарства, необходимость двукратного забора крови из вены, необходимость наличия большого количества одноразовых шприцев, наличия дорогостоящих реактивов и сложной аппаратуры, отсутствие ампулированного рауседила, который не выпускается в России и не поставляется в настоящее время из других государств.

Задача изобретения - упрощение и удешевление способа диагностики рассеянного склероза при высокой точности и специфичности.

Задача достигается путем определения в тромбоцитах крови большого количества гранул серотонина, окрашенных азотнокислым серебром в коричневый цвет, и при их количестве, меньшем 350, определяют рассеянный склероз.

Способ осуществляют следующим образом.

Из пальца больного забирают 1 - 2 капли крови на чистое предметное стекло, предварительно выдержанное в эксикаторе над парами 40%-ного раствора формалина в течение 1- 2 мин, готовят мазок из свежей капли крови и влажный мазок подвергают воздействию паров формалина, затем его фиксируют, проводя над пламенем спиртовки 3 - 4 раза. Зафиксированный таким образом мазок окрашивают методом серебрения: выдерживают в растворе нитрата серебра при 56 - 58^oC в течение 50 - 60 мин, затем промывают дистиллированной водой и выдерживают в 5%-ном растворе тиосульфата натрия 4 - 6 мин (5 г щелочного тиосульфата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды). Окрашенный мазок высушивают на воздухе и просматривают под микроскопом при 900-кратном увеличении 100 тромбоцитов, подсчитывают в них количество серотонинсодержащих гранул и при их числе менее 350 диагностируют рассеянный склероз.

Для приготовления раствора нитрата серебра 10 г сухого нитрата серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды. К 95 мл этого раствора добавляют по каплям гидроокись аммония, все время взбалтывая, до тех пор, пока образующийся осадок не растворится. Затем осторожно по каплям добавляют оставшиеся 5 мл раствора нитрата серебра до появления неисчезающего осадка. Выдерживают смесь при комнатной температуре в течение 10 - 12 ч, после чего смесь перемешивают и к каждым 25 мл раствора нитрата серебра добавляют 75 мл дистиллированной воды. Полученный раствор профильтровывают и используют для окраски мазков.

Результаты проведенных исследований приведены в табл. 1 - 4.

Примеры практического применения способа.

Пример 1. Больная В., 39 лет, предъявляет жалобы на слабость в конечностях, больше в ногах, пошатывание при ходьбе, приступы головокружения, онемение пальцев рук, тазовые нарушения, неустойчивое настроение, снижение памяти. Больна в течение 2 мес. , когда после гриппа появилась слабость в кистях, больная не могла держать ложку в руках; постепенно присоединились слабость в нижних конечностях и шаткость походки, передвижение без посторонней помощи стало невозможным.

В неврологическом статусе определяются недостаточность подъязычного черепно-мозгового нерва слева центрального характера, двусторонний горизонтальный мелкоразмашистый нистагм, спастический тетрапарез с патологическими рефлексами, клонус стоп и коленных чашечек с обеих сторон, отсутствие брюшных рефлексов, умеренно выраженная атаксия, снижение вибрационной чувствительности в кистях и стопах, императивные позывы на мочеиспускание. Больная эмоционально лабильна, снижена оперативная память и интеллект. При осмотре глазного дна выявлено побледнение височных половин дисков зрительных нервов с обеих сторон.

Клинический диагноз: дебют рассеянного склероза; цереброспинальная форма.

Предлагаемым способом произведен подсчет количества гранул серотонина в тромбоцитах крови больной путем фиксации мазка над парами 40%-ного раствора формалина, окрашивания раствором нитрата серебра при 56^oC в течение 60 мин, затем мазок промывали дистиллированной водой, выдерживали в 5%-ном растворе тиосульфата натрия 5 мин при подсчете гранул серотонина в 100 тромбоцитах их число составило 138.

Таким образом, с помощью предлагаемого способа подтвержден клинический диагноз рассеянного склероза.

Пример 2. Больная У., 36 лет, больна в течение 10 лет, когда весной 1985 года впервые без видимых причин появились слабость и онемение нижних конечностей, которые самостоятельно регрессировали через 10 дней. Весной 1995 года больная отметила эпизод слабости в правой стопе в течение 1 нед. В январе 1996 года появилась слабость в правой ноге, шаткость походки, ощущение ползания мурашек в нижних конечностях и мышцах малого таза, поперхивание пищей.

Неврологически определяется недостаточность конвергенции слева, снижение небного рефлекса, спастический монопарез правой нижней конечности, патологические симптомы Россолимо, Бехтерева, Жуковского справа, атактический синдром, снижение болевой и отсутствие вибрационной чувствительности в правой стопе.

Установлен диагноз: рассеянный склероз; цереброспинальная форма; ремиттирующее течение; фаза обострения.

Предлагаемым способом произведен подсчет количества гранул серотонина в тромбоцитах крови больной: мазок фиксировали над парами 40%-ного раствора формалина, окрашивали раствором нитрата серебра при 58^oC в течение 50 мин, промывали дистиллированной водой и выдерживали в 5%-ном растворе тиосульфата натрия 4 мин. Число гранул серотонина в 100 тромбоцитах крови составило 295.

Таким образом, с помощью предложенного способа подтвержден клинический диагноз рассеянного склероза.

Пример 3. Больная С., 40 лет, поступила в клинику нервных болезней с жалобами на слабость и ощущение ползания мурашек в нижних конечностях, пошатывание при ходьбе, периодические головные боли давящего характера в виде "обруча", эпизоды недержания мочи, быструю утомляемость, снижение настроения.

Больна с 1992 года, когда отмечала два эпизода слабости в нижних конечностях, продолжительностью по 2 ч, проходящих самостоятельно. В декабре 1993 года после психотравмирующей ситуации появилось чувство неловкости, а затем слабость и боли в нижних конечностях, больная не могла самостоятельно передвигаться. Был поставлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма, ремиттирующее течение, фаза обострения. После курса гормональной терапии симптомы заболевания полностью регрессировали. Осенью 1995 года после стресса появились шаткость походки, тазовые нарушения в виде периодического недержания мочи. Проводимое лечение эффекта не дало. В марте 1996 года появились парестезии и слабость в нижних конечностях.

В неврологическом статусе при поступлении определены: центральный парез лицевого и подъязычного нервов справа, симметричное оживление сухожильных и периостальных рефлексов, снижение мышечной силы в нижних конечностях до 3 баллов, нарушение мышечно-суставного чувства в пальцах ног, пошатывание в позе Ромберга и при ходьбе, промахивание и интенционное дрожание при выполнении пальценосовой и пяточноколенной проб с обеих сторон.

При определении количества гранул серотонина в 100 тромбоцитах заявленным способом их число у больной составило 492. Диагноз рассеянного склероза не подтвердился.

При дальнейшем клиническом наблюдении диагноз "рассеянный склероз" был отвергнут и поставлен диагноз: истерический невроз.

Пример 4. Больной К. , 33 лет, предъявляет жалобы на боли пояснице и иррадиацией по наружной поверхности правого бедра и голени, онемение наружного края правой стопы. Боли усиливаются при движении. Болен 3 года, обострения бывают 1 - 2 раза в год после физических нагрузок.

При обследовании отмечен вертебральный синдром в виде ограничения объема движений в поясничном отделе позвоночника, сглаженности поясничного лордоза, правостороннего сколиоза, дефанса мышц поясницы; положительные симптомы Ласега и Нери справа, гипестезия по наружной поверхности правой голени. Коленные рефлексы живые, равные. Левый ахиллов рефлекс снижен, правый не вызывается. На рентгенограммах пояснично-крестцового отдела позвоночника определяются косвенные признаки грыжи диска L4.

Клинический диагноз: остеохондроз поясничного отдела позвоночника, грыжа диска L4, компрессионно-корешковый синдром.

При определении количества гранул серотонина в 100 тромбоцитах заявленным способом, их число у больного составило 479, что не характерно для больных рассеянным склерозом.

Пример 5. Донор Е. (женщина), 28 лет, практически здорова.

При определении количества гранул серотонина в 100 тромбоцитах заявленным способом их число составило 526, что не характерно для больных рассеянным склерозом.

Преимущества предлагаемого способа заключаются в его технической простоте, однократном заборе малого количества (капли) крови из пальца, отсутствии необходимости введения больному лекарственных веществ и связанной с этим возможностью аллергической реакции больного, отсутствии необходимости дорогостоящей аппаратуры.

Способ обеспечивает чувствительную и специфичную диагностику рассеянного склероза и позволяет рано диагностировать дебюты заболевания, его стертые и атипичные формы, дает возможность дифференциальной диагностики в неясных случаях.

Способ может быть использован в медицине, в частности в неврологии. Мазок крови больного фиксируют над парами 40 %-ного раствора формалина, окрашивают раствором нитрата серебра при 56-58^oС в течение 50 - 60 мин, промывают дистиллированной водой, выдерживают в 5 %-ном растворе тиосульфата натрия 4 - 6 мин, подсчитывают в 100 тромбоцитах серотонинсодержащие гранулы и при их количестве меньшем 350 диагностируют рассеянный склероз. Способ прост в исполнении при сохранении высокой точности и специфичности. 4 табл.

Способ диагностики рассеянного склероза путем изучения форменных элементов крови, отличающийся тем, что мазок крови больного фиксируют над парами 40%-ного раствора формалина, окрашивают раствором нитрата серебра при температуре 56 - 58^oC в течение 50 - 60 мин, промывают дистиллированной водой, выдерживают в 5%-ном растворе тиосульфата натрия 4 - 6 мин и подсчитывают в 100 тромбоцитах серотонинсодержащие гранулы и при их количестве меньше 350 диагностируют рассеянный склероз.