N-(6-МЕТИЛ-2,4-ДИОКСО-1,2,3,4-ТЕТРАГИДРОПИРИМИДИНИЛ-5-СУЛЬФОНИЛ) ПИРАЗИН-2-КАРБОКСАМИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОЛЕПРОЗНОЙ, ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОЙ И ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1998 года по МПК C07D403/12 

Изобретение относится к новому биологически активному химическому соединению сульфонильному производному пиразин-2-карбоксамида

проявляющему противолепрозную, противотуберкулезную и иммунотропную активность, и способ его получения.

Известный структурный аналог пиразинамид относится к пртивотуберкулезным препаратам I ряда и самостоятельно почти не применяется из-за быстрого развития к нему устойчивости микобактерий туберкулеза /Тыныстанова Р.И. Козлова Н.В. Проблемы туберкулеза, 1984, N 7, с. 56 63/.

Аналоги по действию диуцифон и диаминодифенилсульфон (ДДС) проявляют только противолепрозную активность. (Машковский М.Д. Лекарственные препараты, 1987, т.2, с.330).

Целью изобретения является синтез новых производных пиразинамида с более широким спектром действия и менее токсичных.

Поставленная цель достигается соединением формулы I, обладающим высокой противолепрозной, противотуберкулезной и иммунотропной активностью.

Указанное соединение получают взаимодействием эквимолекулярных количеств Na-соли амида пиразинкарбоновой кислоты и 6-метилурацил-5-сульфохлорида в жидком аммиаке.

Это соединение не удается получить обычным путем, а именно взаимодействием соответствующих амида и сульфохлорида в апротонном растворителе в присутствии оснований.

Токсичность соединения I была определена на белых беспородных мышах весом 18 20 г в остром опыте по методу Литчфильда-Уилкоксона и составила более 8000 мг/кг.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. N-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3-тетрагидропиримидинил-5-сульфонил)пиразин-2-карбоксамид (I).

В суспензию 0,035 моль амида натрия в 100 мл жидкого аммиака вносят 3,69 г. (0,03 моль) пиразинимида и перемешивают 2 часа. Затем вносят 7,85 г (0,035 моль) 6-метил-5-урацилсульфохлорида и перемешивают еще один час. Испаряют аммиак в токе аммиака и к полученному сухому остатку приливают 100 мл холодной воды. Нерастворившийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре холодной водой, сушат на воздухе. Получают 7,15 г (84%) белых кристаллов с точкой плавления 283 284^oC (из диметилформамида). Найдено, C 38,7; H 2,71; S 10,1; N 22,8; C₁₀H₉N₅O₅S. Вычислено, C 38,6; H 2,9; S 10,3; N 22,5.

УФ-спектр (в воде) λ_max 266 нм, lgε 4,13.

ИК-спектр (в вазелине) ν_c=1680, 1730 см^-1, 1400 cм^-1, 1180 см^-1, ν_NH 1520 см^-1.

Пример 2. Определение противолепрозной активности.

Противолепрозная активность соединений 1 была изучена на 75 мышах ♀ линии CBAxC₅₇BI, зараженных 5000 микобактерий сульфонорезистентного штамма лепры, введенных в подушечку лапки по методу Шепарда.

Животных лечили 7,5 месяцев со дня заражения. Соединение I вводили 5 раз в неделю в виде крахмальной суспензии (0,5 мл) внутрь через зонд в дозе 50 мкг/мышь.

Контрольная группа животных, зараженных одновременно тем же количеством возбудителя, содержалась в одинаковых условиях с опытными и получала внутрь через зонд только 0,5 мл крахмала.

Еще 3 группы мышей, зараженных аналогично, получали ДДС, диуцифон и оротат пиразинамида в дозе 50 мкг в 0,5 мл крахмальной суспензии соответственно.

Через 7,5 месяцев все животные были забиты и проведены бактериоскопические исследования по подсчету микобактерий лепры в каждой лапке мыши у всех групп животных. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таким образом, у животных, получавших соединение I, к концу опыта микобактерий лепры не были обнаружены, то есть препарат проявляет бактерицидную активность.

Пример 3. Определение противолепрозной активности.

Противотуберкулезная активность соединения I в сравнении с пиразинамидом и оротатом пиразинамида определялась при культивировании микобактерий туберкулеза в жидкой среде Школьниковой с 10% человеческой плазмой.

В каждую пробирку, содержащую 2 мл среды с исследуемым веществом и различных концентрациях, засевали по 0,2 мл взвеси микобактерий туберкулеза штамма "Academia", приготовленной по бактериальному стандарту мутности N 5 и разведенной в 10 раз. Инкубировали 10 дней при 30^oC. Минимальную ингибирующую концентрацию определяли по отсутствию колоний микобактерий туберкулеза в пробирке с наименьшей концентрацией. С этой целью делали мазок, окрашивали по Цилю-Нильсену, смотрели при увеличении 7х8 около 100 полей зрения.

Полученные результаты представлены в таблице 2.

Терапевтический индекс соединения I более 4000.

Анализ данных таблицы 2 показывает, что в эквитоксических дозах соединение I по сравнению с пиразинамидом и его орататом оказывает более выраженное противотуберкулезное действие.

Пример 4. Изучение иммунотропной активности соединение I.

Иммунотропная активность соединения определялась в сравнении с диуцифоном и орататом пиразинамида. В опытах использовано 280 мышей гибридов (CBAxC₅₇BI/6)F₁, которых иммунизировали внутрибрюшинно субоптимальной дозой эритроцитов барана (5•10⁶) и сразу после этого вводили однократно соединение I, оротат пиразинамида и диуцифон перорально в крахмальной суспензии. Вещество изучали в широком диапазоне доз. В контрольной группе при меняли только крахмальную суспензию перорально.

На четвертые сутки подсчитывали количество АОК в селезенках методом локального гемолиза в геле (метод Ерне и Нордин). Индекс стимуляции иммунного ответа высчитывали как отношение АОК в селезенках мышей, получивших препараты, к числу АОК в селезенках мышей контрольной группы (см. табл. 3).

Как видно из таблицы, соединение I проявляет высокое стимулирующее действие во всех исследуемых дозах и эффективнее чем диуцифон и оротат пиразинамида.

Таким образом, заявляемое соединение обладает комплексом полезных свойств: практически нетоксично, проявляет бактерицидную и противолепрозную активность; противотуберкулезное действие в эквитоксических дозах выше, чем у пиразинамида и его оротата; высокое иммуностимулирующее действие в широком диапазоне доз в отличие от диуцифона и оротата пиразинамида.

Изобретение относится к новым биологически активным химическим соединениям, производным пиразина формулы I, приведенной в описании, которое получают взаимодействием предварительно полученной путем взаимодействия пиразинамида с амидом натрия в среде жидкого аммиака Na-соли пиразин-2-карбоксамида и 6-метил-5-урацил сульфохлорида в жидком аммиаке. Вещество практически не токсично (ЛД₅₀ в остром опыте 2350-8000 мг/кг). Проявляет противотуберкулезную активность более высокую, чем пиразинамид, высокую противолепрозную активность, а также высокое иммуностимулирующее действие в широком диапазоне доз. Может быть использовано в качестве лекарственных средств для лечения лепры и туберкулеза и как иммуномодуляторы. 2 с. п. ф-лы, 3 табл.

1. N-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидинил- 5-сульфонил)пиразин-2-карбоксамид формулы

обладающий противолепрозной, противотуберкулезной и иммунотропной активностью. 2. Способ получения N-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидинил-5-мульфонил)пиразин-2-карбоксамида по п.1, отличающийся тем, что пиразинамид в среде жидкого аммиака подвергают взаимодействию с амидом натрия с последующим добавлением в реакционную смесь 6-метил-5-урацилсульфохлорида.