ОРОТАТ ГИДРАЗИДА ИЗОНИКОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИМИКОБАКТЕРИАЛЬНОЙ И ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК C07D213/16 C07D239/54 A61K31/505 

Изобретение относится к новому биологически активному соединению производному изоникотиновой кислоты общей формулы I,
обладающему антимикобактериальной и иммунотропной активностью, которое может найти применение в медицине.

В настоящее время одним из основных противотуберкулезных препаратов является гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид, тубазид), обладающий высокой бактериостатической активностью, особенно при лечении впервые выявленных больных туберкулезом. Он отличается довольно высокой токсичностью (150 мг/кг) и хорошей переносимостью [1] Однако при его применении могут наблюдаться побочные явления: головная боль, головокружение, тошнота, рвота, болевые ощущения в области сердца, кожные аллергические реакции. Возможны эйфория, ухудшение сна, появление периферического неврита. Главным же недостатком изониазида является его иммунодепрессивное действие и быстро возникающая при лечении устойчивость микроорганизмов [2]
Известен диаминодифенилсульфон (ДДС) в качестве противолепрозного средства, однако это соединение обладает невысоким терапевтическим индексом (120) и проявляет антимикобактериальный эффект при введении в больших дозах (50 мкг/мышь).

Известен высокоэффективный иммуностимулирующий препарат диуцифон [3] Однако его индекс иммуностимуляции при малых дозах недостаточно высок (1,3 при дозе 15 мкг/мышь).

Цель изобретения поиск в ряду производных пиримидина новых соединений, обладающих более высокой антимикобактериальной и иммунотропной активностью.

Поставленная цель достигается введением оротат гидразида изоникотиновой кислоты формулы 1, обладающего антимикобактериальной и иммунотропной активностью.

Токсичность 1 в остром опыте была определена на белых беспородных мышах весом 18-20 г и составила 320 (270-379) мг/кг, что почти в 2 раза меньше, чем у изониазида.

П р и м е р 1. Оротат гидразида изоникотиновой кислоты.

Смесь 1,56 г (0,01 моль) оротовой кислоты и 1,37 г (0,01 моль) гидразида изоникотиновой кислоты в 60 мл воды кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч до полного растворения. Раствор отфильтровывают горячим и по охлаждении получают 2,1 г белых кристаллов. Добавлением к фильтрату спирта получают еще 0,6 г вещества. Общий выход 92% Кристаллизуют из воды, промывают спиртом, эфиром. Т_пл. 278-279^оС (из воды). Найдено, мас. C 44,8; H 4,0; N 24,1; C₁₁H₁₁N₅O₅.

Вычислено, мас. C 45,1; H 3,8; N 23,9. ИК-спектр (вазелин): ν_CO 1700 см^-1, ν_NH+ 3275 см^-1; ν_СОО- 1575 см^-1. УФ-спектр (вода): λ_max 275 нм, lg ε 3,98.

П р и м е р 2. Определение противотуберкулезной активности.

Противотуберкулезная активность 1 (86-Т3) определялась по классической методике на мышах самцах F₁ (CBA x C₅₇B1), заряженных изониазидо-устойчивым штаммом микобактерий туберкулеза H₃₇R_v "СССР" внутривенно 250 тыс. микробных тел в 0,5 мл физраствора. Результаты лечения сравнивались с тубазидом, пиразинамидом и протионамидом. Препараты вводили внутрь через зонд 5 раз в неделю в виде крахмальной эмульсии в дозе 200-500 мкг на мышь. Контрольная группа зараженных животных содержалась в тех же условиях и получала 5 раз в неделю только крахмальную эмульсию. Эффективность препарата оценивалась по выживаемости животных, их весу, весу их органов и индексу поражения внутренних органов (прежде всего, легких).

Результаты представлены в табл. 1.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что соединение 1 более эффективно действует на микобактерии штамма Н₃₇R_v "СССР", чем изониазид, и в 2 раза меньшей дозе проявляет такую же активность, как протионамид.

П р и м е р 3. Определение противолепрозной активности.

Противолепрозная активность оротата гидразида изоникотиновой кислоты была изучена на мышах самцах линии СВА, зараженных микобактериями штамма К-1, введенными интраплантарно (в подушечку лапки мыши) в количестве 4000 и 5000 микробных тел. Лечение одной группы животных начали сразу же после заражения, второй спустя 2 месяца, так как известно, что за каждые 12 дней происходит увеличение в 2 раза количества внутриклеточных бактерий. Препарат вводили внутрь через зонд 5 раз в неделю в дозе 15 мкг в 0,5 мл крахмальной суспензии. Еще две группы зараженных животных получали аналогичным образом диаминодифенилсульфон (ДДС) и диуцифон по 50 мкг на мышь. Контрольная группа мышей той же линии, зараженных одновременно тем же количеством возбудителя, содержалась в одинаковых условиях с опытными и получала внутрь через зонд только 0,5 мл крахмальной эмульсии. Через 4 месяца со дня заражения животные были забиты и были проведены бактериоскопические исследования по подсчету микобактерий лепры в каждой лапке мыши у всех групп животных.

Результаты представлены в табл. 2.

Таким образом у животных, получавших оротат гидразида изоникотиновой кислоты сразу после заражения, количество возбудителя оказалось в 104 раза меньше, чем в контроле, в 40 раз меньше, чем у животных, леченных ДДС, и в 5 раз меньше, чем у животных, получавших диуцифон. Предлагаемое соединение почти в 2 раза уменьшает количество возбудителя, даже если лечение начинают через 2 месяца после заражения.

При этом предлагаемое соединение проявляет высокий антимикобактериальный эффект уже в дозе 15 мкг/мышь, а основной противолепрозный препарат ДДС (диаминодифенилсульфон) в дозе 50 мкг/мышь, то есть в 3,3 раза превышающий дозу соединения 1 и активность предлагаемого соединения.

П р и м е р 4. Изучение иммунотропной активности.

Иммунотропная активность определялась в сравнении со структурным аналогом изониазидом и иммуностимулятором диуцифоном на мышах-самцах линии F₁ (CBA x xC₅₇ B1) по методу Ерне и Норкина. Все мыши по 6 голов в группе были иммунизированы внутрибрюшинно 5 х 10⁶ эритроцитами барана. Соединение 1 вводят однократно в дозах: 15, 50, 100, 500 мкг в 0,5 мл крахмальной суспензии. Контрольная группа мышей в это время получила 0,5 мл крахмала. Все соединения вводили перорально. На четвертые сутки после иммунизации определяют количество антителоoбразующих клеток (АОК) в селезенке методом локального гемолиза в геле.

Полученные результаты представлены в табл. 3.

Данные табл. 3 свидетельствуют о том, что в отличие от изониазида, который имеет тенденцию к угнетению иммунного ответа, соединение 1 стимулирует образование антителообразующих клеток в селезенках мышей и в равных дозах эффективнее иммуностимулятора диуцифона, примерно в 1,5-2 раза.

В дозе 15 мкг/мышь, которая является и наиболее активной при лечении лепры, соединение 1 в 2,5 раза эффективнее диуцифона, хотя терапевтический индекс его ниже в 1,7 раза, чем у диуцифона. Это свидетельство значительно более высоких иммуностимулирующих свойств предлагаемого соединения.

Таким образом предлагаемое соединение обладает комплексом полезных свойств: высокой иммунотропной и антимикобактериальной активностью.

Использование: в медицине, как обладающий антимикробной и иммунотропной активностью. Сущность изобретения: оротат гидразида изоникотиновой кислоты формулы C₁₁H₁₁N₅O₅ T_пл= 278-279^°C Реагент I: оротовая кислота, реагент II: гидразит изоникотиновой кислоты. Процесс ведут в водной среде при температуре кипения. Выход 92% 3 табл.

Оротат гидразида изоникотиновой кислоты формулы

обладающий антимикобактериальной и иммунотропной активностью.