СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ УЛЬТРАЗВУКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/53 A61B8/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии.

Известен способ оценки иммуномодуляции в эксперименте путем проведения ультразвукового воздействия на область иммунокомпетентных органов животных, в течение 2 недель по 1 процедуре через 2-3 дня с последующим определением содержания в селезенке животных антителообразующих клеток (АОК), после чего на основании сравнения с интактными животными делается вывод о наличии или отсутствии иммуномодулирующего действия (Иммунологические механизмы действия ультразвука. /Информационное письмо. Авт. Ю.М.Гринзайд. /Пятигорский НИИ курортологии и физиотерапии. Пятигорск, 1992, с. 7). Данный способ недостаточно информативен, так как в этом случае неполно освещается итог продукции иммуноглобулинов, а большой разброс в величинах АОК не всегда дает возможность однозначной трактовки эффекта иммуномодуляции.

Предлагаемый способ лишен указываемых недостатков.

Содержание способа заключается в том, что вначале проводят ультразвуковые воздействия у лабораторных животных, например крыс, на область селезенки крыс в течение 2 недель при интенсивности ультразвука 0,05 Вт/см², разовой экспозиции 1-2,5 мин, общем числе процедур 6 (по 1 процедуре через 2-3 дня), на 14-ый день от начала процедур животных иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19-ый день определяют массы селезенки (Мс), содержание в ней антителообразующих клеток (АОК), концентрацию в крови циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Затем вычисляют индекс иммуномодуляции (ИММ) - произведение содержания в селезенке АОК на уровень ЦИК, деленное на массу селезенки.

При значениях ИММ, больших 20,4, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например крыс, воздействуют на область селезенки ультразвуком (УЗ) по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при разовой экспозиции 1-2,5 мин, общем числе процедур 5-6 (по 1 процедуре через 2-3 дня с последующей на 14-ый день от начала процедур внутрибрюшинной иммунизацией животных 0,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 19-ый день животных забивают, определяют массу селезенки, содержание в ней антителообразующих клеток по методике Ерне (Прямой метод локального гемолиза. В кн. Иммунологические методы. Под ред. Г.Фримеля. М. Медицина, 1987, с. 61-62) и в крови циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) по методике В.Гашковой (Гашкова В. Матл И. Кашлик И. Когандрле В. Циркулирующие комплексы Ag-At у больных с иммунокомплексными заболеваниями.

Чехословацкая медицина. 1978. N 1, с. 117-120).

Вычисляют индекс иммуномодуляции (ИММ) по формуле

При значениях ИММ, больших 20,4, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. Крыса-самка N 4, масса тела 205 г. Процедуры не назначались. Масса селезенки 940 мг, содержание в селезенке АОК 176 кл/чП, уровень ЦИК в сыворотке крови 45 ед, ИММ 8,4 ед.

2. Крыса-самка N 10, масса тела 210 г. Проведено 6 процедур УЗ на область селезенки при интенсивности 0,05 Вт/см², разовой экспозиции - 2,5 мин. Масса селезенки 582 мг, содержание в селезенке АОК 288 кл/чП, уровень ЦИК в сыворотке крови 110 ед, ИММ 54,4 ед. (Больше 20,4 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как иммуномодуляция.

3. Крыса-самка N 26, масса тела 205 г. Проведено 6 процедур УЗ на область селезенки при интенсивности 0,05 Вт/см², разовой экспозиции - 2,0 мин. Масса селезенки 730 мг, содержание в селезенке АОК 208 кл/чП, уровень ЦИК в сыворотке крови 80 ед, ИММ 22,8 ед. (Больше 20,4 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как иммуномодуляция.

4. Крыса-самка N 29, масса тела 220 г. Проведено 6 процедур УЗ на область селезенки при интенсивности 0,05 Вт/см², разовой экспозиции - 3,0 мин. Масса селезенки 683 мг, содержание в селезенке АОК 192 кл/чП, уровень ЦИК в сыворотке крови 15 ед, ИММ 4,2 ед. (Меньше 20,4 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

5. Крыса-самка N 34, масса тела 210 г. Проведено 6 процедур УЗ на область селезенки при интенсивности 0,05 Вт/см², разовой экспозиции - 1,0 мин. Масса селезенки 695 мг, содержание в селезенке АОК 208 кл/чП, уровень ЦИК в сыворотке крови 65 ед, ИММ 19,4 ед. (Меньше 20,4 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 39 крыс-самок линии Вистар, разделенные на 5 групп. Интактные животные 1 группы (9 крыс) служили контролем для остальных групп. 10 животным 2 группы проводилось озвучивание области селезенки по описанной выше методике при разовой экспозиции 2,5 мин, 6 животным 3-ей группы 2 мин, 8 животным 4-ой группы 3 мин, 8 животным 5-ой группы 1 мин. На 14-ый день от начала процедур (через 1-2 для после их окончания) все животные иммунизированы 0,5% -ной взвесью эритроцитов барана внутрибрюшинно, на 19-ый день забиты и проведено исследование массы и количества АОК селезенки, концентрации в сыворотке крови циркулирующих иммунных комплексов. Результаты статистически обработаны и отражены в таблице.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что зона нормы ИММ, составляет 5,8-20,4 ед, т.е. значения ИММ, превышающие 20,4 ед, могут расцениваться как свидетельство иммуномодулирующего эффекта. Подтверждением тому служит факт, что по отдельным показателям (масса селезенки, АОК, ЦИК) существенной разницы между группами 1 (интактной) и 2 (с иммуномодуляцией) не наблюдалось (P>0,05), тогда как интегральный показатель ИММ в группе 2 (25,6±5,75) достоверно превышал таковой в интактной группе (13,1±2,45).

Следовательно, предлагаемый способ является более информативным, чем традиционные.

Способ предназначен для оценки действия ультразвука в эксперименте. На область иммунокомпетентного органа животного воздействуют ультразвуком интенсивностью 0,05 Вт/см². Животное через установленный промежутом времени забивают. Определяют массу иммунокомпетентного органа, содержание в нем антителообразующих клеток. Рассчитывают оценочный показатель. При этом воздействуют на область селезенки животного ультразвуком с разовой экспозицией 1 - 2,5 мин в течение 5 - 6 процедур через 2 - 3 дня. После проведения установленного количества процедур животное иммунизируют эритроцитами барана. После забоя животного дополнительно определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови. В качестве оценочного показателя рассчитывают индекс иммуномодуляции как произведение содержания антителообразующих клеток в селезенке (клеток на чашку Петри) на уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови (отн. опт.ед.), деленное на массу селезенки (мг). При значении индекса иммуномодуляции более 20,4 оценивают действие ультразвука как иммуномодулирующее. Способ информативен, нагляден. 1 табл.

Способ оценки действия ультразвука в эксперименте, включающий воздействие на область иммунокомпетентного органа животного ультразвуком интенсивностью 0,05 Вт/см² с последующим забоем животного через установленный промежуток времени, определением массы иммунокомпетентного органа, содержания в нем антителообразующих клеток и расчетом оценочного показателя, отличающийся тем, что воздействуют на область селезенки животного ультразвуком с разовой экспозицией 1 2,5 мин в течение 5 6 процедур через 2 3 дня с последующей иммунизацией животного после проведения установленного количества процедур эритроцитами барана, а после забоя животного дополнительно определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови и рассчитывают в качестве оценочного показателя индекс иммуномодуляции (ИММ) по формуле

где М масса селезенки, мг;
АОК содержание антителообразующих клеток в селезенке, клеток на чашку Петри;
ЦИК уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови, отн.опт.ед.

и при значении ИММ более 20,4 оценивают действие ультразвука как иммуномодулирующее.