СПОСОБ ОЦЕНКИ БАЗАЛЬНОЙ ИММУНОМОДУЛЯЦИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии.

Известен способ оценки базальной иммуномодуляции в эксперименте (без дополнительной антигенной стимуляции) путем грязевых аппликаций на область иммунокомпетентных органов животных с последующим определением содержания в селезенке животных антителообразующих клеток (АОК), после чего на основании сравнения с интактными животными делается вывод о наличии или отсутствии иммуномодулирующего действия (Позднякова Л.И. К вопросу о механизме иммунорегуляторного эффекта пелоидов. //Иммунологические концепции в курортологии: Сборн. научн. тр. /Пятигорский НИИ курортологии и физиотерапии. - Пятигорск, 1987. - С. 30-31). Данный способ недостаточно информативен, так как в этом случае неполно освещается итог продукции иммуноглобулинов, а большой разброс в величинах АОК не всегда дает возможность однозначной трактовки эффекта иммуномодуляции.

Предлагаемый способ лишен указываемых недостатков.

Содержание способа заключается в том, что вначале проводят воздействие аппликациями пелоидов у лабораторных животных, например крыс, на область тимуса крыс в течение 2 недель при температуре 42 ^oC, разовой экспозиции - 20 минут, общем числе процедур - 6 (1 раз в 2-3 дня), на 14-й день от начала процедур животных иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19-й день определяют содержание в селезенке антителообразующих клеток (АОК), количество клеток на 100 мг массы тимуса (клеточность тимуса - КТ), содержание в селезенке розеткообразующих клеток с эритроцитами барана (Е-РОК) и концентрацию в сыворотке крови лизоцима (ЛМ). Затем вычисляют индекс базальной иммуномодуляции (ИБИ) - произведение уровней АОК и Е-РОК, деленное на произведение уровней КТ и ЛМ:
ИБИ = (АОК•Е-РОК)/(КТ•ЛМ).

При значениях ИБИ, больших 8,3, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например крыс, воздействуют на область тимуса в течение 2 недель при температуре 42 ^oC, разовой экспозиции - 20 минут, общем числе процедур - 6 (1 раз в 2-3 дня), с последующей на 14-й день от начала процедур внутрибрюшинной иммунизацией животных 0,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 19-й день животных забивают, определяют содержание в селезенке антителообразующих клеток (АОК) по методике Ерне (Прямой метод локального гемолиза. В кн.: Иммунологические методы., под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987. - С. 61-62), количество клеток на 100 мг массы тимуса (клеточность тимуса - КТ), содержание в селезенке розеткообразующих клеток с эритроцитами барана (Е-РОК) по методике Фримеля и Зауэра (Фримель Г. Метод Е-розеток В кн.: Иммунологические методы., под ред. Г. Фримеля. -М.: Медицина, 1987. - С. 269-272; Зауэр X. Метод иммунных розеток. - Там же, с. 278-282) и концентрацию в сыворотке крови лизоцима (ЛМ) по методике О.В.Бухарина (Бухарин 0. В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. - Томск: Издательство Томского госуниверситета, 1974. - 209 с. ). Затем вычисляют индекс базальной иммуномодуляции (ИБИ) - произведение уровней АОК и Е-РОК, деленное на произведение уровней КТ и ЛМ:
ИБИ = (АОК•Е-РОК)/(КТ•ЛМ).

При значениях ИБИ, больших 8,3, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. Крыса-самка N 3, масса тела - 170 г. Процедуры не назначались. Содержание в селезенке АОК - 104 кл/чП, клеточность тимуса - 253,1 • 10<---, уровень Е-РОК в селезенке - 82%, уровень лизоцима в сыворотке крови - 15,63 мкг/мл. ИБИ - 2,16 ед.

2. Крыса-самка N 1, масса тела - 200 г. Проведено 6 грязевых аппликаций на область тимуса при температуре 42 ^oC, экспозиции - 20 минут в течение 2 недель. Содержание в селезенке АОК - 136 кл/чП, клеточность тимуса - 115,7 • 10<---, уровень Е-РОК в селезенке - 67%, уровень лизоцима в сыворотке крови -9,38 мкг/мл. ИБИ - 8,39 ед. Эффект воздействия пелоидов расценен как иммуномодуляция (близкий к пограничному).

3. Крыса-самка N 15, масса тела - 175 г. Проведено 6 грязевых аппликаций на область тимуса при температуре 42 ^oC, экспозиции - 20 минут в течение 2 недель. Содержание в селезенке АОК - 176 кл/чП, клеточность тимуса - 179,3 • 10<---, уровень Е-РОК в селезенке - 88%, уровень лизоцима в сыворотке крови - 8,8 мкг/мл. ИБИ - 9,82 ед. Эффект воздействия пелоидов расценен как иммуномодуляция. 4.

4. Крыса-самка N 4, масса тела - 190 г. Проведено 6 грязевых аппликаций на область тимуса при температуре 42 ^oC, экспозиции - 20 минут в течение 2 недель. Содержание в селезенке АОК - 120 кл/чП, клеточность тимуса - 345,9 • 10<---, уровень Е-РОК в селезенке - 67%, уровень лизоцима в сыворотке крови - 11,5 мкг/мл. ИБИ - 2,02 ед. Эффект воздействия пелоидов расценен как отсутствие иммуномодуляции.

5. Крыса-самка N 5, масса тела - 180 г. Проведено 6 грязевых аппликаций на область тимуса при температуре 42 ^oC, экспозиции - 20 минут в течение 2 недель. Содержание в селезенке АОК - 216 кл/чП, клеточность тимуса -90,9 • 10<---, уровень Е-РОК в селезенке - 60%, уровень лизоцима в сыворотке крови - 11,5 мкг/мл. ИБИ - 12,67 ед. Эффект воздействия пелоидов расценен как иммуномодуляция.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 38 крыс-самок линии Вистар, разделенные на 2 группы. Интактные животные 1 группы (20 крыс) служили контролем для остальных групп. 18 животным 2 группы проводилось воздействие аппликациями пелоидов на область тимуса в течение 2 недель при температуре 42 ^oC, разовой экспозиции - 20 минут, общем числе процедур - 6 (1 раз в 2-3 дня), на 14-й день от начала процедур животных иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19-й день их забивали и определяли содержание в селезенке антителообразующих клеток (АОК), количество клеток на 100 мг массы тимуса (клеточность тимуса - КТ), содержание в селезенке розеткообразующих клеток с эритроцитами барана (Е-РОК) и концентрацию в сыворотке крови лизоцима (ЛМ). Затем вычисляли индекс базальной иммуномодуляции (ИБИ) - произведение уровней АОК и Е-РОК, деленное на произведение уровней КТ и ЛМ:
ИБИ = (АОК•Е-РОК)/(КТ•ЛМ).

При значениях ИБИ, больших 8,3, констатировали наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Результаты статистически обработаны и отражены в таблице. Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что зона нормы ИБИ, рассчитанная как М ± @ (Л.С.Каминский, 1959) составляет 1,6-8,3 ед., т.е. значения ИБИ, превышающие 8,3 ед., могут расцениваться как свидетельство базального иммуномодулирующего эффекта. Подтверждением тому служит тот факт, что по отдельным показателям (АОК, Е-РОК, КТ, ЛМ) существенной разницы между группами 1 (интактной) и 2 (с иммуномодуляцией) не наблюдалось (Р>0,05), тогда нтегральный показатель ИБИ в группе 2 (4,8 ± 0,79) достоверно превышал таковой в интактной группе (2,46 ± 0,27).

Следовательно, предлагаемый способ является более информативным, чем традиционные.

Изобретение относится к области медицины, а в частности к иммунологии. Осуществляют аппликации пелоидов на область иммунокомпетентных органов животных. Затем иммунизируют животных эритроцитами барана на 14 день после начала воздействия. Забивают животных на 19 день эксперимента. После чего определяют содержание антителообразующих и Е-розеткообразующих клеток в селезенке. Определяют концентрацию лизоцима в сыворотке крови. Дополнительно определяют количество клеток тимуса на 100 мг его массы. Затем вычисляют индекс базальной иммуномодуляции по формуле: ИБИ = (АОК * Е-РОК)/(КТ * ЛМ), где ИБИ - индекс базальной иммуномодуляции, Е-РОК - содержание в селезенке розеткообразующих клеток с эритроцитами барана, КТ - количество клеток тимуса на 100 мг его массы, ЛМ - концентрация в сыворотке крови лизоцима. И при значении ИБИ больше 8,3 оценивают действие пелоидов как базальную иммуномодуляцию. Способ более информативен и более точен, чем традиционные. 1 табл.

Способ оценки базальной иммуномодуляции в эксперименте путем проведения аппликаций пелоидов на область иммунокомпетентных органов, например селезенки, животных, например крыс, с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана на 14 день после начала воздействия, забоем их на 19 день эксперимента, определением содержания антителообразующих и Е-розеткообразующих клеток в селезенке, концентрации лизоцима в сыворотке крови, отличающийся тем, что дополнительно определяют количество клеток тимуса на 100 мг его массы, вычисляют индекс базальной иммуномодуляции по формуле
ИБИ = (АОК • Е - РОК) / (КТ • ЛМ),
где ИБИ - индекс базальной иммуномодуляции;
Е - РОК - содержание в селезенке розеткообразующих клеток с эритроцитами барана;
КТ - количество клеток тимуса на 100 мг его массы;
ЛМ - концентрация в сыворотке крови лизоцима,
и при значении ИБИ больше 8,3 оценивают действие пелоидов как базальную иммуномодуляцию.