СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТА ИММУНОМОДУЛЯЦИИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии.

Известен способ оценки эффекта иммуномодуляции путем проведения воздействия физическим фактором на область вилочковой железы с последующим исследованием в селезенке общих и теофиллин-резистентных Е-розеткообразующих клеток (Е-РОК) и сравнения полученных данных с интактным контролем (Авторское свидетельство СССР N 1817128 на "Способ моделирования изменения иммунного статуса"; авт. Ю.М. Гринзайд, Л.Ю. Бабин). При этом Е-РОК в селезенке определяются по методу Г. Фримеля (Иммунологические методы. /Под ред. Г. Фримеля. - М.: Медицина, 1987, с. 269-272).

Данный способ недостаточно информативен, так как в этом случае иммунологический эффект оценивается неполно - только по динамике фенотипических тестов, а большой разброс в величинах Е-РОК не всегда дает возможность однозначной трактовки эффекта иммуномодуляции.

Предлагаемый способ лишен указываемых недостатков.

Содержание способа заключается в том, что вначале проводят воздействие низкочастотным переменным электрическим током при частоте 50 Гц, напряжении 10 В, разовой экспозиции 60-150 с на область тимуса лабораторных животных, например, крыс, по поперечной методике (площадь электродов - по 2 см²) в течение 2 недель при общем числе процедур - 6 (по 1 процедуре через 2-3 дня), на 14 день от начала процедур животным иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19 день определяют массу тимуса (Mт), массу селезенки (Mс), содержание в ней общих (Е-РОКо) и теофиллин-резистентных (Е-РОКт) розеткообразующих клеток. Затем вычисляют коэффициент иммуномодуляции (КММ) - произведение содержания в селезенке Е-РОКо на величину массы селезенки, деленное на произведение содержания в селезенке Е-РОКт на величину массы тимуса
КММ = Е-РОКо • Mс / Е-РОКт • Mт.

При значениях КММ, больших 3,65, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например крыс, на область тимуса - заднюю поверхность шеи - накладывают два электрода площадью по 2 см² с ватной прокладкой, смоченной 0,9% раствором хлористого натрия. Воздействие производят низкочастотным переменным электрическим током с частотой 50 Гц, напряжением 10 В, при разовой экспозиции 60-150 с в течение 2 недель при общем числе процедур - 6 (по 1 процедуре через 2-3 дня). На 14 день от начала процедур животным иммунизируют путем внутрибрюшинной инъекции 0,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 19 день животных забивают, определяют массу тимуса (Mт), массу селезенки (Mс), содержание в ней Е-розеткообразующих клеток - общих - Е-РОКо - (Метод Е-розеток. В кн.: Иммунологические методы. /Под ред. Г. Фримеля. - М.: Медицина, 1987, с. 269-272) и теофиллин-резистентных - Е-РОКт - (Диагностика иммунопатологии при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, ревматизме, бронхиальной астме и инфаркте миокарда. Методические рекомендации. Авт. И.А. Мельник, Б.И. Рудык, П.В. Барановский. - Тернополь, 1985, 24 с.).

Вычисляют коэффициент иммуномодуляции (КММ) по формуле
КММ = Е-РОКо • Mс / Е-РОКт • Mт.

При значениях КММ, больших 3,65, констатируют наличие иммуномодулирующего эффекта физического фактора.

Примеры осуществления способа
1. Крыса-самец N 2, масса тела - 220 г. Процедуры не назначались. Масса тимуса - 330 мг, масса селезенки - 697 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 30%, Е-РОКт - 30%. КММ - 2,11 ед.

2. Крыса-самец N 8, масса тела - 245 г. Проведено 6 процедур низкочастотной электротерапии (НЭТ) на область тимуса при частоте - 50 Гц, напряжении - 10 В, разовой экспозиции - 60 с. Масса тимуса - 160 мг, масса селезенки - 722 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 22%, Е-РОКт - 15%. КММ - 6,61 ед. Эффект воздействия НЭТ расценен как иммуномодуляция.

3. Крыса-самец N 14, масса тела - 230 г. Проведено 6 процедур низкочастотной электротерапии (НЭТ) на область тимуса при частоте - 50 Гц, напряжении - 10 В, разовой экспозиции - 60 с. Масса тимуса - 205 мг, масса селезенки - 848 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 30%, Е-РОКт - 15%. КММ - 8,27 ед. Эффект воздействия НЭТ расценен как иммуномодуляция.

4. Крыса-самец N 11, масса тела - 220 г. Проведено 6 процедур низкочастотной электротерапии (НЭТ) на область тимуса при частоте - 50 Гц, напряжении - 10 В, разовой экспозиции - 60 с. Масса тимуса - 155 мг, масса селезенки - 792 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 49%, Е-РОКт - 13%. КММ - 19,3 ед. Эффект воздействия НЭТ расценен как иммуномодуляция.

5. Крыса-самец N 18, масса тела - 220 г. Проведено 6 процедур низкочастотной электротерапии (НЭТ) на область тимуса при частоте - 50 Гц, напряжении - 10 В, разовой экспозиции - 150 с. Масса тимуса - 250 мг, масса селезенки - 617 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 18%, Е-РОКт - 22%. КММ - 2,02 ед. Эффект воздействия НЭТ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

6. Крыса-самец N 20, масса тела - 240 г. Проведено 6 процедур низкочастотной электротерапии (НЭТ) на область тимуса при частоте - 50 Гц, напряжении - 10 В, разовой экспозиции - 150 с. Масса тимуса - 280 мг, масса селезенки - 811 мг, содержание в селезенке Е-РОКо - 25%, Е-РОКт - 38%. КММ - 1,91 ед. Эффект воздействия НЭТ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 214 крыс-самцов линии Вистар, разделенные на 3 группы. Интактные животные 1 группы (7 крыс) служили контролем для остальных групп. 9 животных 2 группы проводилось воздействие низкочастотных электрическим током на область тимуса по описанной выше методике при разовой экспозиции - 60 с, 8 животным 3 группы - 150 с.

На 14 день от начала процедур (через 1-2 дня после их окончания) все животные иммунизированы 0,5% взвесью эритроцитов барана внутрибрюшинно, на 19 день - забиты и проведено исследование масс тимуса и селезенки и количества общих и теофиллин-резистентных Е-розеткообразующих клеток в селезенке. Результаты статистически обработаны и отражены в таблице.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что зона нормы КММ, рассчитанная как М ± @ (Л.С. Каминский, 1959) составляет 0,97 - 3,65 ед. Т. е. значения КММ, превышающие 3,65 ед., могут расцениваться как свидетельство иммуномодулирующего эффекта.

Подтверждением тому служит тот факт, что коэффициент иммуномодуляции КММ в группе 2 (9,00 ± 2,35) достоверно превышал таковой в интактной группе (2,11 ± 0,51; P < 0,05).

Следовательно, предлагаемый способ является более информативным, чем традиционные.

Способ может быть использован в медицине, а именно в иммунологии. Воздействуют низкочастотным электрическим током на область иммунокомпетентных органов, например тимуса животных, например крыс. На 14 день после начала воздействия животных иммунизируют эритроцитами барана и забивают их на 19 день эксперимента. Определяют массу селезенки и тимуса, а также содержание в селезенке общих и теофиллинрезистентных E-розеткообразующих клеток (Е-РОК), затем вычисляют произведение массы селезенки на содержание в ней общих Е-РОК, деленное на произведение содержания в ней теофиллинрезистентных Е-РОК на величину массы тимуса и при значениях его, больших 3,65, определяют наличие эффекта иммуномодуляции физического фактора. Способ позволяет повысить точность и информативность оценки иммуномодуляции в эксперименте. 1 табл.

Способ оценки эффекта иммуномодуляции (ЭИ) путем проведения воздействия низкочастотным электрическим током на область иммунокомпетентных органов, например тимуса животных, например, крыс, с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана на 14 день после начала воздействия, забоя их на 19 день эксперимента, определения содержания в селезенке общих и теофиллин-резистентных E-розеткообразующих клеток (E-POK), отличающийся тем, что дополнительно определяют массу селезенки и тимуса, а оценку ЭИ производят путем вычисления произведения массы селезенки на содержание в ней общих E-POK, деленного на произведение содержания в ней теофиллин-резистентных E-POK на величину массы тимуса и при значениях его, больших 3,65, определяют наличие эффекта иммуномодуляции физического фактора.