СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ИММУНОМОДУЛЯЦИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/53 G01N29/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии.

Известен способ оценки иммуномодуляции в эксперименте путем проведения ультразвукового воздействия у лабораторных животных, например крыс, на область селезенки в течение 2 недель при интенсивности ультразвука 0,05 Вт/кв. см, разовой экспозиции 1-2,5 минуты, общем числе процедур - 6 (по 1 процедуре через 2-3 дня), на 14-й день от начала процедур животных иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19-й день определяют массы селезенки (Мс), содержание в ней антителообразующих клеток (АОК), концентрацию в крови циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Затем вычисляют индекс иммуномодуляции (ИММ) - произведение содержания в селезенке АОК на уровень ЦИК, деленное на массу селезенки:

При значениях ИММ, больших 20,4, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора (патент РФ N 2105982 на "Способ оценки действия ультразвука в эксперименте", авт. Ю.М.Гринзайд и Н.И.Демешко).

Данный способ обладает рядом недостатков, снижающих его практическую ценность. Ультразвуковое воздействие осуществляется только на область селезенки - иммунокомпетентного органа, гораздо менее значимого для иммунной системы, чем, например, тимус. В связи с этим учитываются показатели, характеризующие только гуморальный иммунитет, а важнейшая сторона резистентности организма - клеточный иммунитет - оказывается неучтенной.

Предлагаемый способ лишен указываемых недостатков.

Содержание способа заключается в том, что вначале проводят ультразвуковые воздействия у лабораторных животных, например крыс, на область тимуса в течение 2 недель при интенсивности ультразвука 0,05 Вт/кв.см, разовой экспозиции 1-2 минуты, общем числе процедур - 6 (по 1 процедуре через 2-3 дня), на 14-й день от начала процедур животных иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана, на 19-й день определяют массы селезенки (Мс), содержание в ней антителообразующих клеток (АОК), концентрацию в тимусе клеток (клеточность тимуса - КТ) и массу тимуса (Мт). Затем вычисляют расширенный индекс иммуномодуляции (РИИ) - произведение содержания в селезенке АОК на уровень клеточности тимуса, деленное на произведение масс селезенки и тимуса.

При значениях РИИ, больших 0,10, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например крыс, воздействуют на область тимуса ультразвуком (УЗ) по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/кв.см при разовой экспозиции 1- 2,0 минуты, общем числе процедур - 5-6 (по 1 процедуре через 2-3 дня с последующей на 14-й день от начала процедур внутрибрюшинной иммунизацией животных 0,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 19-й день животных забивают, определяют массу селезенки, содержание в ней антителообразующих клеток по методике Ерне (Прямой метод локального гемолиза. В кн.: Иммунологические методы., под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987. - С.61-62) - в кл/чП, клеточность (в млн.кл/100 мг массы органа) и массу тимуса (в мг).

Вычисляют расширенный индекс иммуномодуляции (РИИ) по формуле:

При значениях РИИ, больших 0,10, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. Крыса-самка N 3. Процедуры не назначались. Масса селезенки - 945 мг, содержание в селезенке АОК - 176 кл/чП, клеточность тимуса - 171 млн/100 мг массы, масса тимуса - 362 мг. Содержание в крови ЦИК - 85 ед. ИММ - 15 ед., РИИ -0,09 ед.

2. Крыса-самка N 23. Проведено 6 процедур УЗ на область тимуса при интенсивности 0,05 Вт/кв.см, разовой экспозиции - 1 минута. Масса селезенки - 625 мг, содержание в селезенке АОК - 296 кл/чП, клеточность тимуса - 132 млн/100 мг массы, масса тимуса - 324 мг. Содержание в крови ЦИК - 70 ед. ИММ - 33,2 ед., РИИ - 0,19 ед. (Больше 0,10 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как иммуномодуляция.

3. Крыса-самка N 32. Проведено 6 процедур УЗ на область селезенки при интенсивности 0,05 Вт/кв. см, разовой экспозиции - 1,0 минута. Масса селезенки -719 мг, содержание в селезенке АОК - 256 кл/чП, клеточность тимуса - 120 млн/100 мг массы, масса тимуса - 484 мг. Содержание в крови ЦИК - 70 ед. ИММ - 24,9 ед. РИИ - 0,09 ед. (Меньше 0,10 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как отсутствие иммуномодуляции
4. Крыса-самка N 11. Проведено 6 процедур УЗ на область тимуса при интенсивности 0,05 Вт/кв. см, разовой экспозиции - 2,0 минуты. Масса селезенки -648 мг, содержание в селезенке АОК - 205 кл/чП, клеточность тимуса - 196 млн/100 мг массы, масса тимуса - 405 мг. Содержание в крови ЦИК - 18 ед. ИММ - 5,7 ед. РИИ - 0,16 ед. (Больше 0,10 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как иммуномодуляция.

5. Крыса-самка N 29. Проведено 6 процедур УЗ на область тимуса при интенсивности 0,05 Вт/кв. см, разовой экспозиции - 2,5 минуты. Масса селезенки -754 мг, содержание в селезенке АОК - 91 кл/чП, клеточность тимуса - 53 млн/100 мг массы, масса тимуса -388 мг. Содержание ЦИК в крови - 28 ед. ИММ - 3,4 ед. РИИ - 0,02 ед. (Меньше 0,10 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

6. Крыса-самка N 33. Проведено 6 процедур УЗ на область тимуса при интенсивности 0,05 Вт/кв. см, разовой экспозиции - 0,5 минуты. Масса селезенки -760 мг, содержание в селезенке АОК - 145 кл/чП, клеточность тимуса - 63 млн/100 мг массы, масса тимуса - 299 мг. Содержание ЦИК в крови -18 ед. ИММ - 3,4 ед. РИИ - 0,04 ед. (Меньше 0,10 ед.). Эффект воздействия УЗ расценен как отсутствие иммуномодуляции.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов (ОИМДФФ) Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 29 крыс-самок линии Вистар, разделенные на 3 группы.

Интактные животные 1 группы (10 крыс) служили контролем для остальных групп. 8 животным 2 группы проводилось озвучивание области селезенки по способу прототипа при экспозиции - 1 минута. 11 животным 3 группы производилось озвучивание области тимуса по заявляемому способу при экспозиции в 1 минуту.

На 14-й день от начала процедур (через 1-2 дня после их окончания) все животные иммунизированы 0,5% взвесью эритроцитов барана внутрибрюшинно, на 19-й день - забиты и проведено исследование массы и количества АОК селезенки, концентрации в сыворотке крови циркулирующих иммуных комплексов, массы и клеточности тимуса. Результаты статистически обработаны и отражены в таблице.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что зона нормы РИИ, рассчитанная как М± @ (Л.С.Каминский, 1959), составляет 0,04 - 0,10 ед. Т.е. значения ИММ, превышающие 0,10 ед., могут расцениваться как свидетельство иммуномодулирующего эффекта.

Подтверждением тому служит тот факт, что по отдельным показателям (масса селезенки, АОК, ЦИК, масса и клеточность тимуса) существенной разницы между группами 1 (интактной) и 3 (с иммуномодуляцией) не наблюдалось (P>0,05), тогда как интегральный показатель РИИ в группе 3 (0,123±0,0099) достоверно превышал таковой в интактной группе (0,070±0,011).

Изобретение относится к области иммунологии. Проводят ультразвуковые воздействия у лабораторных животных, например крыс, на область тимуса в течение 2 недель при интенсивности ультразвука 0,05 Вт/см². Разовая экспозиция составляет 1-2 мин при общем числе процедур - 6. На 14-й день от начала процедур животных иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана. На 19-й день определяют массу селезенки, содержание в ней антителообразующих клеток, концентрацию в тимусе клеток и массу тимуса. Затем вычисляют расширенный индекс иммуномодуляции (РИИ) - произведение содержания в селезенке АОК на уровень клеточности тимуса, деленное на произведение масс селезенки и тимуса. При значениях РИИ, больших 0,10, констатируют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора. Способ позволяет повысить точность оценки воздействия физического фактора. 1 табл.

Способ оценки качества иммуномодуляции в эксперименте путем проведения ультразвукового воздействия на область иммунокомпетентных органов, например тимуса, животных, например крыс, с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана на 14 день после начала воздействия, забоем их на 19-й день эксперимента, определением массы селезенки, содержания в ней антителообразующих клеток, отличающийся тем, что дополнительно определяют массу и клеточность тимуса, а оценку иммунитета производят путем вычисления произведения содержания в селезенке АОК на уровень клеточности тимуса, деленное на произведение масс селезенки и тимуса, и при значениях его, больших 0,10, определяют наличие иммуномодулирующего действия физического фактора.