СПОСОБ ОЦЕНКИ ПРОФИЛАКТИКИ ПОСТСТРЕССОРНОЙ ИММУНОПАТОЛОГИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, а именно - к иммунологии.

Известен способ оценки профилактики нарушений иммунного статуса путем воздействия лечебного фактора, например ультразвука, на подопытных животных, например мышах, с последующим воздействием патогенетического фактора, например, радиоактивного облучения, и исследованием после этого уровня лейкоцитов в капиллярной крови, клеточности тимуса и массы селезенки. Оценку профилактического действия физического фактора производят путем вычисления произведения уровней лейкоцитов и клеточности тимуса, деленного на массу селезенки, и при определенных его значениях определяют наличие профилактического эффекта (патент РФ №2106634 на «Способ оценки профилактики нарушений иммунного статуса при воздействии ионизирующей радиации»).

Недостатком данного способа является то, что он адаптирован только к условиям конкретной модели облучения и конкретного вида животных (мыши) и не работает, как показано ниже, на других моделях.

Предлагаемый нами способ позволяет исследовать возможности профилактики у животных другого вида и на другой модели.

Для этого вначале проводят курс ультразвукового воздействия на область тимуса подопытных животных, например крыс. Через 1-2 дня после завершения процедур у животных моделируется постстрессорный иммунодефицит путем свободного плавания животных в воде. На 5-6 сутки после завершения инициации модели определяют фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (ФАЛ), тироксина в сыворотке крови (Т4), содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), массу селезенки (МС) и массу тимуса (МТ) в мг. Вычисляют величину коэффициента профилактики (КПС) по формуле

и при значениях его, больших 137, констатируют наличие профилактического эффекта.

Способ осуществляют следующим образом. Вначале проводят курс ультразвукового воздействия по лабильной методике на область тимуса подопытных животных, например крыс, при интенсивности 0,2 Вт/см², разовой экспозиции 2 минуты, числе процедур 6. Через 1-2 дня после завершения процедур у животных моделируется постстрессорный иммунодефицит путем свободного плавания животных в водопроводной воде при температуре 18-20°С° (по 20 минут - ежедневно, в течение 3 дней). На 5-6 сутки после завершения инициации модели определяют фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (ФАЛ), тироксина в сыворотке крови (Т4), содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), массу селезенки (МС) и массу тимуса (МТ) в мг. Вычисляют величину коэффициента профилактики стресса (КПС) по формуле

и при значениях его, больших 137, констатируют наличие профилактического эффекта

Теоретическое обоснование указанного коэффициента основывается на том, что в результате стресса появляется диссоциация морфологических и функциональных элементов иммунного статуса и интенсифицируются катаболические процессы. При этом степень снижения иммунных и метаболических маркеров стресса и характеризует эффективность профилактики.

При анализе значений вышеуказанного коэффициента по группе «стресс» верхняя граница диапазона его изменений, рассчитанного как М+@ (Л.С.Каминский, 1959), при стрессе без профилактики ультразвуком составляет 137 ед.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов ГНИЙ курортологии в г.Пятигорске. Объектом исследования послужили 26 крыс-самцов линии Вистар, разделенные на 3 группы.

9 животных 1 группы не получали никаких воздействий. Исследование животных осуществлено в те же сроки, что и у крыс других групп.

9 животных 2 группы не получали ультразвуковых процедур, у крыс этой группы осуществлено моделирование стрессорного иммунодефицита путем путем вынужденного плавания животных в водопроводной воде при температуре 18-20°С° (по 20 минут - ежедневно, в течение 3 дней).

8 животных 3 группы вначале приняли курс ультразвуковых процедур на область тимуса с последующим моделированием постстрессорной иммунопатологии по описанным выше технологиям.

Животные забивались на 5-6 сутки после завершения инициации модели. Объект изучения - основные иммунокомпетентные органы - тимус, кровь, селезенка. Определяли фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (ФАЛ), тироксина в сыворотке крови (Т4), содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), массу селезенки (МС) и массу тимуса (МТ) в мг. Вычисляли величину коэффициента профилактики стресса (КПС) по формуле

и при значениях его больших 137 констатировали наличие профилактического эффекта.

У крыс 1 группы содержание антителообразующих клеток в селезенке составило 112,9+14,0 кл/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 141,0±5,32 нмоль/л, масса селезенки - 1402±76,6 мг, масса тимуса - 231,8±25,8 мг, ФАЛ - 64,3+2,43% коэффициент профилактики - 5,06±0,67 ед., К - 285.7±42.3 ед.

У животных 2 группы содержание антителообразующих клеток в селезенке составило 167,1+20,2 кл/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 133,7±5,73 нмоль/л, масса селезенки - 1536±109,4 мг, масса тимуса - 247,9±33,0 мг, ФАЛ - 13,1+0,68% коэффициент профилактики - 6,33±1,73 ед., К - 101.08±11,9 ед.

Содержание антителообразующих клеток в селезенке животных 3 группы составило 223,6+20,9 кл/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 128,8±4,81 нмоль/л, масса селезенки - 1700±144,8 мг, масса тимуса - 377,2±31,9 мг, ФАЛ - 56.2+0,06% коэффициент профилактики - 7,20±1,86 ед., К - 351,6±60,2 ед.

Сводные результаты исследований представлены в таблице.

Таблица
Оценка эффекта фонопрофилактикиПоказательNГруппаМмРМасса селез., мг1Интактная140276,61-2>0.32Модель (стресс)1536109,41-3>0.053УЗ+ Модель1700144,82-3>0.3Масса тимуса, мг1Интактная231,825,81-2>0.72Модель (стресс)242,030,11-3<0.013УЗ+ Модель377,231,92-3<0.02АОК Кл/чП1Интактная112,914,01-2<0.052Модель (стресс)177,620,91-3>0.053УЗ+ Модель167,120,22-3>0.7ФАЛ %1Интактная64,32,431-2<0.0012Модель (стресс)13,10,681-3>0.23УЗ+ Модель56,27,382-3<0.001Т4 Нмоль/л1Интактная141,05,321-2>0.32Модель (стресс)133,75,731-3>0.13УЗ+ Модель128,84,812-3>0.5КП1Интактная5,060,671-2>0.52Модель (стресс)6,331,731-3>0.23УЗ+ Модель7,201,862-3>0.7КПС1Интактная285,742,31-2<0.0012Модель (стресс)101,011,91-3>0.33УЗ+ Модель351,660,22-3<0.001

Примеры осуществления способа:

1. Крыса-самец линии Вистар No 16, масса тела - 210 г. Ультразвук не назначался. Проведено моделирование стресса. Содержание антителообразующих клеток в селезенке составило 168 л/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 110,7 нмоль/л, масса селезенки - 1342 мг, масса тимуса - 270 мг, ФАЛ - 14% коэффициент профилактики 3,81 ед., КПС - 105,6 ед. Профилактика отсутствует.

2. Крыса-самец линии Вистар No 25, масса тела - 225 г. Проведены предварительные процедуры ультразвукового воздействия на область тимуса. Проведено моделирование стресса. Содержание антителообразующих клеток в селезенке составило 120 кл/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 130,5 нмоль/л, масса селезенки - 908 мг, масса тимуса - 415 мг, ФАЛ - 74% коэффициент профилактики 16,7 ед., КПС - 148,0 ед.

Профилактический эффект отсутствует.

3. Крыса-самец линии Вистар No 27, масса тела - 220 г. Предварительные процедуры ультразвукового воздействия (УЗВ) на область тимуса по лабильной методике интенсивностью 0,2 Вт/см² при экспозиции 2 минуты, числе процедур - 6. Проведено моделирование стресса. Содержание антителообразующих клеток в селезенке составило 232 кл/чашку Петри, тироксина в сыворотке крови - 120,2 нмоль/л, масса селезенки - 1653 мг, масса тимуса - 276 мг, ФАЛ - 52% коэффициент профилактики 7,65 ед., КПС - 601,1 ед.

Наблюдается профилактический эффект.

Таким образом, предлагаемый способ оказался информативным как у отдельных животных, так и в статистике групп.

Предложен способ оценки профилактики постстрессорной иммунопатологии в эксперименте. Для этого вначале проводят ультразвуковое воздействие на область тимуса крыс, через 1-2 дня после завершения ультразвукового воздействия проводят моделирование иммунодефицита путем свободного плавания животных в воде при температуре 18-20°С по 20 минут ежедневно в течение 3 дней, определяют у животных на 5 сутки после завершения моделирования массу селезенки (МС), массу тимуса (МТ) в мг, содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (ФАЛ), тироксина в сыворотке крови (Т4) и оценивают профилактическое действие ультразвукового воздействия путем вычисления коэффициента профилактики стресса (КПС) по формуле , и при его значениях, больших 137, констатируют наличие профилактического эффекта. Способ позволяет исследовать возможности профилактики нарушений иммунного статуса у животных другого вида на других моделях, 1 табл.

Способ оценки профилактики постстрессорной иммунопатологии в эксперименте, включающий проведение ультразвукового воздействия на область тимуса подопытных животных в количестве 6 процедур, моделирование иммунодефицита через 1-2 дня после завершения ультразвукового воздействия, определение у животных на 5 сутки после завершения моделирования массы селезенки (МС), массы тимуса (МТ) в мг с последующей оценкой профилактического действия ультразвукового воздействия путем вычисления коэффициента профилактики, отличающийся тем, что в качестве подопытных животных используют крыс, ультразвуковое воздействие на область тимуса которых проводят при интенсивности 0,2 Вт/см², разовой экспозиции 2 мин, моделируют постстрессорный иммунодефицит путем свободного плавания животных в воде при температуре 18-20°С по 20 мин ежедневно в течение 3 дней, после завершения моделирования дополнительно определяют содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (ФАЛ), тироксина в сыворотке крови (Т4), а оценку профилактического действия осуществляют путем вычисления коэффициента профилактики стресса (КПС) по формуле , и при его значениях, больших 137, констатируют наличие профилактического эффекта.