СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ХИЩНЫХ ГРИБОВ ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ И ЖИВОТНЫХ ОТ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ НЕМАТОД Российский патент 1998 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 

Область применения: защита растений, ветеринария.

Сущность: в способе получения препарата хищных грибов путем культивирования штамма гриба Arthrobotrys oligospora BKMF-3062 D на жидкой питательной среде до накопления биомассы не менее 10 г/л по сухому веществу. Препарат представляет собой мицелиальную массу в жидкой форме или в сухой, полученной путем смешивания с наполнителем, продавливания смеси через сетку шнековым смесителем и сушки образовавшихся гранул.

Изобретение относится к технологии производства биопрепаратов для борьбы с нематодами растений и животных.

Известен способ получения препарата хищных грибов, предусматривающий засев маточной культуры штамма гриба Arthrobotrys oligospora BKMF-3062 D на жидкую питательную среду, содержащую мелассу и кукурузный экстракт, культивирование гриба в течение 3 - 6 суток с последующим отделением мицелия фильтрацией и сушкой его в присутствии наполнителя-цеолита (см. прототип).

Однако указанный способ трудоемок, так как требуется специальная операция по отделению мицелия от культуральной жидкости. Указанные параметры культивирования (3 - 6 суток) не позволяют судить о степени готовности глубинной культуры для получения сухого препарата.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа, его реализуемость в промышленных условиях, повышение эффективности получаемого препарата.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного штамма хищного гриба используют штамм Arthrobotrys oligospora BKMF-3062 D, который применяют в глубинном культивировании на питательной среде из доступных компонентов микробиологического производства. При этом получают мицелиальную массу хищного гриба, которая уже в жидком виде обладает высокой эффективностью для борьбы с нематодами растений и животных.

Поставленная цель достигается тем, что мицелиальную массу переводят в сухое состояние путем смешивания с наполнителем- каолином или цеолитом в соотношении 1:2 по весу и сушат доступными способами, предварительно гранулированную смесь, при температуре +30^oC.

В патентной научно-технической литературе неизвестны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию "новизна".

Также, впервые нами установлено, что использование в качестве препарата глубинной культуры хищного гриба Arthrobotrys oligospora штамма BKMF - 3062 D и ее сухой формы позволяет получать биопрепарат с высокой нематоцидной активностью против нематод растений и животных, т.е. предложение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Заявленное техническое решение просто в технической реализации, т.е. промышленно осуществимо.

Пример 1. Питательную среду следующего состава, г/л: меласса - 30,0, кукурузный экстракт - 7,5, однозамещенный фосфорнокислый калий - 5,0, магний сернокислый - 2,0, вода - остальное, инокулируют споровой или мицелиальной культурой гриба штамма Arthrobotrys oligospora BKMF-3062 D. В первом случае используется культура, полученная на агаризованной среде, норма засева составляет 4 мл с титром 4,0 • 10⁴ спор на 100 мл среды, во втором - 5-8% от объема среды 3-х суточной глубинной мицелиальной культурой. Биомассу гриба культивирования составляет 6-7 суток при засеве споровой суспензией и 5 суток - при засеве мицелиальной культурой. Температура культивирования - 26-28^oC. Зрелая мицелиальная масса имеет гелеобразную консистенцию и коричневый цвет с содержанием сухого вещества не менее 10 г/л.

Сухую форму препарата получают путем смешивания биомассы с каолином или цеолитом в соотношении 1: 2 по весу. Полученную смесь гранулируют путем продавливания через сетку шнековым смесителем и образовавшиеся гранулы высушивают воздухом с температурой 30^oC в течение 2-х ч.

Проверка нематофаговой эффективности действия препаративных форм, полученных предложенным способом.

Для проверки сухой формы препарата на нематофаговый эффект использовали суспензию нематод Panagrellus redivivus, в 1,5 мл которой вносили 30 мг сухого препарата.

В таблице 1 приведены данные по испытанию сухого препарата.

Нематофаговую эффективность определяли по формуле:
,
где
Н_э - нематофаговая эффективность,%;
К₀ - число живых особей нематод до внесения препарата;
К₁ - число оставшихся в живых особей нематод через 1 сутки;
К_к - число живых особей в контроле до внесения препарата;
К₂ - число живых особей нематод в контроле через 1 сутки.

Испытания жидкой формы препарата против паразитических нематод растений проведены на почве с внесенной в нее добавкой в виде измельченных корней огурца, сильно пораженных галловой нематодой. Мицелиальную массу гриба - жидкую препаративную форму вносили в почву в дозах: 0,25%, 0,5 и 1,0% к массе почвы. Подсчет нематод показал, что препарат эффективен для снижения численности нематод с максимальным эффектом в случае внесения 1% жидкого препарата в почву (см. табл. 2).

В опытах с рассадой огурца сорта "Кристалл" почва для испытаний была взята из очага сильного поражения растений галловой нематодой. Каждый вариант проверялся с использование 10 растений. В таблице 3 представлены результаты опыта через 1 месяц.

Внесение препарата в почву способствует локализации процесса поражения растений нематодами.

Для проверки эффективности препарата по действию на паразитических нематод животных в чашки Петри помещали суспензию нематод Ostertagia ostertagi, выделенных из фекалий овец. В чашки Петри с нематодами животных вносили препарат, а для сравнения вносили в тех же условиях препарат, полученных поверхностным культивированием на сусло-агаре. Спустя уже 3 ч в вариантах с грибом A. oligospora отмечался аттрактивный эффект, который был сильнее выражен в варианте с препаратом, полученным предложенным способом. Через 1 сутки был подсчитан нематофаговый эффект (см. табл. 4).

Как и в случае с паразитическими нематодами растений, препарат, полученный глубинным культивированием с использованием предложенного способа, обладал наибольшим эффектом.

Реализация предложенного способа позволяет осуществлять промышленную наработку биопрепаратов для защиты растений и животных от паразитических нематод с применением ферментационного оборудования заводов, выпускающих средства защиты растений.

Способ экономически выгоден и сокращает время на получение препарата по сравнению с прототипом, особенно при использовании жидкой формы в 1,5 - 2 раза. В связи с отсутствием спор способ экологически чист в промышленной реализации. Отсутствие необходимости процесса отделения биомассы от культуральной жидкости делает получение препарата практически безотходным, что также технологически и экологически нецелесообразно.

Изобретение относится к технологии производства биопрепаратов для борьбы с нематодами растений и животных. Способ предусматривает культивирование гриба Arthrobotrys oligospora ВКМF 3062 L на жидкой пительной среде, содержащей (г/л): Мелассу - 30,0 Кукурузный экстракт 7,5 Однозамещенный фосфорнокислый калий 5,0 Магний сернокислый 2,0 и воду до накопления мицелиальной массы не менее 10 г/л по сузосу веществу. Полученную мицелиальную массу используют в качестве препарата. В нее можно вводит наполнитель, в качестве которого используют каолин или цеолит в соотношении мицелиальная масса: наполнитель 1:2. Смеси мицелиальной массы и наполнителя продавливают через сетку шнековым смесителем и полученные гранулы высушивают. 2 з.п.ф-лы, 4 табл., 1пр.

1. Способ получения препарата хищных грибов для защиты растений и животных от паразитических нематод, предусматривающий культивирование штамма гриба Arthrobotrys oligospora ВКМF - 3062 Д на жидкой питательной среде на основе мелассы и кукурузного экстракта до накопления мицелиальной массы, отличающийся тем, что культивирование гриба осуществляют до накопления мицелиальной массы не менее 10 г/л по сухому веществу, при этом препарат представляет собой мицелиальную массу в жидкой форме или в сухой, полученной путем смешивания с наполнителем, продавливания смеси через сетку шнековым смесителем и сушки образовавшихся гранул. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве наполнителя используют каолин или цеолит в соотношении мицелиальная масса : наполнитель 1 : 2. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в среду дополнительно вносят однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и воду при соотношении, г/л:
Меласса - 30,0
Кукурузный экстракт - 7,5
Однозамещенный фосфорнокислый калий - 5,0
Магний сернокислый - 2,0
Вода - Остальноео